趙麗娟，李志滿，張燕停，張悅，孫印石

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林 長(zhǎng)春 130112）

鹿尾（Cauda Cervi）為鹿科動(dòng)物梅花鹿（Cervus Nippon Temminck）或馬鹿（Cervus elaphus Linnaeus）的干燥尾部。性溫，味甘咸，歸腎經(jīng)[1]?！端拇ㄖ兴幹尽酚涊d：“鹿尾暖腰膝，益腎精，治腰脊疼痛不能屈伸，腎虛遺精及頭昏耳鳴”?，F(xiàn)代研究表明，鹿尾能明顯增加雄性大鼠的睪丸、前列腺、貯精囊、提肛肌、海綿球肌的重量和雌性大鼠子宮、卵巢的重量[2]，能顯著增加雄性大鼠血清中IL-2、IgG、睪酮的含量和睪丸指數(shù)以及增加雌性大鼠血清中IL-2、IgG的含量，但對(duì)雌雄大鼠血清中的IgM、IgA、孕酮水平和肝、脾指數(shù)均無(wú)顯著性影響[3]。公鹿經(jīng)歷兩個(gè)典型的生物學(xué)時(shí)期即生茸期和發(fā)情期。鹿受自身生理活動(dòng)和飲食習(xí)慣的影響，不同生物學(xué)時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)攝入、能量?jī)?chǔ)備和生理指標(biāo)差異較大[4,5]。已有研究表明，發(fā)情期公鹿體內(nèi)膽固醇、蛋白質(zhì)、葡萄糖和乳酸脫氫酶水平顯著高于生茸期[6]。生茸期梅花鹿血中卵磷脂、尿嘧啶、次黃嘌呤及SOD等抗衰老相關(guān)成分含量高于發(fā)情期[7]。發(fā)情期的鹿尾具有特殊的生物學(xué)功能，尾腺分泌物可以誘導(dǎo)雄鹿裂唇嗅和爬跨等性行為[8,9]，增加雌鹿妊娠后期和哺乳期的社交和預(yù)警作用[10]。到目前為止，不同采收時(shí)期和不同性別的鹿尾營(yíng)養(yǎng)價(jià)值有何差別尚不明確，化學(xué)成分差異未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)對(duì)化學(xué)成分的對(duì)比分析，旨在為闡明不同采收時(shí)期和性別的鹿尾營(yíng)養(yǎng)差別提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品

鮮梅花鹿尾公、母各5只分別于2020年6月（生茸期）和11月（發(fā)情期）采自吉林省吉林市昌邑區(qū)左家鎮(zhèn)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所試驗(yàn)站，經(jīng)試驗(yàn)站崔學(xué)哲研究員鑒定，分別為生茸期公梅花鹿尾、生茸期母梅花鹿尾（指公鹿生茸同期）、發(fā)情期公梅花鹿尾和發(fā)情期母梅花鹿尾。樣品經(jīng)凈制、自然風(fēng)干和冷風(fēng)吹干、粉碎、過(guò)80目篩，備用。

1.2 儀器與設(shè)備

Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜儀，美國(guó)Waters公司；Thermo Scientific ISQ氣質(zhì)聯(lián)用儀，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；Varian 710-ES全譜直讀電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀，美國(guó)Varian公司；752N紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司；NDA701杜馬斯快速定氮儀，意大利VELP公司；Speed Wave MSW-4微波消解儀，德國(guó)Berghof公司；TGL-16G高速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；DTC-8超聲波清洗機(jī)，湖北鼎泰生化科技設(shè)備制造有限公司；XS205DU電子天平，瑞士Mettler Toledo公司；XW-80 A微型漩渦混合儀，上海滬西分析儀器廠有限公司。

