張溫樂(lè)，于怡萌，雷軼，戴雪喻，李斌

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海市免疫學(xué)研究所，上海 200025）

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）是一類高表達(dá)白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-2受體α鏈（CD25）和轉(zhuǎn)錄因子叉頭狀蛋白P3（forkhead box P3，F(xiàn)OXP3）的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群。Treg細(xì)胞能夠調(diào)控中樞和外周耐受性，抑制其他免疫細(xì)胞的免疫應(yīng)答，在維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用[1]。大量研究證實(shí)，Treg細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和功能影響一系列自身免疫疾病、急性器官移植免疫排斥的發(fā)生、發(fā)展?，F(xiàn)在Treg細(xì)胞療法包括多克隆Treg細(xì)胞療法、工程化T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）-Treg細(xì)胞療法和嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor-，CAR）-Treg細(xì)胞療法等[2]。目前研究認(rèn)為，抗原特異性Treg細(xì)胞具有抗原特異性，更易于遷移到含有特異性抗原的靶器官，抑制作用優(yōu)于多克隆Treg細(xì)胞[3]。此外，CAR-Treg細(xì)胞由于其不受主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）限制，對(duì)IL-2依賴性較低等優(yōu)點(diǎn)也使得Treg細(xì)胞療法的應(yīng)用更為廣泛[4]。本文對(duì)Treg細(xì)胞療法在自身免疫病和器官移植中的應(yīng)用進(jìn)行總結(jié)和討論，以期為未來(lái)Treg細(xì)胞療法的研究提供參考。

1 Treg細(xì)胞的發(fā)育和抑制功能

1.1 Treg細(xì)胞的可塑性和發(fā)育特征

隨著單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，Treg細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)在發(fā)育過(guò)程、組織微環(huán)境中具有高度異質(zhì)性，不同的亞群具有其特殊的分子標(biāo)志物和狀態(tài)特征。研究顯示，脂肪Treg細(xì)胞中高表達(dá)ST2或CD73亞型，在脂肪組織響應(yīng)胰島素信號(hào)和胰島素抵抗糖尿病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[5]。根據(jù)細(xì)胞發(fā)育與組織分布特征，體內(nèi)Treg細(xì)胞可以分為胸腺中的tTreg細(xì)胞，在外周中的由Tcon細(xì)胞分化來(lái)的pTreg細(xì)胞，以及在細(xì)胞因子IL-2和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor beta，TGF-β）存在時(shí)，經(jīng)由抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生的iTreg細(xì)胞[6]。相比于其他效應(yīng)T細(xì)胞通過(guò)糖酵解途徑分化和維持其特定功能，Treg細(xì)胞的分化和成熟需要經(jīng)歷FOXP3介導(dǎo)的代謝重編程，從而利用脂肪酸氧化途徑產(chǎn)生代謝物和能量[7]。除此以外，Treg細(xì)胞中FOXP3的多個(gè)轉(zhuǎn)錄、表觀遺傳機(jī)制影響FOXP3的轉(zhuǎn)錄和蛋白穩(wěn)定性，例如FOXP3基因上保守的非編碼序列CNS2，其中的Treg特異性去甲基化區(qū)域能招募FOXP3、CREB等轉(zhuǎn)錄因子來(lái)穩(wěn)定FOXP3自身的轉(zhuǎn)錄，而乙酰化、泛素化等翻譯后修飾機(jī)制也能夠影響FOXP3的功能和穩(wěn)定性，從而影響Treg細(xì)胞的發(fā)育和正常抑制功能[8]。

1.2 Treg細(xì)胞的抑制功能

Treg細(xì)胞能通過(guò)直接抑制和旁觀抑制的方式發(fā)揮免疫耐受作用。在直接抑制中，Treg細(xì)胞以抗原特異性的方式抑制靶細(xì)胞；在旁觀抑制中，由于與抗原特異性應(yīng)答的距離很近，針對(duì)一種抗原的特異性Treg細(xì)胞也能抑制針對(duì)其他抗原的免疫應(yīng)答，這種抗炎反應(yīng)能夠恢復(fù)免疫耐受并維持免疫穩(wěn)態(tài)[9-10]。Treg細(xì)胞的抑制功能主要通過(guò)細(xì)胞間接觸依賴的作用機(jī)制以及分泌抑制性細(xì)胞因子來(lái)實(shí)現(xiàn)，如通過(guò)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(cytotoxic T lymphocyteassociated antigen-4，CTLA-4）、淋巴細(xì)胞活化基因3蛋白（lymphocyte activation gene-3，LAG-3）等抑制受體直接接觸靶細(xì)胞或分泌抗炎細(xì)胞因子IL-10、IL-35和TGF-β來(lái)抑制免疫反應(yīng)，Treg細(xì)胞也通過(guò)表面IL-2高親和力受體CD25與效應(yīng)T細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合IL-2，導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞缺失存活必需的IL-2信號(hào)，進(jìn)而發(fā)生凋亡[11]。另有研究發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞還能通過(guò)作用于樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC），影響DC細(xì)胞的成熟和功能表達(dá)，干擾T細(xì)胞的激活，從而介導(dǎo)免疫抑制[12]。

