賀顯晶，劉 嬌，王志慧，武 瑞，郭東華*

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，大慶 163319； 2.佳木斯大學(xué)，佳木斯 154007)

牛源壞死梭桿菌(Fusobacteriumnecrophorum，F(xiàn)n)是一種革蘭陰性多形桿狀專性厭氧菌，是牛肝膿腫、腐蹄病和壞死性喉炎的主要致病菌，同時(shí)在奶牛乳房炎和子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生中也具有重要作用，在牛群感染中具有普遍性的趨勢(shì)。細(xì)菌黏附宿主細(xì)胞是病原菌建立感染的關(guān)鍵步驟，而有關(guān)于牛源壞死梭桿菌黏附相關(guān)蛋白研究尚屬探索階段，因此深入開展牛源壞死梭桿菌相關(guān)黏附蛋白研究，對(duì)闡明牛壞死梭桿菌病的致病機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)，也為動(dòng)物厭氧菌病的機(jī)制研究提供參考。

外膜蛋白(outer membrane protein，OMPs)是革蘭陰性細(xì)菌外膜的主要結(jié)構(gòu)，在細(xì)菌黏附宿主細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。壞死梭桿菌根據(jù)DNA同源性分為F.necrophorumsubsp.necrophorum(Fnn亞種)和F.necrophorumsubsp.funduliforne(Fnf亞種)[1-2]。不同亞種壞死梭桿菌的OMPs譜存在很大差異，這也解釋了不同亞種在毒性及參與壞死梭桿菌感染發(fā)病機(jī)制方面的差異[3]。43K OMP(43 ku outer membrane protein)是本課題組首次鑒定的Fnn亞種牛源壞死梭桿菌的主要OMPs，其與梭菌屬其他成員的OMPs表現(xiàn)出高度的相似性[4]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，43K OMP在牛源壞死梭桿菌不同分離株中廣泛存在[5]。因與壞死梭桿菌同菌屬的其他厭氧菌如具核梭桿菌、放線桿菌等對(duì)宿主細(xì)胞的黏附是由其表面的外膜蛋白介導(dǎo)[2, 6-8]。據(jù)此，作者推測(cè)43K OMP是牛源壞死梭桿菌的一種重要黏附相關(guān)蛋白，在牛源壞死梭桿菌致病中發(fā)揮重要作用。目前，有關(guān)于牛源壞死梭桿菌43K OMP的功能研究尚屬探索階段，為更好地揭示43K OMP的黏附功能，本研究通過(guò)構(gòu)建43K OMP原核表達(dá)系統(tǒng)，進(jìn)一步研究其對(duì)細(xì)菌黏附細(xì)胞的影響及43K OMP對(duì)細(xì)胞的黏附作用，為牛源壞死梭桿菌43K OMP的生物學(xué)功能拓展研究奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株、細(xì)胞及載體

牛源壞死梭桿菌A25菌株(Fusobacteriumnecrophorum，F(xiàn)nn亞種，ATCC 25286)保存于黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)獸醫(yī)分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室；牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞(BNCC 340413)購(gòu)于北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)有限公司；牛乳腺上皮細(xì)胞為MAC-T細(xì)胞系，鼠乳腺上皮細(xì)胞(EpH4-Ev)由吉林大學(xué)農(nóng)學(xué)部動(dòng)物生理教研室惠贈(zèng)，小鼠肝細(xì)胞(AML12 SCSP-550)購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院干細(xì)胞庫(kù)；pET-32a表達(dá)載體、E.coliBL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室保存；43K OMP多克隆抗體血清、牛源壞死梭桿菌高免血清、43K OMP單克隆抗體、兔陰性血清及鼠陰性血清由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)獸醫(yī)分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備并保存[9-11]。

1.2 主要試劑

細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、質(zhì)粒小提取試劑盒購(gòu)于天根生物技術(shù)有限公司，ExTaqDNA聚合酶購(gòu)于大連寶生物工程有限公司，DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、DMEM/F12培養(yǎng)基、HEPE，LiCl、LDS、SLS、ITS、地塞米松均購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，F(xiàn)BS購(gòu)于CLARK公司，SDS-PAGE凝膠配制試劑盒、DMSO購(gòu)于索萊寶生物技術(shù)有限公司，Alexa Fluor 488標(biāo)記山羊抗兔IgG、Alexa Fluor 488標(biāo)記山羊抗鼠IgG購(gòu)于碧云天生物技術(shù)有限公司，辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG和山羊抗鼠山羊購(gòu)于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，所有引物合成由上海生工生物工程股份有限公司完成。