1.3 試劑

核苷對(duì)照品，純度≥98%，上海源葉生物科技有限公司，包括：尿嘧啶（批號(hào)TM0313XB13）、胞嘧啶（批號(hào)TN1128XA13）、腺嘌呤（批號(hào)X18N6M6005）、鳥(niǎo)嘌呤（批號(hào)KM0522CA14）、次黃嘌呤（批號(hào)TM0313XC13）、黃嘌呤（批號(hào)AJ0722MA14）、尿苷（批號(hào)TM0313XA13）、胸腺嘧啶（批號(hào)140708-200401）、肌苷（批號(hào)TJ0623XA13）、鳥(niǎo)苷（批號(hào)AJ0609NA14）、腺苷（批號(hào)KM0529CA14）、2’-脫氧鳥(niǎo)苷（批號(hào)N07A7W12580）、-胸苷（批號(hào)DN1122WB13）；AccQ Tag氨基酸試劑包（批號(hào)5047302751），美國(guó)Waters公司，包括氨基酸專用衍生劑AccQ Fluor Buffer、AccQ Tag Eluent A溶液、硼酸鹽緩沖液；17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)液（組氨酸、絲氨酸、精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸）（批號(hào)KIT0300481）；37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)液，10 g/L，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；激素對(duì)照品，純度≥98%，上海源葉生物技術(shù)有限公司，包括雄烯二酮（批號(hào)Y28D7C27711）、睪酮（批號(hào)L27O6T5104）、甲睪酮（批號(hào)Y25J7C9452）、孕酮（批號(hào)YN1121DA14）、雌二醇（批號(hào)TMO328CA13）、雌三醇（批號(hào)Y39D6D8370）、可的松（批號(hào)BDF8F）和氫化可的松（批號(hào)L31J8Y40938）；Ag、Al、As、Ba、Be、Ca、Cd、Cr、Cu、Fe、Hg、K、Mg、Mo、Na、Ni、Pb、S、Se、Sn、Sr、Ti、Tl和Zn的多元素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，購(gòu)于國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心；D(+)-無(wú)水葡萄糖（批號(hào)S08J6G1）；鹽酸、無(wú)水乙醇、甲醇、正己烷、石油醚、硫酸、苯酚、三氯甲烷、丙酮、硝酸、高氯酸及氨水均為分析純（北京化工廠）；乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司）。

1.4 方法

1.4.1 核苷測(cè)定 參照孫印石等[11]的方法采用UPLC法檢測(cè)鹿尾中13種核苷含量。準(zhǔn)確稱取鹿尾粉末0.10g，置于含有3 mL蒸餾水的離心管中，渦旋20 s，使樣品充分混勻，密封冷藏過(guò)夜。超聲提取60 min，10 000 r/min離心10 min，上清液過(guò)0.22m水系濾膜，上機(jī)檢測(cè)。

1.4.2 粗蛋白測(cè)定 依據(jù)GB 5009.5-2016采用快速定氮儀檢測(cè)鹿尾中粗蛋白含量，燃燒管溫度（CR）在1 030℃以上，還原管溫度（RR）在650℃以上。

1.4.3 水解氨基酸測(cè)定 參照陸雨順等[12]的方法，采用柱前衍生-UPLC檢測(cè)鹿尾中17種水解氨基酸含量。準(zhǔn)確稱取鹿尾粉末40mg于具塞水解管中，加入20mL濃度為6 mol/L的鹽酸溶液，充分混勻后充氮?dú)夥夤埽?10℃水解22 h，冷卻后取1 mL水解液于粗徑試管，80℃水浴揮干，再加入1 mL超純水反復(fù)揮干2~3次。加入1 mL超純水復(fù)溶，渦旋至樣品充分溶解，經(jīng)0.22m濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶待衍生化。衍生：準(zhǔn)確移取10L系列濃度的氨基酸對(duì)照品溶液和供試品溶液于襯管中，加入70L硼酸鹽緩沖液和20L AQC衍生試劑，渦旋15 s，室溫放置1 min，密封于進(jìn)樣瓶中，于55℃恒溫干燥箱內(nèi)加熱10 min，上機(jī)檢測(cè)。

1.4.4 脂肪酸測(cè)定 依據(jù)GB 5009.168-2016采用GCMS檢測(cè)鹿尾中37種脂肪酸。色譜柱：DB-23 60 m 0.25mm，0.25m；載氣：高純氦氣；載氣流量：1.0mL/min；進(jìn)樣口：220℃；EI源：230℃；程序升溫條件：初始溫度為60℃，保持1 min，10℃/min升溫至180℃，然后以3℃/min升溫至220℃，保持2 min。

1.4.5 激素測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確稱取各激素對(duì)照品1.00 mg，置于50 mL容量瓶中，乙腈定容，配制成濃度為20g/mL的對(duì)照品溶液。取雄烯二酮、睪酮、甲睪酮、孕酮母液配制成2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20ng/mL、25ng/mL系列濃度的混合對(duì)照品溶液。取雌二醇、雌三醇母液配制成2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL系列濃度的混合對(duì)照品溶液。取可的松、氫化可的松母液配制濃度為2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40 ng/mL的混合對(duì)照品溶液，上機(jī)檢測(cè)。以峰面積（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到8種激素的線性回歸方程。見(jiàn)表1。

表1 8種激素含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)Table 1 Standard curves and correlation coefficients for the determination of 8 hormones

供試品溶液制備：準(zhǔn)確稱取鹿尾粉末1.00 g置于50 mL離心管中，加入10 mL甲醇，渦旋30 s，振蕩10 min，超聲提取15 min，8 000 r/min離心10 min，過(guò)濾上清液。殘?jiān)尤?0 mL甲醇重復(fù)上述步驟提取2次，合并提取液。將提取液50℃蒸發(fā)至盡干，待凈化。