2 Treg細(xì)胞治療

2.1 Treg細(xì)胞回輸療法

Treg細(xì)胞回輸治療是將自體Treg細(xì)胞體外擴(kuò)增后回輸至患者疾病部位，從而更好地發(fā)揮免疫抑制功能以治療相關(guān)疾病。Treg細(xì)胞治療需要大量的細(xì)胞進(jìn)行改造與回輸，首要問(wèn)題就是Treg細(xì)胞的來(lái)源、純化與擴(kuò)增。由于pTreg在Foxp3基因表觀修飾和效應(yīng)分子表達(dá)上穩(wěn)定性更差，并不適合作為細(xì)胞治療的原料；而通過(guò)初始CD4陽(yáng)性T細(xì)胞（Na?ve CD4+T細(xì)胞）誘導(dǎo)得到的iTreg細(xì)胞以及tTreg細(xì)胞，在體外也具有良好的增殖能力和穩(wěn)定的抑制功能，多用于適合細(xì)胞治療的體外擴(kuò)增，從而獲得大量具有抑制功能的Treg細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞回輸治療[13-17]。自體Treg細(xì)胞回輸已經(jīng)被證實(shí)能改善潰瘍性結(jié)直腸炎和膽管炎疾病癥狀[18]；而在1型糖尿?。╰ype 1 diabetes mellitus，T1DM）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫疾病中進(jìn)行的臨床試驗(yàn)也證實(shí)，回輸體外擴(kuò)增的Treg細(xì)胞在體內(nèi)依然具有穩(wěn)定的抑制能力并能夠緩解組織炎癥[19-20]。

然而，多克隆Treg細(xì)胞回輸也存在著一些弊端。首先，為達(dá)到相同的治療效果，相較于單克隆Treg回輸，多克隆Treg細(xì)胞的回輸需要更多的細(xì)胞數(shù)量；其次，由于多克隆Treg細(xì)胞不針對(duì)某一特定的抗原，因此其可能對(duì)機(jī)體整體的免疫水平產(chǎn)生破壞，從而導(dǎo)致感染或腫瘤風(fēng)險(xiǎn)的增加[21]。如何在保證Treg細(xì)胞回輸治療療效的前提下，確保Treg細(xì)胞回輸?shù)陌踩匀匀皇且粋€(gè)不小的挑戰(zhàn)。

