王慈恩, 郭 慶, 崔志華, 陳維國(guó), 張志強(qiáng)

(1.浙江理工大學(xué) a.紡織科學(xué)與工程學(xué)院; b.“生態(tài)染整技術(shù)”教育部工程研究中心,杭州 310018;2.浙江厚源紡織股份有限公司,浙江 嘉興 314511)

桑蠶絲是家蠶結(jié)繭時(shí)由絲腺所分泌的蛋白質(zhì)液凝固而成的天然纖維,由兩根橫截面為類三角形的絲素蛋白纖維和將其包裹的絲膠蛋白兩個(gè)主要部分及少數(shù)脂質(zhì)構(gòu)成[1]。絲素蛋白是構(gòu)成蠶絲的主體部分,約占總重量的75%;包裹在絲素外層的絲膠約占蠶絲總重的25%,起黏合的作用[2]。絲素蛋白包含18種天然氨基酸,其中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和絲氨酸(Ser)占85%,絲氨酸、天冬氨酸(Asp)和酪氨酸(Tyr)等則占20%左右[3-4]。將生絲上的絲膠通過(guò)脫膠工藝去除干凈后,留下的即是絲素蛋白纖維。絲素蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要有三種構(gòu)象:α-螺旋、β-折疊和無(wú)規(guī)卷曲[5]。在一定條件下,三種構(gòu)象能互相轉(zhuǎn)化,改變絲素材料力學(xué)性能。

絲素蛋白是從蠶絲纖維中提取的天然高聚物,具有優(yōu)秀的生物相容性和生物降解性,可以進(jìn)一步加工成不同形態(tài)的材料,如納米顆粒、薄膜、水凝膠和海綿等[6-9],以滿足不同領(lǐng)域的需求。目前,絲素蛋白材料也從傳統(tǒng)的紡織領(lǐng)域逐步向生物醫(yī)藥、化妝品等多個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域拓展。為滿足不同領(lǐng)域的需要,研究人員基于絲素蛋白原有的優(yōu)良性能,對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步化學(xué)改性處理。同時(shí),絲素蛋白中各種氨基酸殘基上的活性基團(tuán)也為絲素蛋白的化學(xué)改性提供了化學(xué)反應(yīng)的位點(diǎn)[10]。本文擬對(duì)絲素蛋白的化學(xué)改性方法,以及其在各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用進(jìn)行歸納總結(jié)。

1 絲素蛋白的化學(xué)改性

絲素蛋白的化學(xué)改性方法主要包括:氨基酸殘基改性、絲素蛋白接枝改性和交聯(lián)反應(yīng)改性。

1.1 氨基酸殘基改性

通過(guò)化學(xué)試劑對(duì)蛋白質(zhì)氨基酸殘基進(jìn)行修飾,可以在絲素大分子側(cè)鏈上引入或去除某些基團(tuán),其中部分絲素蛋白氨基酸側(cè)基的改性反應(yīng)如圖1所示。Yasushi[11]用氯磺酸在絲素蛋白分子鏈上引入硫酸鹽基團(tuán),硫酸化主要發(fā)生在酪氨酸和絲氨酸的殘基上。Zheng等[12]利用NaClO的氧化作用在絲氨酸上引入羧基,誘導(dǎo)羥基磷灰石的礦化來(lái)提高骨組織再生速度,但是該方法對(duì)絲素結(jié)構(gòu)破壞較大(圖1(a))。為減少羧基化對(duì)絲素蛋白損傷,Heichel等[13]在離子液體/二甲基甲酰胺均質(zhì)溶液中使用琥珀酸酐修飾絲蛋白,可在絲氨酸(Ser)殘基上引入羧基(圖1(b))。相比在水性溶劑中羧化,離子液體中羧化的絲素蛋白相對(duì)分子質(zhì)量更高,水解明顯減少。另外,也有研究者利用酪氨酸(Tyr)殘基的酚羥基易發(fā)生親電取代的特點(diǎn),將重氮鹽通過(guò)偶合取代反應(yīng)偶合在氨基酸上,以產(chǎn)生偶氮苯衍生物的方式來(lái)引入功能性基團(tuán)[14-15](圖1(c))。

圖1 絲素蛋白側(cè)基的化學(xué)改性Fig.1 Chemical modification of silk fibroin on side groups

