王 皓，馮岳龍，楊 玲，張 強(qiáng)，高 裕，李培軍

隨著我國老齡人口的比重增加，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國60歲以上人口已達(dá)到2.54億，預(yù)計(jì)30年后將超過4億，目前其已占據(jù)人口總數(shù)的17%，越來越突出的人口老齡化必將成為我國特別關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。在老齡人口中，前列腺增生癥越來越普遍，前列腺增生雖然是良性疾病，但依然給我們的老年患者造成了很大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。在臨床工作中，尤其是泌尿外科中老年門診患者中，絕大多數(shù)正遭受著前列腺增生疾病所帶來的難以忍受的痛苦，目前對于前列腺增生疾病的研究受到了越來越多的重視[1]。對于前列腺疾病的治療，目前的診療手段有限，主要集中在藥物和手術(shù)的治療。雖然對于前列腺增生手術(shù)的方式不斷革新[2]，但是前列腺增生疾病的絕對有效治療仍令科研工作者及臨床工作者舉步維艱。所以，對于前列腺增生疾病的機(jī)制研究已迫在眉睫。研究發(fā)現(xiàn)，前列腺增生的病理特點(diǎn)是其間質(zhì)和上皮細(xì)胞的非腫瘤性增生所致[3]。研究表明，間質(zhì)和上皮細(xì)胞的這種持續(xù)性的增殖狀態(tài)在基礎(chǔ)研究中是因?yàn)檫@些細(xì)胞的無序增殖和凋亡，乙醛脫氫酶2(ALDH2)在細(xì)胞的增殖和凋亡中起到了很重要的作用[4-5]。然而，對于ALDH2蛋白在前列腺增生疾病的機(jī)制研究中鮮見報(bào)道。因此，本課題組擬采用丙酸睪酮誘導(dǎo)建立前列腺增生SD鼠模型，探討ALDH2在丙酸睪酮誘導(dǎo)的前列腺組織中的作用，并對其機(jī)制進(jìn)行探索，為ALDH2在以后前列腺增生的臨床治療中提供新思路。

1 材料和方法

1.1 動物來源及分組:SD雄性大鼠(6周齡)12只，按照隨機(jī)原則，分為模型組(n=6)和對照組(n=6)，大鼠(SPF級)均由寧夏醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 試劑和儀器:丙酸睪酮購自上海通用藥業(yè)，ALDH2抗體、二抗等購自博士德公司，免疫組化試劑盒等購自北京中杉金橋公司。

1.3 細(xì)胞模型的構(gòu)建及制備:模型組大鼠連續(xù)4周皮下注射丙酸睪酮2.5 mg/(kg·d)[6]，對照組大鼠連續(xù)4周給予同等劑量的生理鹽水。4周后，在無菌條件下解剖大鼠前列腺組織。前列腺組織一分為二，右側(cè)置于-80 ℃保存。

1.4 免疫組織化學(xué)染色方法:常規(guī)烤片4 h，分別經(jīng)過二甲苯和無水乙醇的梯度脫蠟和脫水，枸櫞酸鈉抗原修復(fù)，依次添加ALDH2一抗、二抗，DAB顯色。蘇木精復(fù)染、脫水、封片。

1.5 蛋白印跡檢測方法:提取蛋白后-80℃保存。將蛋白進(jìn)行電泳分離以及轉(zhuǎn)膜，添加ALDH2抗體、β-actin室溫?fù)u床孵育，添加二抗(山羊抗兔)室溫?fù)u床孵育，添加化學(xué)發(fā)光底物曝光。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)染色:ALDH2蛋白在前列腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)，見圖1(封二)。

2.2 蛋白印跡檢測:模型組ALDH2蛋白表達(dá)量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2(封二)。

3 討論

良性前列腺增生(BPH)是發(fā)生在老年男性患者中一種常見疾病，在組織結(jié)構(gòu)方面，前列腺的基質(zhì)細(xì)胞以上皮細(xì)胞增生為主，臨床癥狀以尿頻、尿急、尿等待、尿不盡為主。近年來，其發(fā)病率有升高趨勢。約70%以上的老年患者遭遇此疾病的困擾，嚴(yán)重影響著中老年男性的身體健康及生活質(zhì)量，目前在臨床上對于前列腺增生疾病的治療主要以手術(shù)為主，然而手術(shù)治療后復(fù)發(fā)概率較高[7]。因此，前列腺增生疾病的基礎(chǔ)機(jī)理和發(fā)病機(jī)制對于預(yù)防和治療前列腺增生疾病顯得尤為重要。目前研究發(fā)現(xiàn)，前列腺增生發(fā)病的機(jī)理是細(xì)胞增殖與凋亡的紊亂，同時(shí)還有其他因素，如激素的異常分泌、多肽生長因子、氧化應(yīng)激狀態(tài)以及炎性信號通路等，但是其具體的發(fā)病機(jī)制尚不明確[8]。

ALDH是一組NAD(P)+依賴性酶，目前已發(fā)現(xiàn)19種，其中ALDH2是所有目前發(fā)現(xiàn)同工酶中生物活性最高的，其對于體內(nèi)醛類物質(zhì)的代謝起到了主要的作用。ALDH2是存在于細(xì)胞的能量工廠線粒體中的，位于染色體12q24.2，可以編碼為517個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2在心肌細(xì)胞中具有抑制活性氧的集聚以及抗凋亡的功能[9]。此外，ALDH2在乙醛誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞中呈高表達(dá)，可以明顯抑制其凋亡，同時(shí)在缺氧再灌注的心肌細(xì)胞中也呈高表達(dá)，抑制心肌細(xì)胞的凋亡。還有研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2的表達(dá)升高，可以明顯提高酶的生物活性[10]。本實(shí)驗(yàn)中免疫組織化學(xué)染色法發(fā)現(xiàn)模型組前列腺上皮細(xì)胞ALDH2呈高表達(dá)，蛋白印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在模型組ALDH2的蛋白表達(dá)量明顯高于對照組。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，ALDH2酶是急性酒精中毒的保護(hù)因子，其在因酒精導(dǎo)致細(xì)胞損傷的治療中具有很大的應(yīng)用前景，主要是因?yàn)锳LDH2抑制了心肌細(xì)胞的凋亡[11]。與此同時(shí)，ALDH2在糖尿病大鼠的心肌細(xì)胞損害時(shí)其通過抑制心肌細(xì)胞的凋亡起到保護(hù)作用[4]。有研究報(bào)道稱，ALDH2具有抗氧化應(yīng)激的作用，能使外周血的單核細(xì)胞減少損傷和延遲凋亡[12]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，模型組前列腺上皮細(xì)胞增生，ALDH2過表達(dá)，從而可間接推測前列腺上皮細(xì)胞的增生可能與ALDH2的高表達(dá)關(guān)系密切，ALDH2的高表達(dá)對于前列腺增生的發(fā)生起到了一定的促進(jìn)作用。