陳傳斌，瞿明仁，梁 歡，鄒必成，龍 凡，陳發(fā)根，熊智輝，林德發(fā)， 鄭友昌，翟洪軍，許蘭嬌*

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 江西省動物營養(yǎng)重點實驗室，江西 南昌330045；2.共青城艾麗曼動物營養(yǎng)有限公司，江西 共青 332020)

微量元素是機體內(nèi)各種生理生化代謝正常運行所必需的，它不僅是許多酶反應(yīng)的輔助因子，也是某些酶的必要因子[1-3]。微量元素的缺乏可導(dǎo)致動物生長遲緩、免疫力紊亂、貧血等[4-6]。一般情況下，正常肉雞中豆粕含量在30%左右，可以滿足肉雞對銅的需要量。當(dāng)在日糧中添加超過動物營養(yǎng)需要的微量元素時，會促進動物的生長，提高飼料利用率[7-8]。目前，飼糧中所使用的微量元素添加劑普遍是無機鹽氧化物形式的無機微量元素，如硫酸銅、硫酸亞鐵、氧化鋅等，因其價格低廉，工藝流程簡單，經(jīng)濟效益好而受到養(yǎng)殖者的青睞。WANG 等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)日糧中添加50 mg/kg的銅(硫酸銅)可提高肉雞的生長性能和免疫系統(tǒng)。此外，SUN 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧添加160 mg/kg 硫酸亞鐵時，對肉雞促生長效果最佳，可改善肉雞氧化狀態(tài)和免疫功能。但無機微量元素在生產(chǎn)應(yīng)用過程會出現(xiàn)諸多問題，如劑量大、易氧化、適口性差、利用率低、對一些營養(yǎng)成份(如維生素)有破壞性，且污染環(huán)境。為了克服無機微量元素的不足，提高其他營養(yǎng)素的利用率，研制使用包被復(fù)合微量元素是今后發(fā)展的趨勢。包被復(fù)合微量元素具有顆粒均勻、流散性好、混合均勻度高、粉塵少等特點。SHEN等[11]研究發(fā)現(xiàn)，包被氧化鋅(380或570 mg Zn/kg)可以通過促進腸道發(fā)育、保護腸黏膜屏障免受損傷、刺激黏膜免疫系統(tǒng)和調(diào)節(jié)微生物群組成來緩解仔豬腹瀉的發(fā)生率。因此，本研究旨在探討不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血液生化指標(biāo)、抗氧化能力和免疫功能的影響，確定包被復(fù)合微量元素適宜添加水平，為包被微量元素在肉雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料復(fù)合微量元素產(chǎn)品購自共青城艾麗曼動物營養(yǎng)有限公司，具體產(chǎn)品成分見表1?？焖傩忘S羽肉雞購自廣東溫氏家禽有限公司。

表1 產(chǎn)品成分值 mg/kg

1.2 試驗設(shè)計試驗選取1日齡體質(zhì)量為(32.61±0.60) g、健康狀況良好的雄性黃羽肉雞300只，隨機分為5個處理組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。處理A、B、C、D、E組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加200，400，600，800，1 000 mg/kg包被復(fù)合微量元素。各處理組微量元素添加量(計算值)見表2。

表2 各處理組日糧微量元素添加量 mg/kg

1.3 試驗日糧基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，試驗日糧按照我國NY/T 33-2004 《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》中推薦的肉雞營養(yǎng)需要，按前期(1～28日齡)和后期(29～56日齡)兩個階段進行配制，具體配方組成及營養(yǎng)水平見表3。

表3 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)) %

1.4 飼養(yǎng)管理試驗前對雞舍進行全面清掃、沖洗和熏蒸消毒(高錳酸鉀∶甲醛 = 1∶2),24 h，通風(fēng)3 d。試驗肉雞采用4層籠養(yǎng)，每籠10只雞。進雛前1周舍內(nèi)溫度控制在(34±1)℃，此后每天降低1℃，直至(24±1)℃。整個試驗過程保證肉雞自由采食和飲水，全天24 h光照，自然通風(fēng)，按照常規(guī)免疫接種程序?qū)θ怆u進行免疫接種。