2.2 CAR-Treg細(xì)胞療法

CAR是一種人工受體，它的基本結(jié)構(gòu)由可以特異性結(jié)合抗原的胞外段和可以進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的胞內(nèi)段組成。近年來(lái)，隨著人們對(duì)T細(xì)胞的工程化改造的深入研究，CAR的結(jié)構(gòu)越來(lái)越復(fù)雜，功能也逐漸強(qiáng)大。CAR最常見(jiàn)的胞外段是單鏈可變區(qū)片段（ScFv），它是由一段連接肽連接起抗體的輕鏈、重鏈可變區(qū)組成[22]。然而，單鏈抗體獲得的難度較大，限制了上述CAR的應(yīng)用，因此有研究人員設(shè)計(jì)了胞外段為自然抗體構(gòu)型的CAR，它由兩條鏈組成，被稱作雙鏈CAR（dcCAR），包含了免疫球蛋白輕鏈、重鏈及其恒定區(qū)，在一些情況下，這種dcCAR比含單鏈可變區(qū)的CAR更為穩(wěn)定[23]。此外，最近有研究提出了一種新型的抗原識(shí)別區(qū)域可變的CAR，即SUPRA CAR，它可以實(shí)現(xiàn)在不重新設(shè)計(jì)CAR的情況下切換抗原識(shí)別區(qū)域，從而變更靶細(xì)胞；SUPRA CAR應(yīng)用了一個(gè)轉(zhuǎn)接器-標(biāo)簽系統(tǒng)，靶向抗原的特異性抗體上連有通用的標(biāo)簽（往往是生物素/FITC/亮氨酸拉鏈），而胞外段CAR則是這些標(biāo)簽特異性的抗體，充當(dāng)“轉(zhuǎn)接器”的作用，通過(guò)調(diào)節(jié)CAR分子對(duì)標(biāo)簽的親和度，可以對(duì)其介導(dǎo)的細(xì)胞激活強(qiáng)度進(jìn)行微調(diào)[24]。除了對(duì)胞外段的改造，發(fā)揮信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的胞內(nèi)段也經(jīng)歷了更新與優(yōu)化。第一代CAR的胞內(nèi)段只包含CD3ζ結(jié)構(gòu)域，第二代CAR在此基礎(chǔ)上增添了一個(gè)額外的共刺激結(jié)構(gòu)域（CD28或CD137），而第三代CAR則結(jié)合了CD28和CD137兩個(gè)共刺激結(jié)構(gòu)域，激活信號(hào)由CD3ζ產(chǎn)生，而共刺激分子則增強(qiáng)了T細(xì)胞因子的產(chǎn)生、生存和進(jìn)一步增殖的能力。第四代CAR在第三代CAR原有功能的基礎(chǔ)上還額外增加了調(diào)節(jié)T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的功能，作用于CAR-Treg，TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子，從而增強(qiáng)Treg細(xì)胞抑制功能[3,25]。

CAR結(jié)構(gòu)的改造對(duì)CAR-Treg細(xì)胞的體外增殖和功能表達(dá)同樣有重要意義。在嵌合抗原受體-傳統(tǒng)T細(xì)胞（chimeric antigen receptor-conventional T cell therapy，CAR-Tconv）的應(yīng)用中，抗原非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)會(huì)導(dǎo)致進(jìn)行性的CAR-T失活與耗竭，從而限制CAR-T的功能；在CAR-Treg中，4-1BB共刺激結(jié)構(gòu)域（co-stimulatory domains，CSD）相關(guān)的抗原非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在細(xì)胞激活和增殖方面會(huì)產(chǎn)生比CAR-Tconv更顯著的影響，且與CD28 CAR-Treg相比，4-1BB CAR-Treg表現(xiàn)出譜系穩(wěn)定性和抑制能力的下降，但若將4-1BB CAR-Treg在體外擴(kuò)增過(guò)程中短暫暴露于mTOR抑制劑和維生素C中，則可以改善4-1BB CAR-Treg在體內(nèi)的功能和過(guò)繼轉(zhuǎn)移后的增殖效果，降低抗原非依賴性信號(hào)帶來(lái)的的負(fù)面影響[26]。另外，與自體回輸Treg細(xì)胞療法一樣，CAR-Treg細(xì)胞療法除了需要工程化改造Treg細(xì)胞外，也需要對(duì)Treg細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)和增殖。相關(guān)研究表明，在體內(nèi)CD4+CD25hiCD127lowTreg細(xì)胞中存在CD45RA+和CD45RO+兩群Treg細(xì)胞，表達(dá)CD45RO的細(xì)胞在后續(xù)體外的增殖、誘導(dǎo)過(guò)程中的效率和穩(wěn)定性都強(qiáng)于表達(dá)CD45RA的Treg細(xì)胞[27]。嵌合抗原受體改造Treg細(xì)胞治療過(guò)程及關(guān)鍵點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

圖1 嵌合抗原受體改造Treg細(xì)胞治療Figure 1 Chimeric antigen receptor-modified Treg cell therapy

3 Treg細(xì)胞療法在自身免疫疾病中的應(yīng)用

自身免疫病是指由于免疫細(xì)胞識(shí)別自身抗原，從而導(dǎo)致免疫耐受和免疫穩(wěn)態(tài)被破壞的疾病。多個(gè)研究已經(jīng)證實(shí)，Treg細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T1DM等自身免疫病中起著至關(guān)重要的作用[28-29]。研究發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞主要調(diào)控因子FOXP3突變而影響Treg功能，導(dǎo)致免疫功能失調(diào)、多發(fā)性內(nèi)分泌病、炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）及免疫失調(diào)-多內(nèi)分泌腺病-腸 病-X連 鎖 綜 合 征（immunodysregulation，polyendocrinopathy，enteropathy，X-linked syndrome，IPEX）等嚴(yán)重的自身免疫疾病[30]。因此，Treg細(xì)胞療法在自身免疫疾病的治療中具有極為重要的意義，近年來(lái)有較多研究聚焦于其在T1DM與IBD方面的應(yīng)用。