1.3 細(xì)菌的培養(yǎng)

牛源壞死梭桿菌A25菌株在預(yù)先還原厭氧的苛養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中37 ℃厭氧培養(yǎng)12 h以上備用。用于重組表達(dá)的大腸桿菌BL21 DE3在100 μg·mL-1氨芐青霉素的LB肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.4 天然43K OMP的提取

參照王志慧[9]和徐晶(Xu)等[12]的方法提取牛源壞死梭桿菌天然43K OMP。牛源壞死梭桿菌A25菌株1∶100接種于FAB液體中厭氧培養(yǎng)至OD600nm為0.6～0.8時(shí)，將500 mL菌液用無(wú)菌的生理鹽水清洗3次，5 000×g離心5 min，將菌液沉淀用50 mL無(wú)菌的PBS(pH=7.2)重懸后置于冰水混合物中，功率60 W，超聲時(shí)間6 s，間歇6 s進(jìn)行超聲破碎1 h。將菌液混合物4 ℃，3 000×g離心30 min，收集上清。收集的上清進(jìn)行4 ℃，12 000×g離心30 min，收集沉淀。將沉淀用50 mL 0.5%的SLS重懸后，室溫孵育30 min，4 ℃，12 000×g再次離心30 min，棄上清取沉淀。將沉淀用25 mL 2% LDS的20 mmol·L-1的HEPEs-LiCl(pH=7.4)重懸后，4 ℃孵育30 min。提取液經(jīng)4 ℃，12 000×g離心30 min，收集沉淀。將沉淀用2 mL 20 mmol·L-1的HEPEs混合均勻，分裝，提取后的天然43K OMP經(jīng)SDS-PAGE分析后，43K OMP重組蛋白的表達(dá)純化復(fù)性及OMP的去內(nèi)毒素處理由北京海蓋德科技有限公司完成。

1.5 43K OMP重組蛋白的表達(dá)與純化

參照課題組前期的方法進(jìn)行克隆表達(dá)牛源壞死梭桿菌43K OMP基因[10-11]，參照牛源壞死梭桿菌H05菌株43K OMP基因序列(GenBank accession No.JQ740821.1)PCR擴(kuò)增43K OMP基因，在序列的5′端和3′端加入BamHⅠ和XhoⅠ兩種酶切位點(diǎn)，隨后克隆連接至表達(dá)載體pET-32a上，將pET-32a-43K OMP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21 DE3細(xì)胞中。將攜帶pET-32a-43K OMP質(zhì)粒的大腸桿菌BL21 DE3細(xì)胞標(biāo)記為H2019，將H2019經(jīng)IPTG(濃度為1 mmol·L-1)37 ℃誘導(dǎo)表達(dá)4 h，超微破碎后，應(yīng)用蛋白純化試劑盒對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化，將純化后的重組蛋白進(jìn)行Western blot鑒定。重組蛋白純化及復(fù)性委托北京海蓋德科技有限公司完成。

1.6 H2019與細(xì)胞的黏附試驗(yàn)

分別將牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、MAC-T細(xì)胞、鼠乳腺上皮細(xì)胞及鼠肝細(xì)胞接種于6孔板，5%CO2培養(yǎng)箱，37 ℃培養(yǎng)至密度為90%以上，棄培養(yǎng)液，PBS洗3次。H2019和pET-32a載體的大腸桿菌 BL21 DE3細(xì)胞經(jīng)IPTG 37 ℃誘導(dǎo)3 h后，PBS離心洗3次后，通過(guò)麥?zhǔn)媳葷岱ㄓ貌缓p抗的細(xì)胞培養(yǎng)基將菌液濃度為1×107CFU·mL-1備用。將各孔與IPTG誘導(dǎo)的H2019和pET-32a載體的大腸桿菌 BL21 DE3細(xì)胞37 ℃孵育1 h，棄培養(yǎng)液，PBS洗3～5次，每次3 min，加入1%TritonX-100的PBS 10 min，吸取懸液倍比稀釋后，在含有氨芐抗性的LB固體培養(yǎng)基上37 ℃孵育過(guò)夜，菌落計(jì)數(shù)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.7 天然蛋白競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)