1.5 樣品采集與處理試驗第28和56天時，經(jīng)翅靜脈采集血樣，4℃、3 500 r/min離心10 min，分離血清，-20℃保存待測。試驗第55天晚上19:00斷料，禁食12 h，試驗第56天早上7:00，期間自由飲水。每個重復(fù)隨機選擇1只體質(zhì)量接近該組平均體質(zhì)量的健康肉雞，通過斷頸處死試驗雞，切除胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟并測質(zhì)量。在冰盒上用PBS和DEPC溶液將肝臟沖洗干凈，并用吸水紙吸取殘余液體后分裝于凍存管中，迅速放入液氮中，-80℃保存待測。

1.6 測定指標(biāo)與方法

1.6.1血清生化指標(biāo) 采用cobas 8000全自動生化儀測定血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)濃度和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性，試劑盒購自羅氏公司。

1.6.2血清抗氧化指標(biāo) 按照試劑盒說明書方法檢測血清總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6.3肝臟抗氧化能力 準(zhǔn)確稱取肝臟，按質(zhì)量(g)∶體積(mL)的比例，加入9倍體積的生理鹽水，在低溫高速組織研磨機下進行機械勻漿制成10%的肝臟組織勻漿液，離心取上清液待測。按照試劑盒說明書方法進行BCA蛋白定量，同時檢測肝臟勻漿液的T-AOC、MDA含量和SOD、GSH-Px活性，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6.4血清免疫指標(biāo) 按照試劑盒說明書方法檢測血清免疫球蛋白(IgA、IgM和IgG)水平，試劑盒購自北京華英生物技術(shù)研究所。

1.6.5免疫器官指數(shù) 取胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟用吸水紙吸取其殘留的血液后測質(zhì)量，根據(jù)以下公式測定免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)(g/kg)= 免疫器官鮮質(zhì)量(g)/宰前活體質(zhì)量(kg)×100%。

2 結(jié)果

2.1 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響由表4可知，28日齡時，各組間血清TP、ALB、Glu、CHO、TG、HDL-C、LDL-C 濃度和AST、ALP活性差異不顯著(P>0.05)。56日齡時，D、E組血清Glu濃度顯著高于A、B、C組(P<0.05)，A組血清CHO濃度顯著高于C、D、E組(P<0.05)，各組間血清TP、ALB、TG、HDL-C、LDL-C濃度和AST、ALP活性差異不顯著(P>0.05)。

表4 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響

2.2 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響由表5可知，28日齡時，B、C、D、E組的血清GSH-Px活性顯著高于A組(P<0.05)，各組間血清T-AOC、SOD活性和MDA含量差異不顯著(P>0.05)。56日齡時，B、C、D、E組的血清T-AOC能力和SOD活性顯著高于A組(P<0.05)，D、E組的血清GSH-Px活性顯著高于A、B、C組(P<0.05)，各組間血清MDA含量差異不顯著(P>0.05)。

表5 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞肝臟抗氧化功能的影響由表6可知，B、C、D、E組的肝臟T-AOC能力和GSH-Px活性顯著高于A組(P<0.05)，各組間肝臟MDA含量和SOD活性差異不顯著(P>0.05)。

表6 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對56日齡黃羽肉雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清免疫指標(biāo)的影響由表7可知，28日齡時，C、D、E組的血清IgA水平顯著高于A組(P<0.05)，各組間血清IgM和IgG水平差異不顯著(P>0.05)。56日齡時，D、E組的血清IgM水平顯著高于A組(P<0.05)，C、D、E組的血清IgG水平顯著高于A組(P<0.05)，各組間血清IgA水平差異不顯著(P>0.05)。

表7 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清免疫指標(biāo)的影響 g/L

2.5 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響由表8可知，各組間胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊和肝臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表8 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對56日齡黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響 %

3 討論

3.1 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響LEESON[12]研究表明，在日糧中添加微量元素可能會降低家禽中的CHO水平。在本試驗中，日糧補充包被復(fù)合微量元素降低了56日齡肉雞血清CHO濃度，這與WU等[13]在肉雞中的研究結(jié)果相似。動物機體內(nèi)的CHO來源于飼料或生物合成，生物合成主要發(fā)生在非反芻動物的肝臟中[14]。在大鼠體內(nèi)的一項研究表明，日糧中微量元素缺乏可以通過增加谷胱甘肽的含量間接上調(diào)CHO的生物合成速率限制酶3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的活性[15]。也有研究表明，日糧中添加微量元素可降低肉雞[16]和大鼠[17]的CHO濃度。此外，在本研究中，日糧補充包被復(fù)合微量元素提高了56日齡肉雞血清Glu濃度，這可能由于包被材料是多糖、淀粉引起的。

