沈芳銘，尹淑濤，趙沖

中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院， 北京 100083

0 引言

紫外線是影響皮膚健康的關(guān)鍵環(huán)境因素之一。長(zhǎng)期的紫外線暴露不僅可能引起紅斑、色素沉著、免疫抑制等急性損傷，還可能誘發(fā)光老化、皮膚癌等慢性損傷[1-2]。能夠穿越臭氧層到達(dá)地球表面的紫外線包括320～400 nm的長(zhǎng)波紫外線(UVA)和280～320 nm的中波紫外線(UVB)[2]。UVB是主要的生物效應(yīng)誘發(fā)因子，具有比UVA更強(qiáng)的遺傳毒性和皮膚損傷能力[3]。UVB的光子能量可被皮膚表皮角質(zhì)形成細(xì)胞直接吸收，其通過(guò)誘導(dǎo)同一條鏈上相鄰堿基之間生成環(huán)丁烷嘧啶二聚體(CPD)和6-4光產(chǎn)物(6-4PPs)而導(dǎo)致DNA損傷[4-5]。真核細(xì)胞可通過(guò)多種途徑修復(fù)受損DNA[6]，而紫外線誘導(dǎo)的光損傷產(chǎn)物主要通過(guò)核苷酸切除修復(fù)(NER)的途徑去除[7]。已有研究[8-12]表明，安石榴苷、白藜蘆醇、番茄紅素、單寧酸、蘆薈甾醇等天然活性成分能夠保護(hù)UVB誘導(dǎo)的皮膚損傷。其中安石榴苷是石榴果皮多酚中最主要的活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗腫瘤等多種生理活性[12]，將安石榴苷與納米二氧化鈦復(fù)配添加到化妝品基質(zhì)中可發(fā)揮優(yōu)良的防曬效果[13]；在3D皮膚模型中，安石榴苷能降低酪氨酸酶活性、抑制黑色素生成，具有美白作用[14]；安石榴苷預(yù)處理可抑制UVB照射所致的人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞)凋亡[15]。目前已有研究主要集中于安石榴苷對(duì)皮膚的直接作用效果，將其作為膳食活性成分?jǐn)z入、經(jīng)腸道吸收后能否發(fā)揮對(duì)皮膚的保護(hù)作用尚鮮有報(bào)道。

UVB既能直接作用于DNA，也能通過(guò)產(chǎn)生活性氧(ROS)繼發(fā)性地對(duì)細(xì)胞核及線粒體DNA造成氧化損傷[16]。M.Zahin等[17]研究發(fā)現(xiàn)，安石榴苷能抑制苯并[a]芘誘導(dǎo)的DNA加和物的形成，具有較強(qiáng)的抗突變活性。SIRT1蛋白作為一種廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物體內(nèi)、高度保守的去乙?；福瑓⑴cDNA損傷修復(fù)，有利于維護(hù)基因組的穩(wěn)定性[18]。課題組前期研究[19]發(fā)現(xiàn)，安石榴苷能增強(qiáng)HaCaT細(xì)胞中SIRT1基因啟動(dòng)子活性，激活NER途徑，去除UVB誘導(dǎo)產(chǎn)生的CPD?；诖?，本文擬建立人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(Caco-2細(xì)胞)與HaCaT細(xì)胞腸-皮膚共培養(yǎng)體系，進(jìn)一步研究安石榴苷經(jīng)腸道吸收轉(zhuǎn)運(yùn)后對(duì)UVB誘導(dǎo)皮膚損傷的抑制效果及機(jī)制，為研發(fā)功效確切、機(jī)制明確的食品功能性成分用于防治UVB誘導(dǎo)的皮膚損傷提供理論依據(jù)與參考。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