凈化：加入1 mL乙腈:水（1:1）復(fù)溶，充分渦旋后轉(zhuǎn)移至含50 mg PSA和30 mg中性氧化鋁的2 mL離心管中，震蕩5 min。充分混勻后，15 000 r/min離心15 min，取上清液過(guò)0.22m有機(jī)濾膜，上機(jī)測(cè)定。

色譜條件：色譜柱：ACQUITY BEH C18（2.1 mm 100 mm，1.7m）；柱溫：40℃；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：1L；雌激素流動(dòng)相：0.01%甲酸水 甲醇；雄激素、孕激素及皮質(zhì)醇流動(dòng)相：水 乙腈；雌激素梯度洗脫程序：0~4 min，35%~50%甲醇；4~4.5 min，50%~100%甲醇；4.5~5.5 min，100%甲醇；5.5~5.6 min，100%~35%甲醇；5.6~9 min，35%甲醇。雄激素、孕激素及皮質(zhì)醇梯度洗脫程序：0~8 min，50%~64%甲醇；8~11 min，64%~84%甲醇；11~12.5 min，84%~100%甲醇；12.5~14.5 min，100%甲醇；14.5~15 min，100%~50%甲醇；15~17 min，50%甲醇。

質(zhì)譜條件：雌激素、皮質(zhì)醇電離方式為負(fù)離子模式（ESI-），雄激素、孕激素電離方式為正離子模式（ESI+）；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；毛細(xì)管電壓：3 kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：450℃；碰撞氣流量：0.19 mL/min；脫溶劑氣流量：1 000 L/h。8種激素MRM色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 8種激素MRM色譜圖Fig.1 MRM chromatograms of 8 hormones

1.4.6 無(wú)機(jī)元素測(cè)定參照王澤帥等[13]的方法采用ICP-OES檢測(cè)鹿尾中24種無(wú)機(jī)元素含量。準(zhǔn)確稱取鹿尾粉末0.10 g，置于100 mL三角燒瓶中，加硝酸高氯酸（4:1）混合溶液5 mL，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過(guò)夜。升溫消解：初始溫度80℃，保持25 min；80~120℃，保持25 min；120~180℃，保持25 min；180~240℃，保持30min。消解完畢將消解液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，用2%硝酸溶液少量多次洗滌容器，合并洗液，并定容至刻線。

儀器參數(shù)：RF功率：1 200 W；穩(wěn)定時(shí)間：3 s；等離子體流速：15.0 L/min；氣流：1.50 L/min；光路溫度：35℃；泵速：7 r/min。

1.4.7 水溶性多糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取0.50 g無(wú)水葡萄糖，于100℃下烘至恒重，準(zhǔn)確稱取10 mg，置于100 mL容量瓶中，加超純水溶解并定容至刻線，配置成濃度為0.1 mg/mL的對(duì)照品溶液。依次吸取0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL和0.80 mL置于試管中，用超純水定容至1mL。加入2.5 mL濃硫酸和0.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的苯酚水溶液，渦旋混勻，室溫靜置30 min，測(cè)定490 nm處吸光度。以吸光度（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.010 2x+0.035 4，R2=0.999 4。

供試品溶液制備：準(zhǔn)確稱取鹿尾粉末1.0 g，加入5 mL石油醚，渦旋10 min，以8 000 r/min離心5 min，棄去上清液，殘?jiān)貜?fù)脫脂2次，氮?dú)獯蹈扇軇＜尤?0 mL超純水，渦旋混勻，預(yù)浸12 h，于50℃超聲提取1 h，以8 000 r/min離心5 min，殘?jiān)尤?0 mL超純水重復(fù)提取1次，合并提取液。采用Sevag法除蛋白，加入5mL氯仿正丁醇（1:1，v/v）溶液，渦旋10min，以8000r/min離心5min，沉淀蛋白質(zhì)，重復(fù)上述操作。加入30 mL無(wú)水乙醇，于4℃冷藏過(guò)夜，以8000r/min離心10 min，棄去上清液，沉淀80℃烘干即得鹿尾水溶性多糖供試品。稱取多糖供試品2 mg，加入20 mL超純水溶解，準(zhǔn)確量取1 mL溶液，測(cè)定方法同標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

1.4.8 數(shù)據(jù)處理所有樣品重復(fù)測(cè)定3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS statistics 26.0進(jìn)行單因素ANOVA檢驗(yàn)分析，用Excel繪制表格。