3.1 1型糖尿病

T1DM是一種由于自身免疫細(xì)胞識(shí)別并破壞胰島β細(xì)胞，導(dǎo)致胰島素缺乏而產(chǎn)生的自身免疫病。多項(xiàng)研究表明，在非肥胖糖尿病（non-obese diabetic，NOD）小鼠中，胰島素為自身免疫細(xì)胞識(shí)別的主要靶標(biāo)[31]。在T1DM患者中也發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞的免疫抑制功能有一定程度的降低[32]。在NOD小鼠構(gòu)建的T1DM模型中發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞的發(fā)育、功能以及譜系穩(wěn)定性均發(fā)生改變，從而導(dǎo)致了Treg細(xì)胞的失能；NOD小鼠胰島中浸潤(rùn)的主要細(xì)胞群Tbet+Treg細(xì)胞的缺失會(huì)加速糖尿病的發(fā)生，提示其在抗胰島自身免疫治療中可能發(fā)揮重要作用[33]。

Treg細(xì)胞療法在T1DM的治療中前景廣闊。在T1DM動(dòng)物模型中，輸注擴(kuò)增的抗原特異性Treg細(xì)胞在阻斷和逆轉(zhuǎn)糖尿病方面顯示出良好的效果[34]。另有研究利用TCR改造的Treg細(xì)胞回輸，證實(shí)了特異性TCR（如谷氨酸脫羧酶、胰島特異性等）的Treg細(xì)胞回輸能抑制抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖[35]。但由于TCR改造的Treg細(xì)胞療法的應(yīng)用受到MHC限制，因此后續(xù)研究多集中于開(kāi)發(fā)針對(duì)其他糖尿病抗原的CAR-Treg細(xì)胞療法。通過(guò)將第二代CAR和FOXP3基因轉(zhuǎn)導(dǎo)到CD4+T細(xì)胞的方式可制備胰島素特異性CAR-Treg細(xì)胞。胰島素特異性CAR-Treg細(xì)胞具有與天然Treg細(xì)胞相似的表型，并且也能在體外抑制抗原特異性T細(xì)胞，但其回輸至NOD小鼠后未在體內(nèi)發(fā)現(xiàn)CAR-Treg細(xì)胞[36]。因此如何改造Treg細(xì)胞，使得CAR-Treg細(xì)胞回輸后保持穩(wěn)定性和有效的抑制能力仍需進(jìn)一步探索。

綜上所述，基于Treg細(xì)胞的免疫治療能夠重新平衡免疫系統(tǒng)，逆轉(zhuǎn)T1DM的疾病表型，但如何解決Treg細(xì)胞功能的復(fù)雜性和穩(wěn)定性，以及找到效果更好、更安全的CAR-Treg細(xì)胞療法仍是未來(lái)需要解決的難題。

3.2 炎癥性腸病

IBD是以胃腸道慢性炎癥為特征的自身免疫病。其中，潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）和克羅恩?。–rohn,s disease，CD）是最常見(jiàn)的IBD類型。在CD中，整個(gè)胃腸道的所有層都可能受到炎癥的影響，而在UC中，炎癥主要發(fā)生在結(jié)腸黏膜中[37]。研究表明，腸道菌群與免疫反應(yīng)之間的失衡可能是造成IBD的重要誘因[38]；其中，Treg細(xì)胞在維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用，而腸道中Treg細(xì)胞數(shù)量減少與IBD無(wú)明顯相關(guān)性，但是Treg細(xì)胞抑制活性缺乏的小鼠更容易產(chǎn)生腸道炎癥[39]。