安石榴苷、多聚甲醛、Triton-X100、甲醇、Tris-HCl緩沖液(pH值為6.8)、十二烷基磺酸鈉(SDS)、2-巰基乙醇(2-ME)，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)；Caco-2細(xì)胞、HaCaT細(xì)胞、293T細(xì)胞，日本理研生物資源中心產(chǎn)；DMEM完全培養(yǎng)基，日本Nissui公司產(chǎn)；胎牛血清、山羊血清，美國(guó)Life Technologies公司產(chǎn)；帶細(xì)胞培養(yǎng)小室的24孔Transwell培養(yǎng)板(3470型)，美國(guó)Corning公司產(chǎn)；慢病毒表達(dá)質(zhì)粒pSUPER.retro.puro、輔助質(zhì)粒pVSV-G、pGag-pol，美國(guó)OligoEngine公司產(chǎn)；HilyMax試劑、Hoechst 33342溶液，日本Dojindo Molecular Technologies公司產(chǎn)；聚凝胺、蛋白G磁珠，美國(guó)Merck Millipore公司產(chǎn)；嘌呤毒素，美國(guó)Enzo Life Sciences公司產(chǎn)；CPD抗體(#NMDND001)，日本Cosmo Bio 公司產(chǎn)；Alexa Fluor 555標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體(A-21422)，美國(guó)Life Technologies公司產(chǎn)；高純度RNA分離試劑盒，日本Roche公司產(chǎn)；ReverTra Ace qPCR RT試劑盒，日本Toyobo公司產(chǎn)；KAPA SYBR Fast qPCR試劑盒，美國(guó)KAPA Biosystems公司產(chǎn)；Acetylated-Lysine抗體(#9441)、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的馬抗小鼠IgG抗體(#7076)，美國(guó)Cell Signaling Technology公司產(chǎn)；XPA抗體(ab65963)，英國(guó)Abcam公司產(chǎn)。

1.2 主要儀器與設(shè)備

311型細(xì)胞培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)；Millicell-ERS-2型細(xì)胞電阻儀，美國(guó)Millipore公司產(chǎn)；CL-1000型紫外交聯(lián)儀，美國(guó)UVP公司產(chǎn)；IN Cell Analyzer 1000活性細(xì)胞熒光顯微圖像獲取及分析系統(tǒng)，英國(guó)GE Healthcare公司產(chǎn)；TP-800型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，日本Takara公司產(chǎn)；LAS-1000 Lumino型圖像分析儀，日本Fujifilm公司產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞均采用含10%(如無(wú)特指，文中百分?jǐn)?shù)均指體積分?jǐn)?shù))胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基，于37 ℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d，以適宜比例傳代，選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 單層Caco-2細(xì)胞模型的構(gòu)建和評(píng)價(jià)將Caco-2細(xì)胞以2×105CFU/mL、每孔250 μL接種于24孔Transwell培養(yǎng)板的細(xì)胞培養(yǎng)小室中，培養(yǎng)板下室加入750 μL DMEM完全培養(yǎng)基，根據(jù)培養(yǎng)液狀態(tài)適時(shí)更換培養(yǎng)基。另設(shè)不接種Caco-2細(xì)胞的空白對(duì)照組，在Transwell 培養(yǎng)板的上室和下室均加入相應(yīng)體積的DMEM完全培養(yǎng)基。

通過(guò)細(xì)胞單層跨膜電阻(TEER)判斷Caco-2細(xì)胞是否形成緊密完整的腸上皮樣單層。單層Caco-2細(xì)胞兩側(cè)的電阻通過(guò)細(xì)胞電阻儀測(cè)定，根據(jù)下式計(jì)算TEER。

TEER=(Rsample-Rblank)×S

式中，Rsample為樣品組電阻/Ω，Rblank為空白對(duì)照組電阻/Ω，S為細(xì)胞培養(yǎng)小室有效膜面積(0.3 cm2)。

1.3.3shSIRT1-HaCaT細(xì)胞模型的構(gòu)建參考文獻(xiàn)[19]的方法構(gòu)建shSIRT1-HaCaT細(xì)胞模型。將含有SIRT1特異性序列的短發(fā)卡(Short Hairpin，sh)RNA(序列見表1)克隆至慢病毒表達(dá)質(zhì)粒pSUPER.retro.puro中。在HilyMax試劑作用下，將構(gòu)建的表達(dá)載體pSUPER-puro-shSIRT1與pVSV-G、pGag-pol共同轉(zhuǎn)染293 T細(xì)胞以制備病毒上清液。將293 T細(xì)胞分別經(jīng)含10%和2%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基各培養(yǎng)24 h后，收集含有慢病毒顆粒的上清液。將HaCaT細(xì)胞用含10 μg/mL 聚凝胺的病毒上清液于37 ℃條件下感染24 h后，在HaCaT細(xì)胞中加入3 μg/mL嘌呤毒素，3 d后篩選得到穩(wěn)定的shSIRT1-HaCaT細(xì)胞模型。