2 結(jié)果與分析

2.1 核苷含量對(duì)比分析

不同采收時(shí)期和性別的鹿尾13種核苷含量見(jiàn)表2。4組鹿尾樣品鳥(niǎo)嘌呤、黃嘌呤和肌苷含量有顯著差異，發(fā)情期母鹿尾鳥(niǎo)嘌呤含量顯著低于其他3組鹿尾（P＜0.05），生茸期母鹿尾黃嘌呤含量顯著低于其他3組鹿尾（P＜0.05），肌苷含量以發(fā)情期公鹿尾最高，為0.52 g/kg，顯著高于生茸期公鹿尾（P＜0.01）和2組母鹿尾（P＜0.05），母鹿尾不同時(shí)期間無(wú)顯著差異。尿嘧啶、胸腺嘧啶含量為發(fā)情期＞生茸期（P＜0.05），尿苷、-胸苷含量為生茸期＞發(fā)情期（P＜0.05），不同性別間無(wú)顯著差異；鳥(niǎo)苷含量為發(fā)情期公鹿尾＞發(fā)情期母鹿尾＞生茸期母鹿尾＞生茸期公鹿尾，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。核苷總量及其他組分不同時(shí)期和性別間均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中核苷含量（±，n=5）Table 2 Nucleoside content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/kg

表2 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中核苷含量（±，n=5）Table 2 Nucleoside content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/kg

注：同一行上標(biāo)字母相同表示沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05），反之有顯著差異（P＜0.05）?！啊北硎疚礄z出或不在檢出限范圍內(nèi)，下同。Note:The same superscript on the same line indicates no significant difference(P＞0.05),otherwise there is a significant difference(P＜0.05).” -” means not detected or not within the detection limit,the same as below.

名稱Designation生茸期公鹿尾Males in antler-producing stage生茸期母鹿尾Females in antler-producing stage發(fā)情期公鹿尾Males in estrus stage發(fā)情期母鹿尾Females in estrus stage胞嘧啶 0.02±0.00a 0.02±0.00a 0.02±0.00a 0.02±0.00a尿嘧啶 0.54±0.15b 0.59±0.01b 0.76±0.01a 0.84±0.01a腺嘌呤 0.22±0.08a 0.30±0.05a 0.27±0.00a 0.29±0.07a鳥(niǎo)嘌呤 0.25±0.01a 0.26±0.01a 0.25±0.00a 0.18±0.00b次黃嘌呤 0.66±0.14a 0.70±0.04a 0.68±0.01a 0.78±0.09a黃嘌呤 0.10±0.02a 0.04±0.00b 0.12±0.02a 0.12±0.01a尿苷 0.58±0.17a 0.60±0.27a 0.11±0.05b 0.14±0.06b胸腺嘧啶 0.18±0.06b 0.26±0.07ab 0.31±0.03a 0.31±0.03a肌苷 0.27±0.03c 0.33±0.02b 0.52±0.01a 0.35±0.00b鳥(niǎo)苷 0.29±0.03d 0.35±0.02c 0.54±0.01a 0.44±0.00b腺苷 0.16±0.06a 0.10±0.08a 0.14±0.00a 0.08±0.01a 2” -脫氧鳥(niǎo)苷 0.17±0.05a 0.16±0.09a 0.14±0.06a 0.09±0.01a-胸苷 0.29±0.01a 0.25±0.05a 0.16±0.00b 0.13±0.00b總量 3.69±0.84a 4.00±0.69a 4.02±0.21a 3.77±0.31a

2.2 粗蛋白和水解氨基酸含量對(duì)比分析

由表3可知，4組鹿尾粗蛋白含量為發(fā)情期母鹿尾（77.00%）＞生茸期母鹿尾（75.10%）＞發(fā)情期公鹿尾（74.40%）＞生茸期公鹿尾（73.40%）（P＜0.05），表現(xiàn)出發(fā)情期＞生茸期、母＞公的趨勢(shì)。鹿尾不同時(shí)期和性別間水解氨基酸總量（AA）無(wú)顯著差異。必需氨基酸總量（EAA）以生茸期母鹿尾最高，為26.14%，顯著高于發(fā)情期公鹿尾（20.49%）（P＜0.05）。EAA/AA為生茸期母鹿尾（43.31%）＞發(fā)情期母鹿尾（42.49%）＞生茸期公鹿尾（42.19%）＞發(fā)情期公鹿尾（41.68%），表現(xiàn)出生茸期＞發(fā)情期，母鹿＞公鹿的趨勢(shì)。分析各組分得出，發(fā)情期公鹿尾中His含量顯著低于其他3組鹿尾（P＜0.05）；生茸期母鹿尾中Ser、Asp和Cys含量顯著高于發(fā)情期公鹿尾，Met、Ile和Phe含量顯著高于其他3組鹿尾（P＜0.05）；Gly含量以發(fā)情期母鹿尾最高，為5.58%，顯著高于其他3組鹿尾（P＜0.05）。生茸期Lys含量顯著高于發(fā)情期，不同性別間無(wú)顯著差異。不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中其他核苷組分均無(wú)顯著差異。

表3 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中粗蛋白和水解氨基酸含量（±，n=5）Table 3 Contents of crude protein and hydrolyzed amino acid of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/100g

表3 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中粗蛋白和水解氨基酸含量（±，n=5）Table 3 Contents of crude protein and hydrolyzed amino acid of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/100g

注：*表示必需氨基酸，“EAA”表示必需氨基酸總量，“AA”表示氨基酸總量，“CP”表示粗蛋白。Note:*represents the essential amino acid,” EAA” represents the total essential amino acid,” AA” represents the total amino acid,” CP” represents the crude protein.