在小鼠腸炎模型中，Treg細(xì)胞回輸治療取得了良好的療效，靶向腸炎抗原的Treg細(xì)胞不僅在體外有效抑制了效應(yīng)T細(xì)胞增殖，也在回輸治療后減輕了腸炎癥狀并且延長(zhǎng)了小鼠生存期[40]。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）是在結(jié)腸炎和結(jié)腸癌中表達(dá)的抗原。有研究構(gòu)建了CEA特異性的CAR-Treg細(xì)胞，用于治療結(jié)直腸炎和結(jié)直腸癌癌癥，發(fā)現(xiàn)CEA特異性CAR-Treg在體外能保持穩(wěn)定性和抑制功能，回輸后歸巢至結(jié)直腸部位并減輕了小鼠結(jié)直腸炎癥狀，延長(zhǎng)了小鼠生存期[41]。在臨床試驗(yàn)中，目前IBD細(xì)胞療法主要是自體Treg回輸治療，CAR-Treg細(xì)胞回輸還不多見(jiàn)。目前，有兩項(xiàng)正在開(kāi)展的臨床試驗(yàn)（NCT04691232和NCT03185000）用于評(píng)估Treg細(xì)胞治療IBD的安全性和有效性，方案是通過(guò)自體Treg細(xì)胞體外擴(kuò)增后回輸[42]。

4 Treg細(xì)胞療法在器官移植排斥中的應(yīng)用

器官移植是許多器質(zhì)性疾病后期治療的最終手段，能夠使病人獲得更好的預(yù)后和生存周期。由于移植器官的免疫原性，受體的免疫系統(tǒng)往往會(huì)識(shí)別出移植體的非己特征，效應(yīng)細(xì)胞發(fā)起針對(duì)異體器官的排斥和清除，破壞移植體的結(jié)構(gòu)與機(jī)體的穩(wěn)態(tài)；同時(shí)，移植物的免疫細(xì)胞也會(huì)攻擊宿主，產(chǎn)生移植物抗宿主病（graft vursus host disease，GVHD）。

為了獲得更好的生存周期與預(yù)后，免疫抑制藥物被廣泛應(yīng)用于器官移植的免疫耐受維持。免疫抑制藥物主要靶向效應(yīng)T細(xì)胞的激活過(guò)程——抗原呈遞細(xì)胞（antigen presenting cell，APC）識(shí)別與第一激活信號(hào)、APC識(shí)別與第二激活信號(hào)、APC識(shí)別與擴(kuò)增信號(hào)等3個(gè)環(huán)節(jié)，從而抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活化、增殖及殺傷功能，但在抑制CTL和Teff細(xì)胞的同時(shí)，Treg細(xì)胞也可能相同地受到影響，無(wú)法實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療[43-45]。后續(xù)研究中，CD25單抗、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）抑制劑等藥物也逐步被作為移植相關(guān)的免疫抑制藥物，從而增強(qiáng)Treg細(xì)胞的抑制功能，提示毒性更低的Treg細(xì)胞治療具有治療器官移植的可行性和前景[43,46-48]。

Treg細(xì)胞作為免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞，能夠廣泛地抑制先天免疫和適應(yīng)性免疫的過(guò)度活化。多項(xiàng)臨床前試驗(yàn)探究了Treg細(xì)胞治療器官移植排斥與GVHD的抑制效果與安全性[49-52]。Trzonkowski等[49]發(fā)表了首例Treg細(xì)胞治療GVHD的研究，采集患者外周血中后分離T細(xì)胞，體外擴(kuò)增并按照CD4+CD25+CD127-的標(biāo)準(zhǔn)篩選后回輸?shù)郊毙耘c慢性GVHD患者體內(nèi)，從而證實(shí)細(xì)胞治療對(duì)慢性GVHD患者的治療效果與優(yōu)勢(shì)更加明顯，急性GVHD患者癥狀僅短暫減緩但仍然強(qiáng)于免疫抑制藥物。Brunstein等[50]利用第三方的臍帶血誘導(dǎo)擴(kuò)增獲得Treg細(xì)胞，并擴(kuò)大了移植實(shí)驗(yàn)的例數(shù)，證實(shí)在臍帶血移植的成人中輸注Treg細(xì)胞不僅不會(huì)增加機(jī)會(huì)性感染和血液系統(tǒng)惡性腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，反而提高了患者的生存率，降低了GVHD的發(fā)生率。在Treg細(xì)胞治療器官移植的臨床前試驗(yàn)中，無(wú)論是否利用特異抗原在體外進(jìn)行擴(kuò)增刺激，輸注到體內(nèi)的T細(xì)胞均會(huì)通過(guò)TCR受體與體內(nèi)特異性抗原識(shí)別，從而產(chǎn)生特異性的篩選與擴(kuò)增[53]。然而，多克隆Treg和單克隆Treg群體的治療效果仍然有所不同，具有同種抗原識(shí)別位點(diǎn)的單克隆Treg相比于多克隆Treg具有更強(qiáng)的抑制移植排斥的能力[54-55]。