1.3.4UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞損傷模型的構(gòu)建及加藥處理課題組前期研究[19]發(fā)現(xiàn)，10 μmol/L的安石榴苷對(duì)正常HaCaT細(xì)胞活力無(wú)顯著影響，且可逆轉(zhuǎn)UVB照射導(dǎo)致的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制，因此，本文選取該濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。單層Caco-2細(xì)胞模型構(gòu)建完成后，將安石榴苷母液用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋至10 μmol/L，替換Transwell培養(yǎng)板細(xì)胞培養(yǎng)小室中的原培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h后收集下室的培養(yǎng)液，儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱中，備用。

將生長(zhǎng)狀況良好、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HaCaT細(xì)胞、shSIRT1-HaCaT細(xì)胞以適宜濃度接種于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)24 h后，將各皿中的培養(yǎng)基吸出，添加少量PBS(1×,pH值為7.2～7.4)浸潤(rùn)細(xì)胞，用紫外交聯(lián)儀模擬UVB照射，劑量為8 mJ/cm2，24 h后再次進(jìn)行UVB照射。為保證各組實(shí)驗(yàn)操作的一致性，無(wú)需進(jìn)行紫外線照射的實(shí)驗(yàn)組仍需模擬UVB照射過(guò)程，用錫箔紙覆蓋避光。2次UVB照射結(jié)束6 h后，棄去舊培養(yǎng)基，各皿中加入回收的單層Caco-2細(xì)胞模型中下室的培養(yǎng)液(需提前預(yù)熱)，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.5 安石榴苷對(duì)UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生CPD的抑制作用評(píng)價(jià)參考M.Udono等[20]的方法進(jìn)行免疫熒光測(cè)試。將HaCaT細(xì)胞接種于熒光黑色平板中，培養(yǎng)過(guò)夜。第2 d從培養(yǎng)箱中取出平板，吸除原培養(yǎng)基。4%多聚甲醛固定15 min后，用冰冷甲醇浸沒細(xì)胞，冰上孵育10 min，隨后用含5%山羊血清和0.3%Triton-X100的封閉液室溫封閉1 h。吸除封閉液后，加入一抗(CPD抗體)4 ℃孵育過(guò)夜，而后加入二抗(Alexa Fluor 555標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體)室溫孵育1 h。用Hoechst 33342溶液在室溫條件下避光孵育10 min，用IN Cell Analyzer 1000獲取細(xì)胞圖像，用Multi-Target Analysis Tool進(jìn)行成像數(shù)據(jù)分析，用Spotfire DecisionSite Client v.8.2進(jìn)行可視化處理。

1.3.6HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPC基因轉(zhuǎn)錄水平的測(cè)定參考文獻(xiàn)[19]的方法測(cè)定細(xì)胞著色性干皮病基因組C(XPC)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。按照高純度RNA分離試劑盒說(shuō)明書上的步驟提取細(xì)胞RNA，利用ReverTra Ace qPCR RT 試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，參照KAPA SYBR Fast qPCR試劑盒說(shuō)明書配制反應(yīng)體系，隨后進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以β-actin作為內(nèi)參基因。XPC和β-actin基因的PCR堿基序列見表1。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences

1.3.7HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPA蛋白乙?；降臏y(cè)定參照1.3.4進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨后收集各組細(xì)胞，按照文獻(xiàn)[19]的方法進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。用預(yù)冷的NP-40裂解緩沖液進(jìn)行細(xì)胞全蛋白提取，在提取的總蛋白中加入Acetylated-Lysine抗體，4 ℃孵育過(guò)夜，形成免疫復(fù)合物。加入蛋白G磁珠捕獲抗體及其結(jié)合的蛋白，4 ℃孵育過(guò)夜。用樣品緩沖液(1 mol/L Tris-HCl(pH值為6.8),10%SDS,10%2-ME)洗脫免疫沉淀，采用蛋白免疫印跡法分析樣品。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)12%的聚丙烯酰胺凝膠電泳100 min，隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到Hybond-P蛋白雜交膜上，室溫條件下封閉2 h，加入XPA抗體于4 ℃條件下孵育過(guò)夜，而后加入二抗(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的馬抗小鼠IgG抗體)在室溫條件下孵育1 h。用ImmunoStar LD化學(xué)發(fā)光法測(cè)定蛋白乙?；剑脠D像分析儀進(jìn)行可視化處理。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用軟件SPSS 19.0處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，用T檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析，P<0.05表示差異顯著。利用軟件GraphPad Prism 8作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單層Caco-2細(xì)胞模型的TEER分析