名稱Designation生茸期公鹿尾Males in antler-producing stage生茸期母鹿尾Females in antler-producing stage發(fā)情期公鹿尾Males in estrus stage發(fā)情期母鹿尾Females in estrus stage His 2.12±0.11a 2.39±0.23a 1.25±0.45b 1.92±0.23a Ser 2.15±0.10ab 2.49±0.33a 1.97±0.17b 2.27±0.32ab Arg* 2.80±0.22a 3.27±0.42a 2.78±0.21a 3.22±0.28a Gly 4.25±0.38b 4.79±0.61b 4.57±0.32b 5.58±0.26a Asp 5.91±0.34ab 6.83±0.95a 5.14±0.45b 5.82±0.35ab Glu 7.98±0.67a 8.63±1.17a 7.21±0.66a 7.90±0.30a Thr* 2.76±0.36a 3.12±0.55a 2.39±0.17a 2.61±0.48a Ala 2.87±0.26a 3.03±0.47a 2.90±0.24a 3.22±0.16a Pro* 2.85±0.15a 3.09±0.47a 2.92±0.35a 3.54±0.39a Cys 0.14±0.01ab 0.15±0.03a 0.11±0.02b 0.12±0.01ab Lys* 0.13±0.01a 0.14±0.06a 0.04±0.01b 0.06±0.01b Tyr 5.63±0.48a 5.91±1.05a 4.85±0.38a 4.90±0.46a Met* 3.07±0.21b 3.93±0.42a 2.55±0.46b 2.90±0.30b Val* 3.14±0.25a 3.45±0.44a 2.83±0.25a 3.07±0.29a Ile* 2.80±0.20ab 3.25±0.45a 2.42±0.18b 2.57±0.25b Leu* 3.10±0.35a 3.47±0.50a 2.86±0.22a 3.12±0.46a Phe* 2.01±0.22b 2.42±0.18a 1.70±0.15b 1.90±0.11b AA 53.71±4.32a 60.36±8.33a 49.16±4.47a 54.11±4.88a EAA 22.66±1.97ab 26.14±3.49a 20.49±2.00b 22.99±2.57ab CP 73.40±0.06d 75.10±0.06b 74.40±0.25c 77.00±0.04a

2.3 脂肪酸含量對(duì)比分析

由表4可知，生茸期鹿尾檢出12種脂肪酸，發(fā)情期公鹿尾檢出除C20:1,cis-11以外的11種脂肪酸，發(fā)情期母鹿尾檢出9種，未檢出C14:1,cis-9、C20:1,cis-11和C20:4,cis-5,8,11,14。脂肪酸總量（FA）以生茸期公鹿尾最高，為19.10 g/kg，高于生茸期母鹿尾和發(fā)情期公鹿尾約1.6倍，高于發(fā)情期母鹿尾5倍左右。飽和脂肪酸總量（SFA）為生茸期公鹿尾（7.07 g/kg）＞生茸期母鹿尾（3.21g/kg）＞發(fā)情期公鹿尾（2.41 g/kg）＞發(fā)情期母鹿尾（1.40 g/kg）（P＜0.05）。單不飽和脂肪酸總量（MUFA）以生茸期公鹿尾最高，為10.75g/kg，高于生茸期母鹿尾和發(fā)情期公鹿尾約2倍，高于發(fā)情期母鹿尾9倍左右，均表現(xiàn)出生茸期＞發(fā)情期，公鹿＞母鹿的趨勢(shì)。多不飽和脂肪酸總量（PUFA）以發(fā)情期母鹿尾最低，為0.51 g/kg，顯著低于生茸期和發(fā)情期公鹿尾（P＜0.05）。不飽和脂肪酸占比為發(fā)情期公鹿尾（69.01%）＞生茸期公鹿尾（63.02%）＞生茸期母鹿尾（57.28%）＞發(fā)情期母鹿尾（55.07%）。

表4 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中脂肪酸含量（±，n=5）Table 4 Fatty acid content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/kg

表4 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中脂肪酸含量（±，n=5）Table 4 Fatty acid content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/kg