1.2 絲素蛋白大分子的接枝改性

絲素蛋白的接枝改性是將功能性化合物結(jié)合到絲素蛋白大分子鏈上的主要手段之一,接枝絲素蛋白的性質(zhì)受接枝物的類型和接枝率影響。

乙烯基單體接枝絲素蛋白的研究工作很早就有開(kāi)展。乙烯基類單體接枝蠶絲后,可以進(jìn)一步發(fā)生自由基聚合反應(yīng),生成接枝聚合物的改性效果。Furuzono等[16]通過(guò)甲基丙烯酰氧基乙基異氰酸酯(MOI)對(duì)絲素蛋白的氨基、羥基和羧基進(jìn)行修飾,隨后在引發(fā)劑的作用下將2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿(MPC)接枝到修飾后的蠶絲上(圖2),在增重的同時(shí)改善蠶絲的血液相容性,減少血小板的黏附。也有研究者通過(guò)酶的催化作用把多肽[17]、類固醇[18]、天然高分子聚合物[19]和其他功能性物質(zhì)接枝到蠶絲上。唐耿鐵等[20]利用酪氨酸酶氧化酪氨酸殘基產(chǎn)生活化的多巴醌,提高接枝效率的作用,將殼聚糖接枝到絲纖維上。QI等[21]利用酪氨酸酶氧化兒茶素形成活性鄰苯醌結(jié)構(gòu),和絲素分子鏈上的氨基發(fā)生反應(yīng),從而接枝到絲素蛋白上,還使用ε-PLL模擬兒茶素和絲素的共價(jià)結(jié)合,證實(shí)了酶對(duì)接枝反應(yīng)的促進(jìn)效果。

圖2 MOI修飾的絲素蛋白與MPC的接枝反應(yīng)Fig.2 Grafting reaction of MPC with MOI modified silk fibroin

1.3 絲素蛋白大分子的交聯(lián)反應(yīng)改性

化學(xué)交聯(lián)是利用交聯(lián)劑、酶或紫外線照射等方式,使大分子鏈之間以共價(jià)鍵相結(jié)合形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的的過(guò)程。交聯(lián)反應(yīng)可以在絲素蛋白分子鏈內(nèi)部和分子鏈之間形成共價(jià)鍵而改變其結(jié)構(gòu)特性,提高穩(wěn)定性;也可以讓絲素與其他高聚物形成共價(jià)鍵結(jié)合。

用于絲素蛋白修飾改性的合成交聯(lián)劑有戊二醛、碳化二亞胺、氰尿酸氯及一些環(huán)氧化合物等[22-26]。戊二醛的兩個(gè)醛基,可與蛋白質(zhì)的胺基反應(yīng)產(chǎn)生交聯(lián)結(jié)構(gòu)。碳化二亞胺可以在酸性條件下與氨基酸殘基上的羧基反應(yīng),生成對(duì)-?；愲?之后會(huì)與氨基或羥基繼續(xù)反應(yīng),得到穩(wěn)定的酰胺和酯鍵[27]。環(huán)氧化合物則通過(guò)開(kāi)環(huán)反應(yīng)與蛋白質(zhì)分子鏈上的氨基、羥基等發(fā)生共價(jià)鍵結(jié)合,起到交聯(lián)作用[28]。

考慮到部分未反應(yīng)的交聯(lián)劑可能殘留在絲素材料中而產(chǎn)生生物相容性問(wèn)題,近年來(lái)使用天然交聯(lián)劑的研究及應(yīng)用呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。京尼平是報(bào)道較多的天然交聯(lián)劑,是梔子苷被β-葡萄糖苷酶水解后產(chǎn)生的一種環(huán)烯醚萜類化合物。如圖3所示,絲素蛋白分子鏈上的氨基會(huì)對(duì)京尼平C3原子發(fā)起親核攻擊,打開(kāi)六元環(huán)形成仲胺和新的醛基,之后仲胺對(duì)新形成的醛基發(fā)生親核攻擊,形成含氮的六元環(huán),同時(shí)京尼平上的羧基端也可以與氨基共價(jià)結(jié)合[29]。與戊二醛等合成交聯(lián)劑相比,京尼平交聯(lián)改性后的絲素材料有良好的機(jī)械性能,且細(xì)胞毒性顯著降低[30-31]。