將細(xì)胞接種于6孔板中(1×107·mL-1)，5%CO2培養(yǎng)箱，37 ℃培養(yǎng)至密度為90%以上，每孔加入提取并去內(nèi)毒素的牛源壞死梭桿菌天然43K OMP(100 μg·孔-1)37 ℃孵育1 h。PBS清洗3次，以去除未黏附的OMP。誘導(dǎo)表達(dá)的H2019菌液經(jīng)PBS清洗3次后，用加入10%FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，與細(xì)胞37 ℃共孵育1 h。PBS清洗后收集細(xì)胞懸液倍比稀釋后計(jì)數(shù)。未與OMP共孵育的細(xì)胞作為對(duì)照組。每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.8 抗體抑制試驗(yàn)

將H2019在37 ℃經(jīng)IPTG誘導(dǎo)3 h后，PBS清洗，用10%FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基重懸。將1 mL的細(xì)菌懸液按照1∶200和1∶50的濃度加入43K OMP多抗或單抗37 ℃搖床內(nèi)孵育1 h。將細(xì)胞接種于6孔板中(1×107·mL-1)，5%CO2培養(yǎng)箱中，37 ℃培養(yǎng)至密度為90%以上，經(jīng)PBS清洗后與細(xì)菌懸液共孵育1 h。同時(shí)設(shè)置陰性血清對(duì)照組和細(xì)菌對(duì)照組。PBS清洗3～5次，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.9 蛋白水解試驗(yàn)

將細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)密度至90%左右。將H2019在37 ℃經(jīng)IPTG誘導(dǎo)2 h后，分成4等份，分別與蛋白酶K(0、25、50、100 μg·mL-1)37 ℃孵育2 h，PBS清洗3次后，用10% FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基重懸后，與細(xì)胞共孵育1 h，PBS清洗3～5次，以去除未黏附的細(xì)菌后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.10 43K OMP對(duì)細(xì)胞的黏附試驗(yàn)

將牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞或MAC-T細(xì)胞消化按照1×107·mL-1濃度接種于6孔板，37 ℃培養(yǎng)24 h后，細(xì)胞生長(zhǎng)密度為85%左右，PBS漂洗細(xì)胞3次，4%多聚甲醛4 ℃過(guò)夜固定，PBST漂洗3次，除去多余的固定液。3%BSA室溫封閉2 h，PBST充分漂洗3次。試驗(yàn)組加入重組蛋白或天然43K OMP(終濃度為50 μg·孔-1)，同時(shí)只加PBS的孔作為陰性對(duì)照組，室溫孵育1 h。孵育結(jié)束后，PBST充分漂洗3次，去除未黏附的蛋白和培養(yǎng)基。加入43K OMP單克隆抗體(稀釋度為1∶800)室溫孵育1 h，PBST充分漂洗3次，去除游離抗體，加入Alexa Fluor 488標(biāo)記的二抗(1∶500稀釋)，37 ℃孵育1 h，PBST充分漂洗3次，倒置熒光顯微鏡下觀察43K OMP蛋白與細(xì)胞是否黏附及結(jié)合位置。

1.11 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié) 果

2.1 43K OMP的誘導(dǎo)表達(dá)

H2019經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，菌體超聲破碎物經(jīng)SDS-PAGE分析顯示，在59 ku出現(xiàn)特異性的表達(dá)條帶，表明43K OMP蛋白成功表達(dá)，且目的蛋白以包涵體形式存在于菌體沉淀中(圖1A)。純化蛋白經(jīng)Western blot鑒定，在59 ku處出現(xiàn)明顯的目的條帶(圖1B)。

A.43K OMP重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)(1.蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2.誘導(dǎo)后pET-32a超聲破碎上清；3.誘導(dǎo)后pET-32a超聲破碎沉淀；4.誘導(dǎo)后H2019超聲破碎上清；5.誘導(dǎo)后H2019超聲破碎沉淀)；B. 43K OMP重組蛋白的Western blot鑒定

2.2 H2019對(duì)細(xì)胞的黏附試驗(yàn)結(jié)果

黏附試驗(yàn)結(jié)果表明，與空載體對(duì)照組孵育的細(xì)胞相比，當(dāng)牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、MAC-T細(xì)胞、鼠乳腺上皮細(xì)胞、鼠肝細(xì)胞與誘導(dǎo)的H2019共孵育后，細(xì)胞黏附的細(xì)菌數(shù)量均極顯著增加(P<0.01)(圖2)。

A. BEND；B. MAC-T；C. MMECs；D. AML12; **. P<0.01, ****. P<0.000 1

2.3 天然43K OMP對(duì)H2019黏附宿主細(xì)胞的影響

與未加入天然43K OMP蛋白的對(duì)照組相比，當(dāng)牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、MAC-T細(xì)胞、鼠乳腺上皮細(xì)胞、鼠肝細(xì)胞與天然蛋白預(yù)孵育后，黏附于細(xì)胞上的H2019數(shù)量極顯著降低(P<0.01)(圖3)。