類別Classification名稱Designation生茸期公鹿尾Males in antlerproducing stage生茸期母鹿尾Females in antlerproducing stage發(fā)情期公鹿尾Males in estrus stage發(fā)情期母鹿尾Females in estrus stage飽和脂肪酸（SFA）肉豆蔻酸C14:0 0.41±0.01a 0.14±0.01b 0.12±0.03b 0.06±0.00c十五烷酸C15:0 0.12±0.00a 0.06±0.00b 0.05±0.02bc 0.04±0.00c棕櫚酸C16:0 4.93±0.17a 2.12±0.13b 1.39±0.34c 0.82±0.04d十七烷酸C17:0 0.15±0.01a 0.07±0.01b 0.07±0.01b 0.06±0.00b硬脂酸C18:0 1.41±0.07a 0.79±0.02b 0.59±0.14c 0.40±0.02d花生酸C20:0 0.06±0.00ab 0.03±0.01b 0.20±0.18a 0.02±0.00b總量 7.07±0.27a 3.21±0.16b 2.41±0.71c 1.40±0.06d

續(xù)表 g/kg

2.4 激素含量對(duì)比分析

不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中8種天然激素含量見(jiàn)表5。雄烯二酮在公鹿尾和母鹿尾中均有檢出，同一時(shí)期公鹿尾是母鹿尾含量的2.5倍左右，發(fā)情期含量顯著高于生茸期（P＜0.05）。睪酮和甲睪酮只在公鹿尾中檢出，發(fā)情期含量極顯著升高，分別約為生茸期的8.6、27倍。雌二醇含量為發(fā)情期母鹿尾（30.18 ng/g）＞生茸期母鹿尾（5.16 ng/g）＞發(fā)情期公鹿尾（3.85 ng/g）＞生茸期公鹿尾（2.38 ng/g）（P＜0.001）。雌三醇含量以發(fā)情期母鹿尾最高，為16.75 ng/g，高于生茸期母鹿尾4.4倍。公鹿尾檢出微量雌三醇，不同時(shí)期間無(wú)顯著差異。孕酮、氫化可的松和激素總量均表現(xiàn)為發(fā)情期母鹿尾＞發(fā)情期公鹿尾＞生茸期母鹿尾＞生茸期公鹿尾（P＜0.001）。4組鹿尾可的松含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，鹿尾中激素含量受生物學(xué)時(shí)期和性別影響較大。不同性別間比較，公鹿尾雄激素含量較高，此外還含有孕激素、皮質(zhì)醇和少量雌激素，母鹿尾檢出微量雄激素，其他激素含量均顯著高于公鹿尾。不同時(shí)期間比較，發(fā)情期激素含量均顯著升高，激素總量達(dá)到生茸期3倍左右。

表5 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中激素含量（±，n=5）Table 5 Hormone content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) ng/g

表5 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中激素含量（±，n=5）Table 5 Hormone content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) ng/g

類別Classification名稱Designation生茸期公鹿尾Males in antlerproducing stage生茸期母鹿尾Females in antlerproducing stage發(fā)情期公鹿尾Males in estrus stage發(fā)情期母鹿尾Females in estrus stage雄激素雄烯二酮 3.63±0.01b 1.47±0.44d 5.22±0.29a 2.13±0.25c睪酮 4.53±0.01 — 38.99±0.23 —甲睪酮 0.41±0.05 — 11.16±0.18 —雌激素 雌二醇 2.38±0.22d 5.16±0.36b 3.85±0.01c 30.18±1.06a雌三醇 1.00±0.13c 3.10±0.33b 2.40±0.30bc 16.75±1.65a孕激素 孕酮 3.41±0.12d 5.00±0.40c 6.91±0.41b 18.99±0.10a皮質(zhì)醇 氫化可的松 12.81±1.10d 20.07±0.16c 23.15±0.32b 31.78±2.17a可的松 0.72±0.14a 0.58±0.07a 0.73±0.19a 0.40±0.05a總量 28.89±1.78d 35.38±1.76c 92.41±1.93b 100.23±5.28a