圖3 京尼平與絲素蛋白分子的反應(yīng)Fig.3 Reaction of fibroin molecule with Genipin

2 絲素蛋白化學(xué)改性的應(yīng)用

2.1 紡織品領(lǐng)域

蠶絲織物有易生褶皺[32]、光致發(fā)黃老化等缺點(diǎn)[33],對(duì)前者可以采用乙烯基單體的接枝共聚改性、交聯(lián)劑改性等方法來(lái)改善。已發(fā)表的乙烯基單體主要包括乙烯類、甲基丙烯酸酯類和甲基丙烯酰胺類三大類,接枝改性主要目的是改善蠶絲的防縮抗皺和耐磨性能[34]。多元羧酸/酸酐、環(huán)氧化合物等交聯(lián)劑上的活性基團(tuán)與羧基、羥基、氨基等共價(jià)結(jié)合,使絲素大分子鏈交聯(lián)而改善蠶絲織物的抗皺性等[35]。

除了改善真絲織物本身和加工工藝的缺陷,許多研究者嘗試通過(guò)化學(xué)改性賦予蠶絲特殊性能。某些化學(xué)整理劑能與絲素的氨基酸發(fā)生反應(yīng)直接改變絲素特性,也能讓其他難以牢固結(jié)合的功能性物質(zhì)固著在絲素材料上而發(fā)揮作用。如Cheng等[44]合成了一種新型阻燃劑——戊二醛氨基磺酸銨磷酸二乙酯鹽(GASDP),對(duì)蠶絲蛋白接枝處理后,使蠶絲織物有良好的耐洗性和耐久阻燃效果。Zhou等[45]用含有乙烯砜基團(tuán)的紫外線吸收劑對(duì)姜黃素進(jìn)行改性,并對(duì)蠶絲纖維進(jìn)行染色,改善了真絲織物的抗菌(大腸桿菌的抗菌活性超過(guò)90%)和防紫外線性能(UPF=50.65)。

2.2 生物醫(yī)藥領(lǐng)域

絲素蛋白憑借其優(yōu)秀的生物相容性、生物可降解性,已成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域的熱門研究材料。經(jīng)過(guò)適當(dāng)化學(xué)改性的絲素蛋白材料擁有更加出色的生物活性、藥物傳遞能力、抗菌性能和機(jī)械性能。這些性能的優(yōu)化讓絲素蛋白材料在藥物控制輸送、組織再生與創(chuàng)面修復(fù)等方面表現(xiàn)出巨大潛力。

2.2.1 藥物傳遞系統(tǒng)

藥物傳遞系統(tǒng)需要將藥物運(yùn)輸?shù)街虏〔课徊⒖刂漆尫臶46],同時(shí)盡可能減少副作用。目前有關(guān)絲素蛋白藥物傳遞系統(tǒng)的研究主要致力于控制藥物的輸送時(shí)間。Chung團(tuán)隊(duì)分別通過(guò)殼聚糖和多巴胺對(duì)絲素進(jìn)行改性[47-48]。絲素蛋白與多巴胺偶聯(lián)制成的納米顆粒具有明顯抗氧化能力和長(zhǎng)效釋放姜黃素的能力,如持續(xù)釋放時(shí)間可達(dá)14 d。而殼聚糖與絲素蛋白交聯(lián)制得絲素/殼聚糖微粒,在搭載四環(huán)素的測(cè)試中可將釋放時(shí)間從2 d延長(zhǎng)至10 d。另外,改性絲素蛋白還可以提高治療性蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性、治療效果,降低免疫反應(yīng)性和細(xì)胞毒性[49-50]。Yan等[51]將胰島素和絲素納米粒子通過(guò)戊二醛偶聯(lián),其體外測(cè)試表明,修飾后的胰島素對(duì)胰蛋白酶消化的抗性和體外穩(wěn)定性得到有效提高,體外半衰期約為天然胰島素的2.5倍。

2.2.2 組織工程

在組織工程方面,絲素蛋白可以制成纖維、薄膜、水凝膠和多孔支架等多種形態(tài)材料,以滿足不同的身體部位需求,是一種理想的生物材料。大量研究報(bào)告顯示,化學(xué)改性可讓絲素蛋白材料擁有更好的細(xì)胞黏附、增殖和分化的能力[52-53],促進(jìn)組織再生和傷口愈合。表1總結(jié)了化學(xué)改性的絲素蛋白材料在不同人體組織工程中應(yīng)用的研究情況。