A. BEND；B. MAC-T；C. MMECs；D. AML12; ***. P<0.001, ****. P<0.000 1

H2019與43K OMP多抗共孵育后，黏附于牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、MAC-T細(xì)胞、鼠乳腺上皮細(xì)胞和鼠肝細(xì)胞上的H2019數(shù)量極顯著降低(P<0.01)，且在牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞降低趨勢(shì)更顯著，而陰性血清組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)(圖4)。

A. BEND；B. MAC-T；C. MMECs；D. AML12; **. P<0.01, ****. P<0.000 1

當(dāng)H2019與43K OMP單抗共孵育后，黏附于牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、MAC-T、鼠乳腺上皮細(xì)胞和AML12細(xì)胞的H2019數(shù)量呈現(xiàn)不同程度的降低(P<0.05)，而陰性血清組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)(圖5)。

A. BEND；B. MAC-T；C. MMECs；D. AML12; *. P<0.05, ****. P<0.000 1

2.4 蛋白酶K對(duì)H2019黏附宿主細(xì)胞的影響

將誘導(dǎo)表達(dá)43K OMP的H2019與不同濃度的蛋白酶K(0、25、50、100 μg·mL-1)孵育，SDS-PAGE分析顯示：表達(dá)的43K OMP量被蛋白酶K按劑量依賴性的方式消化降解(圖6 A)。同時(shí)黏附試驗(yàn)也顯示了黏附于牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、MAC-T細(xì)胞、鼠乳腺上皮細(xì)胞和鼠肝細(xì)胞的H2019數(shù)量也呈現(xiàn)劑量依賴性降低(圖6B、C、D和E)。

A. 蛋白酶K對(duì)H2019誘導(dǎo)表達(dá)的影響(1.蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2～5. 蛋白酶K濃度 0、100、50、25 μg·mL-1)；B～E. 蛋白酶K對(duì)H2019黏附牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞 (B)、MAC-T細(xì)胞(C)、鼠乳腺上皮細(xì)胞 (D) 和AML12細(xì)胞 (E) 的影響。**. P<0.01, ****. P<0.000 1

2.5 43K OMP對(duì)細(xì)胞的黏附作用

將牛乳腺上皮細(xì)胞、子宮內(nèi)膜細(xì)胞分別與43K OMP重組蛋白、天然43K OMP蛋白共孵育，間接免疫熒光結(jié)果顯示，43K OMP重組蛋白或天然蛋白組均發(fā)出明顯的綠色熒光，而對(duì)照組無(wú)熒光出現(xiàn)，表明牛源壞死梭桿菌43K OMP能黏附牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞，且綠色熒光分布輪廓與細(xì)胞形態(tài)相似(圖7)。

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3 討 論

細(xì)菌黏附宿主細(xì)胞是細(xì)菌定植和侵襲的先決條件，細(xì)菌對(duì)宿主細(xì)胞的特異性黏附是病原菌感染的重要步驟。牛源壞死梭桿菌作為條件致病菌，對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞及肝竇內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞、蹄部損傷的皮膚組織細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附是牛肝膿腫、腐蹄病、乳房炎及子宮內(nèi)膜炎等疾病感染的重要步驟。在梭桿菌屬中，OMPs對(duì)壞死梭桿菌的黏附和感染至關(guān)重要。與牛源壞死梭桿菌同菌屬的具核梭桿菌中，OMPs在細(xì)菌黏附細(xì)胞、細(xì)菌共聚及生物膜形成中發(fā)揮重要作用。其中，RadD能結(jié)合變形鏈球菌SpaP，介導(dǎo)其與變形鏈球菌或酵母念珠菌的共聚[13-15]。FadA促進(jìn)具核梭桿菌黏附KB、CHO細(xì)胞和胎盤內(nèi)皮細(xì)胞[16-17]，增強(qiáng)牙齦卟啉單胞菌和放線菌的黏附入侵能力[18-19]。Fap2蛋白促進(jìn)具核梭桿菌與癌細(xì)胞的識(shí)別和結(jié)合是直腸癌發(fā)病的重要機(jī)制[20]。而與43K OMP同源性高的具核梭桿菌FomA蛋白在具核梭桿菌黏附宿主細(xì)胞和外膜囊泡致病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[21-23]。因此，推斷43K OMP在牛源壞死梭桿菌上黏附內(nèi)皮細(xì)胞具有潛在作用。