2.5 無(wú)機(jī)元素含量對(duì)比分析

不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中24種無(wú)機(jī)元素含量見(jiàn)表6。元素總量為發(fā)情期母鹿尾（36.11 g/kg）＞發(fā)情期公鹿尾（34.19 g/kg）＞生茸期母鹿尾（31.15 g/kg）和生茸期公鹿尾（29.65 g/kg），組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比較4組鹿尾中各元素含量，生茸期公鹿尾中K含量、發(fā)情期公鹿尾中Cu、Mo含量顯著低于其他3組鹿尾，其他3組間無(wú)顯著差異。發(fā)情期母鹿尾中Mg及Ba含量、生茸期母鹿尾中Cr及Ni含量和發(fā)情期公鹿尾中Fe含量顯著較高，其他3組間無(wú)顯著差異。Ca、Sr、V 3種元素均以發(fā)情期母鹿尾含量最高，分別為16.60 g/kg、19.62 mg/kg和9.60 mg/kg，顯著高于同期公鹿尾（P＜0.05），極顯著高于生茸期鹿尾（P＜0.01），生茸期不同性別間無(wú)顯著差異。4組鹿尾中Na含量為發(fā)情期母鹿尾（3.71 g/kg）＞發(fā)情期公鹿尾（3.04 g/kg）＞生茸期母鹿尾（2.75 g/kg）＞生茸期公鹿尾（2.13 g/kg），S含量則呈相反的趨勢(shì)。4組鹿尾均檢出極微量Pb，生茸期含量高于發(fā)情期（P＜0.05），不同性別間無(wú)顯著差異。不同采收時(shí)期和性別間Al、Zn、Mn、Ti和Cd含量均無(wú)顯著差異。4組樣品均未檢出Se、Ag、Hg和As，生茸期公鹿尾未檢出Cd，各組Pb、Cd含量分別在0.5 mg/kg和0.2 mg/kg左右，低于藥典限量值（Pb:5 mg/kg，Cd:1 mg/kg）。

表6 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中無(wú)機(jī)元素含量（±，n=5）Table 6 Contents of inorganic elements of deer tail in different periods and genders(±s,n=5)

表6 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中無(wú)機(jī)元素含量（±，n=5）Table 6 Contents of inorganic elements of deer tail in different periods and genders(±s,n=5)

類別Classification名稱Designation生茸期公鹿尾Males in antler-producing stage生茸期母鹿尾Females in antler-producing stage發(fā)情期公鹿尾Males in estrus stage發(fā)情期母鹿尾Females in estrus stage常量元素/（g/kg）K 4.13±0.33b 5.06±0.05a 4.81±0.12a 4.87±0.04a Ca 11.13±0.59c 11.92±0.46c 15.3±0.36b 16.60±0.24a Na 2.13±0.06d 2.75±0.07c 3.04±0.10b 3.71±0.03a Mg 0.61±0.04b 0.65±0.04b 0.68±0.04b 0.79±0.03a S 11.21±0.10a 10.31±0.07b 9.88±0.17c 9.66±0.08d微量元素/（mg/kg）Al 83.67±6.93a 75.03±11.71a 87.73±3.88a 84.42±7.41a Zn 62.01±1.64a 62.44±4.30a 69.68±7.81a 73.14±12.09a Fe 215.98±9.16b 224.80±7.40ab 240.73±8.86a 225.31±19.68ab Mn 2.02±0.43a 2.14±0.13a 2.21±0.57a 2.17±0.55a Cu 19.61±2.96a 22.63±1.80a 11.68±4.79b 17.86±2.74a Cr 23.25±0.57b 26.92±0.79a 22.99±0.62ab 20.35±1.98c Ba 7.65±1.02b 8.16±0.77b 7.84±0.98b 13.43±0.42a Ni 8.20±0.58c 13.22±0.31a 11.44±0.47ab 9.37±1.35c Sr 10.56±0.77c 11.33±0.67c 14.32±1.01b 19.62±0.33a Mo 2.95±0.04a 3.05±0.40a 1.86±0.38b 3.06±0.41a V 4.66±0.54c 4.08±0.39c 8.10±0.15b 9.60±0.06a Ti 0.99±0.10a 0.90±0.11a 0.82±0.27a 0.74±0.09a Se——Ag——重金屬元素/（mg/kg）Pb 0.58±0.02a 0.55±0.05a 0.33±0.03b 0.29±0.04b Cd — 0.19±0.06a 0.23±0.04a 0.18±0.03a Hg——As——總量/（g/kg） 29.65±1.14c 31.15±0.72c 34.19±0.82b 36.11±0.47a

2.6 多糖含量對(duì)比分析

由表7可知，發(fā)情期母鹿尾中多糖含量最低，為2.93 g/kg，顯著低于生茸期公鹿尾（4.93 g/kg）、生茸期母鹿尾（4.83 g/kg）和發(fā)情期公鹿尾（5.61 g/kg）。推測(cè)發(fā)情期母鹿尾多糖含量顯著下降可能是母鹿在發(fā)情時(shí)食欲減弱、性欲增強(qiáng)且在此期間氣溫較低，體內(nèi)能量消耗過(guò)度導(dǎo)致。

表7 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中多糖含量（±，n=5）Table 7 Polysaccharide content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/kg

表7 不同采收時(shí)期和性別的鹿尾中多糖含量（±，n=5）Table 7 Polysaccharide content of deer tail in different periods and genders(±s,n=5) g/kg

樣品Sample多糖含量Polysaccharide content生茸期公鹿尾 4.93±0.60a生茸期母鹿尾 4.83±0.74a發(fā)情期公鹿尾 5.61±0.15a發(fā)情期母鹿尾 2.93±0.49b