表1 改性絲素蛋白材料在各類組織中的應(yīng)用效果Tab.1 Application effect of modified silk fibroin in various tissues

2.2.3 創(chuàng)面修復(fù)

氨基酸殘基的氫鍵作用,以及絲素與底物形成的β-折疊結(jié)構(gòu)[62-63]使得絲素蛋白材料擁有一定的黏合能力。因此在創(chuàng)面修復(fù)方面,除了常規(guī)的薄膜形態(tài),絲素蛋白也可用作液態(tài)的傷口黏合劑。其在手術(shù)過(guò)程中可應(yīng)對(duì)各種形態(tài)的傷口,起到快速止血作用,有廣闊的應(yīng)用前景。為提高黏合強(qiáng)度和速度,Kim等[64]用甲基丙烯酸縮水甘油酯將絲素蛋白溶液改性,改性后的絲素蛋白溶液在2,4,6-三甲基苯甲酰基苯基膦酸乙酯的存在下,暴露于紫外光下(波長(zhǎng)365 nm)10～30 s即可發(fā)生交聯(lián),快速凝膠化以保護(hù)傷口。在之后的動(dòng)脈離體爆破壓力測(cè)試中發(fā)現(xiàn),絲素黏合劑的連接強(qiáng)度是普通尼龍縫合線的1.5倍;大鼠體內(nèi)測(cè)試發(fā)現(xiàn),該黏合劑不會(huì)在體內(nèi)誘導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng)。

2.3 環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域

絲素蛋白材料在環(huán)境科學(xué)中的應(yīng)用研究主要集中于對(duì)水中雜質(zhì)的吸附、分離與催化。張凱等[65]合成了3,5-二[(2-羥基-4’-乙基磺酰硫酸鈉)偶氮苯-次甲亞胺基]苯甲酸及其Mn2+、Cu2+、Co2+的金屬配合物,對(duì)絲素膜進(jìn)行改性。各種金屬配合物的改性絲素膜對(duì)過(guò)氧化氫均有催化分解的能力,其中Mn2Z1的催化效果最佳。

油水分離方面,可以引入疏水鏈,改變絲素材料的親水性。Shome等[66]通過(guò)絲素蛋白的氨基與丙烯酸酯發(fā)生共軛加成反應(yīng),然后用烷基胺對(duì)丙烯酸酯基團(tuán)進(jìn)行改性,制得絲素海綿材料。十八烷基胺(ODA)改性的絲素海綿在酸/堿性水、河水、含表面活性劑的水和海水中都保持高疏水吸油能力,在油/水混合物中選擇性地收集油相,分離效率保持在95%以上。

化學(xué)改性產(chǎn)生的絲素蛋白材料結(jié)構(gòu)變化也會(huì)對(duì)吸附能力產(chǎn)生影響。Xie[67]等用苯乙醇交聯(lián)絲素制得絲素納米纖維氣凝膠,具有疏水性,對(duì)大豆油、鱷梨油和玉米油的油水分離性能達(dá)到90%以上,并發(fā)現(xiàn)孔隙和β-折疊結(jié)構(gòu)的增加是疏水吸油效果提升的主要原因。

3 結(jié) 論

在保持其自身優(yōu)良特性的基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)絲素蛋白材料進(jìn)行氨基酸殘基改性、蛋白質(zhì)大分子的接枝改性和交聯(lián)改性等加工,可以改變絲素材料的某些重要特性,例如親水性、二級(jí)結(jié)構(gòu)、材料形貌、生物活性和機(jī)械性能,從而滿足絲素材料各種應(yīng)用及功能化的要求。在眾多的蠶絲素蛋白化學(xué)改性研究和應(yīng)用領(lǐng)域,尤其是真絲織物產(chǎn)品和生物醫(yī)藥方面,已經(jīng)取得了豐碩的成果,為相關(guān)領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展奠定了良好的基礎(chǔ),也顯示出絲素蛋白材料的化學(xué)改性具有非常大的潛力和應(yīng)用前景。然而,目前的改性手段仍存在不少需克服和進(jìn)一步完善的問(wèn)題,如需要溫和的改性條件和能精確調(diào)控改性程度等方面,這將是今后相關(guān)領(lǐng)域的研究方向。

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