在有關(guān)于牛源壞死梭桿菌黏附機(jī)制的相關(guān)研究中，早期認(rèn)為牛源壞死梭桿菌能通過(guò)血凝素黏附于Vero表面，且牛源壞死梭桿菌黏附瘤胃上皮細(xì)胞也與血凝素相關(guān)[24-25]。通過(guò)抗血凝素血清能降低牛源壞死梭桿菌與兔、鼠等易感動(dòng)物細(xì)胞的黏附[26]。近年來(lái)，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)胰酶能顯著降低壞死梭桿菌黏附腎上腺血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力，表明介導(dǎo)壞死梭桿菌黏附細(xì)胞的是蛋白質(zhì)，推測(cè)起作用的可能是OMPs[27]。同時(shí)，對(duì)Fnn亞種和Fnf亞種壞死梭桿菌的OMPs進(jìn)行系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)相對(duì)分子質(zhì)量為17、24、40和74 ku的OMPs可能與壞死梭桿菌黏附細(xì)胞有關(guān)，且40 ku大小的OMP在壞死梭桿菌黏附細(xì)胞中可能發(fā)揮重要作用[27-30]。43K OMP是首次在牛源壞死梭桿菌臨床分離株H05鑒定的，本課題組前期發(fā)現(xiàn)43K OMP對(duì)牛源壞死梭桿菌黏附BHK-21細(xì)胞上具有一定作用[10,31-32]。同時(shí)，應(yīng)用重組純化的43K OMP免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)43K OMP具有一定的保護(hù)性，且43K OMP與牛源壞死梭桿菌Lkt和Hly截短表達(dá)蛋白PL-4和H2共同制備的亞單位疫苗保護(hù)性更好[33]。

本研究中，以牛子宮內(nèi)膜細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞、鼠乳腺上皮細(xì)胞和鼠肝細(xì)胞為細(xì)胞模型，為進(jìn)一步驗(yàn)證牛源壞死梭桿菌43K OMP對(duì)不同宿主細(xì)胞的黏附特性，將43K OMP基因克隆到pET-32a載體中，隨后在大腸桿菌BL21DE3細(xì)胞上表達(dá)該蛋白。當(dāng)攜帶重組質(zhì)粒(H2019)的大腸桿菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，與細(xì)胞的黏附顯著增加，顯示43K OMP的表達(dá)對(duì)細(xì)菌黏附具有促進(jìn)作用。細(xì)胞與天然蛋白共同孵育，細(xì)菌與多抗或單抗共孵育后，H2019黏附細(xì)胞的數(shù)量明顯降低，天然蛋白或抗體可以降低細(xì)胞與H2019的結(jié)合。其機(jī)制可能是天然蛋白競(jìng)爭(zhēng)了細(xì)胞上的結(jié)合位點(diǎn)，抑制H2019與細(xì)胞的結(jié)合；而抗體中和了H2019表達(dá)的43K OMP，降低H2019對(duì)宿主細(xì)胞的黏附。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)43K OMP的多抗或單抗并不能完全抑制H2019對(duì)細(xì)胞的黏附，提示牛源壞死梭桿菌中還存在未發(fā)現(xiàn)的其他黏附相關(guān)蛋白。而多抗的抑制效果明顯好于單抗與不同抗體的抗原表位差異存在一定的關(guān)系。經(jīng)不同濃度的蛋白酶K處理后，蛋白酶K降解了表達(dá)的43K OMP，隨之H2019黏附數(shù)量呈劑量依賴性降低。間接免疫熒光結(jié)果也顯示了天然43K OMP和重組蛋白均能特異性黏附于細(xì)胞膜表面。因此，43K OMP是牛源壞死梭桿菌的一種重要黏附素，有助于促進(jìn)牛源壞死梭桿菌對(duì)宿主細(xì)胞的黏附和定植。但43K OMP介導(dǎo)牛源壞死梭桿菌黏附機(jī)制尚未可知，43K OMP是通過(guò)宿主細(xì)胞表面的受體蛋白互作介導(dǎo)細(xì)菌黏附，還是與細(xì)胞的多糖作用介導(dǎo)細(xì)菌黏附尚未可知，還需要人們進(jìn)一步研究。深入研究43K OMP介導(dǎo)牛源壞死梭桿菌的黏附機(jī)制，將對(duì)闡明牛源壞死梭桿菌致病機(jī)制具有重要意義。

4 結(jié) 論

43K OMP是牛源壞死梭桿菌的一種重要黏附蛋白，在牛源壞死梭桿菌黏附宿主細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。