3.2 包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞抗氧化功能的影響根據(jù)家禽體內(nèi)脂質(zhì)含量較容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的特點[18]，選取T-AOC、SOD、GSH-Px、MDA作為衡量動物機體抗氧化能力的綜合指標(biāo)。T-AOC是衡量機體抗氧化功能的綜合指標(biāo)，缺乏微量元素(銅、鐵、鋅等)會對動物機體抗氧化系統(tǒng)和脂質(zhì)代謝產(chǎn)生影響。MDA含量可以反映動物機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的強度，也可以間接反映氧化損傷的程度[19]。相反，酶清除劑，如GSH-Px和SOD作為抗氧化防御的第一道防御，具有清除體內(nèi)氧化自由的作用[20]。機體缺銅可降低動物機體內(nèi)SOD和GSH-Px的活性。本試驗結(jié)果表明，日糧添加包被復(fù)合微量元素提高了28日齡肉雞血清GSH-Px活性和56日齡肉雞血清T-AOC能力、SOD和GSH-Px活性。我們也發(fā)現(xiàn)，日糧添加包被復(fù)合微量元素也提高了56日齡肉雞肝臟中T-AOC能力和GSH-Px活性。研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加銅可提高血清SOD和GSH-Px活性[21]。SUTTLE[22]研究表明，添加微量元素可以提高血清抗氧化酶的活性，從而消除身體產(chǎn)生的氧化自由基。ZHANG等[23]研究發(fā)現(xiàn)，通過增加微量元素的補充量，無論其形式如何，肝臟的抗氧化狀態(tài)都得到了改善。這可能由于包被復(fù)合微量元素的相互作用，提高其他微量元素的消化吸收，如硒與銅、鐵和鋅有協(xié)同作用，硒能夠促進銅、鐵和鋅的吸收與利用[24]。故補充包被復(fù)合微量元素對肉雞抗氧化具有一定程度的影響，SOD和GSH-Px活性隨著微量元素的增加而提高。

3.3 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對黃羽肉雞免疫能力的影響微量元素能增強非特異性免疫功能，提高機體免疫力。WU等[21]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中補充微量元素可以避免中性粒細(xì)胞功能受損，增強身體免疫系統(tǒng)。有報道在日糧中補充微量元素增加了血清IgA、IgM和IgG水平[25-26]。在本試驗中發(fā)現(xiàn)，日糧添加包被復(fù)合微量元素會提高28日齡肉雞血清IgA水平，56日齡血清IgM和IgG水平，與上述結(jié)果相似。此外，也有研究表明，在日糧中添加納米銅不會影響肉雞血清中的免疫球蛋白水平[27]。血清免疫球蛋白水平的提高可能由于吞噬細(xì)胞受到某些因素的刺激，但包被復(fù)合微量元素對雞免疫指標(biāo)的影響機制尚不清楚，有待進一步研究。

家禽免疫器官主要有胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟。免疫器官的狀況是評價家禽免疫機能的重要指標(biāo)，且家禽免疫機能的強弱與免疫器官指數(shù)成正比[28]。M’SADEQ等[29]研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加不同來源的微量元素對肉雞胸腺、脾臟、法氏囊相對質(zhì)量沒有顯著影響。也有研究表明，日糧添加硫酸鋅和氨基酸鋅對肉雞免疫器官指數(shù)有提高趨勢，但無顯著性差異[30]。本試驗結(jié)果顯示，日糧添加包被復(fù)合微量元素對胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊和肝臟指數(shù)無顯著性影響。這可能由于包被復(fù)合微量元素在肉雞機體內(nèi)具有更高的吸收利用率，其中微量元素鋅與機體免疫關(guān)系密切，較低水平的包被微量元素水平也能滿足肉雞對鋅的需要。

綜上所述：日糧添加400 mg/kg包被復(fù)合微量元素可以提高黃羽肉雞血清和肝臟中T-AOC和GSH-Px活性，添加600 mg/kg可以降低血清膽固醇濃度，提高血清IgA、IgG水平，因此適宜添加劑量為400～600 mg/kg。