CAR-T技術(shù)的發(fā)展促進(jìn)了利用CAR-Treg細(xì)胞治療移植免疫排斥的臨床試驗(yàn)的展開(kāi)。HLA-A2是引起免疫排斥的主要分子靶點(diǎn)，CAR-HLA-A2 Treg能夠顯著減弱移植物引起的炎癥與排斥，促進(jìn)機(jī)體對(duì)移植體的免疫耐受，并且在防止供體T細(xì)胞引起的GVHD方面優(yōu)于多克隆Treg細(xì)胞，表明在避免移植排斥方面CAR-Treg細(xì)胞治療具有優(yōu)勢(shì)[56-57]。然而，目前利用Treg細(xì)胞治療器官移植的適應(yīng)人群仍然有限，如果受體發(fā)生過(guò)供體抗原的初次免疫，移植器官作為二次刺激將引起更強(qiáng)的免疫排斥，此時(shí)的CAR-Treg細(xì)胞治療無(wú)法減弱再次免疫的強(qiáng)度[56]。相似地，Treg細(xì)胞治療實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了同樣現(xiàn)象，記憶T細(xì)胞的存在阻止了Treg細(xì)胞抑制炎癥的作用和耐受建立，而Treg細(xì)胞治療與免疫抑制藥物的聯(lián)用成功減少了排斥反應(yīng)[58]。

研究顯示，Treg細(xì)胞治療能夠與傳統(tǒng)的免疫抑制藥物產(chǎn)生協(xié)同作用，通過(guò)減少藥物的劑量、種類等來(lái)降低不良反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)藥物的早期戒斷，為患者提供可持續(xù)性的、低毒性的治療方案[53,58-59]。目前，CAR Treg治療已經(jīng)得到較大發(fā)展，Sangamo Therapeutics公司快速推動(dòng)了HLA-A2 CAR-Treg細(xì)胞——TX200產(chǎn)品的在體試驗(yàn)，TX200在人源化小鼠上的皮膚移植實(shí)驗(yàn)中得到了3個(gè)月追蹤的良好結(jié)果，獲得了移植物的免疫耐受并且CAR-Treg細(xì)胞表型穩(wěn)定，近期已開(kāi)展檢測(cè)TX200有效性和安全性的臨床試驗(yàn)[60-61]。目前，其他開(kāi)展的Treg細(xì)胞療法相關(guān)臨床試驗(yàn)如表1所示。

表1 部分Treg細(xì)胞療法相關(guān)臨床試驗(yàn)Table 1 Some clinical trials related to Treg cell therapy

綜上所述，受體對(duì)再次免疫的移植物有較強(qiáng)的免疫識(shí)別與清除能力，這使得Treg細(xì)胞治療效果不顯著，這一現(xiàn)象強(qiáng)調(diào)了術(shù)前針對(duì)移植受體的抗原提呈細(xì)胞、記憶細(xì)胞、特異性抗體等免疫指標(biāo)的多方面檢測(cè)與評(píng)估的重要性和必要性。

5 結(jié)語(yǔ)與展望

目前，免疫細(xì)胞療法已經(jīng)在多種疾病的治療中嶄露頭角，尤其是CAR-T細(xì)胞療法在血液瘤治療中凸顯了巨大潛力，CAR-T的技術(shù)正在經(jīng)歷優(yōu)化與提高，其中可替換抗原識(shí)別區(qū)域的通用的SUPRA-CAR和CRISPR/Cas9技術(shù)也為CAR-T的發(fā)展提供了新的方向。Treg細(xì)胞療法在自身免疫性疾病和GVHD中顯示出的療效和獨(dú)特地位使其成為當(dāng)前免疫細(xì)胞療法研究中的熱點(diǎn)?，F(xiàn)有的CAR-Treg細(xì)胞療法除了需要解決安全性、穩(wěn)定性等問(wèn)題之外，也應(yīng)該考慮CAR-Treg細(xì)胞在特定微環(huán)境中的效應(yīng)情況。未來(lái)對(duì)CAR-Treg細(xì)胞療法的研究應(yīng)當(dāng)根據(jù)不同疾病特點(diǎn)，組合不同共刺激因子或細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域，調(diào)整CAR-Treg細(xì)胞的持續(xù)性和功能性，從而達(dá)到安全、特異并且持續(xù)的免疫治療效果。