3 討論

本研究首次系統(tǒng)地測(cè)定了不同采收時(shí)期、不同性別的梅花鹿尾7類化學(xué)成分的組分及含量。結(jié)果表明，發(fā)情期鹿尾中粗蛋白、激素和無(wú)機(jī)元素含量以及不飽和脂肪酸比重較高；生茸期鹿尾中脂肪酸含量和必需氨基酸比重較高；核苷、水解氨基酸和多糖含量不同時(shí)期間無(wú)顯著差異。母鹿尾中粗蛋白和激素含量較高；公鹿尾中多糖、脂肪酸含量及不飽和脂肪酸比重較高；核苷、水解氨基酸和無(wú)機(jī)元素含量以及必需氨基酸比重不同性別間無(wú)顯著差異。

公鹿在不同生物學(xué)時(shí)期處于不同的生理狀態(tài)，每年的4~9月主要經(jīng)歷鹿角盤(pán)脫落、傷口愈合、鹿茸形成和生長(zhǎng)、鋸茸后大面積創(chuàng)口恢復(fù)、形成再生茸、再愈合和骨化等劇烈生理過(guò)程，每年10月至次年3月進(jìn)入發(fā)情、求偶、配種的繁殖階段[14]，因此，目前較多的飼養(yǎng)者為提高鹿經(jīng)濟(jì)效益，滿足不同生理活動(dòng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，進(jìn)行鹿的科學(xué)飼養(yǎng)管理。李淑杰等[15]提出，每年的8月和3月，應(yīng)按鹿的性別、種別、生產(chǎn)性能、年齡、體況和種用性能進(jìn)行嚴(yán)格分群管理。越冬期應(yīng)確保蛋白質(zhì)類飼料占日糧的15%~20%，幼鹿和頭、二鋸鹿或后備母鹿、8鋸以上的花公鹿和13鋸以上的公鹿應(yīng)達(dá)到40%左右。在保證越冬期有良好膘情的情況下，應(yīng)在常年同齡脫盤(pán)期前40 d就明顯增加日糧量及其營(yíng)養(yǎng)水平，以達(dá)到鹿茸增產(chǎn)的目的。鹿茸生長(zhǎng)后期和母鹿妊娠后期，飼料中礦物質(zhì)磷酸鈣的含量或骨粉、蠣粉、石粉及蛋殼粉的量應(yīng)明顯增加，妊娠母鹿為減少難產(chǎn)不宜過(guò)肥，故應(yīng)控制能量攝入過(guò)多。研究表明，不同時(shí)期鹿體內(nèi)的生化指標(biāo)具有顯著差異。史鴻鵬等[14]的研究表明，發(fā)情期公鹿體內(nèi)膽固醇、蛋白質(zhì)、葡萄糖和乳酸脫氫酶水平顯著高于生茸期；曹榮峰等[16]的研究表明，生茸期梅花鹿血中卵磷脂、尿嘧啶和次黃嘌呤等抗衰老相關(guān)成分含量高于配種期；馬澤芳等[7]的研究表明，生茸期梅花鹿血中SOD水平顯著高于配種期；鄒晨等[17]的研究表明，不同生長(zhǎng)階段公鹿血液中蛋白、酶及無(wú)機(jī)鹽差異極顯著；哺乳期公、母鹿紅細(xì)胞系統(tǒng)指標(biāo)、血糖及肌酸激酶具有顯著性差異；紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均體積、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度、堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶在不同性別的育成鹿與成年鹿中差異極顯著。綜上所述，不同的營(yíng)養(yǎng)供給、鹿自身進(jìn)行不同的生理活動(dòng)均影響鹿體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量的變化。生茸期公鹿消耗大量蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能量向茸生長(zhǎng)調(diào)配，此階段尾部瘦弱，營(yíng)養(yǎng)較低，而發(fā)情期無(wú)產(chǎn)茸消耗，能量蓄積使?fàn)I養(yǎng)成分回升，此階段尾部發(fā)出求偶、性交等重要的生物學(xué)信號(hào)，尾部較為發(fā)達(dá)肥厚，尾腺分泌大量皮質(zhì)醇類激素。因此，發(fā)情期鹿尾中粗蛋白、激素和無(wú)機(jī)元素含量顯著高于生茸期。母鹿無(wú)產(chǎn)茸消耗蛋白和無(wú)機(jī)鹽，為保證妊娠會(huì)增加二者供應(yīng)量、減少脂肪攝入，且被證實(shí)母鹿妊娠后期和哺乳期尾腺分泌物含量最高[10]。因此，母鹿尾中粗蛋白、激素和無(wú)機(jī)元素含量較高，脂肪酸和多糖含量較低。