Caco-2細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下可自發(fā)分化形成緊密的單細(xì)胞層組織，具有小腸微絨毛結(jié)構(gòu)和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)載體，是理想的腸道吸收模型[21]。TEER可在一定程度上反映單層Caco-2細(xì)胞的緊密性與完整性[22]。本研究分別在Caco-2細(xì)胞接種后第3 d、第14 d進(jìn)行TEER的測(cè)定。當(dāng)TEER達(dá)到約 800 Ω·cm2的穩(wěn)定讀數(shù)時(shí)，即可認(rèn)為Caco-2 細(xì)胞模型已完全分化[23]。單層Caco-2細(xì)胞的TEER測(cè)定結(jié)果如圖1所示，其中***表示組間差異極顯著(P<0.001)，下同。由圖1可知，Transwell培養(yǎng)板上的Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)至14 d時(shí)，TEER為(2350±140) Ω·cm2，表明細(xì)胞已形成完整的致密單層，模型建立成功，可進(jìn)行腸-皮膚共培養(yǎng)體系的構(gòu)建。

圖1 單層Caco-2細(xì)胞模型的TEER測(cè)定結(jié)果Fig.1 TEER assay of monalayer Caco-2 cells

2.2 安石榴苷對(duì)UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生CPD的抑制作用分析

CPD和6-4PPs是UVB誘導(dǎo)產(chǎn)生的主要光損傷產(chǎn)物，其中CPD占比約70%～80%[24-25]，是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中紫外線誘導(dǎo)突變的主要原因[26]。F.Afaq等[27]研究發(fā)現(xiàn)，在UVB照射前，用石榴汁或石榴提取物(均含有包括安石榴苷在內(nèi)的多酚類物質(zhì))分別在人體再造皮膚上進(jìn)行預(yù)處理，均可顯著減少CPD陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量，其作用機(jī)制與石榴衍生物的抗氧化活性和對(duì)DNA損傷修復(fù)的促進(jìn)作用相關(guān)。UVB照射后，安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)CPD水平的影響如圖2所示。由圖2a)可知，UVB照射使對(duì)照組的CPD陽(yáng)性細(xì)胞(紅色)比例從24%增加到31%，說(shuō)明本研究所采取的UVB照射方式能夠誘導(dǎo)光損傷產(chǎn)物的形成。安石榴苷處理后，CPD陽(yáng)性細(xì)胞比例降低至22%。此外，在未經(jīng)UVB照射的條件下，安石榴苷處理也能使CPD陽(yáng)性細(xì)胞比例從24%降至15%。此結(jié)果與課題組前期在HaCaT細(xì)胞模型中的研究結(jié)論一致[19]，表明安石榴苷在腸-皮膚共培養(yǎng)體系中模擬腸道吸收后仍能修復(fù)UVB誘導(dǎo)的光損傷，且在非紫外線照射條件下，安石榴苷對(duì)DNA也具有一定的保護(hù)作用。

圖2 安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)CPD水平的影響Fig.2 Effects of punicalagin on CPD level in HaCaT cells

為探究安石榴苷對(duì)CPD的抑制作用是否依賴于SIRT1蛋白的調(diào)控，本實(shí)驗(yàn)對(duì)UVB照射條件下Mock(空白對(duì)照)和shSIRT1-HaCaT細(xì)胞中的CPD水平進(jìn)行了評(píng)價(jià)，結(jié)果見圖2b)。在Mock細(xì)胞中，安石榴苷使CPD陽(yáng)性細(xì)胞比例從22%降至7%，慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)敲低SIRT1基因顯著消除了安石榴苷對(duì)CPD的抑制效果。由此可見，安石榴苷對(duì)UVB誘導(dǎo)光損傷的修復(fù)依賴于SIRT1蛋白的調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)在文獻(xiàn)[19]的基礎(chǔ)進(jìn)一步證明了安石榴苷經(jīng)單層Caco-2細(xì)胞模型轉(zhuǎn)運(yùn)后仍可發(fā)揮SIRT1蛋白的激活劑作用，促進(jìn)UVB誘導(dǎo)的光損傷的修復(fù)。其原因可能是SIRT1蛋白可負(fù)調(diào)控p53乙?；⒁种艭-Jun氨基末端激酶的激活，從而減弱紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[28]，還可通過(guò)調(diào)控XPC基因轉(zhuǎn)錄在UVB誘導(dǎo)DNA損傷的修復(fù)中發(fā)揮作用[29]。

2.3 安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPC基因轉(zhuǎn)錄水平的影響分析

研究[30]發(fā)現(xiàn)，UVB誘導(dǎo)產(chǎn)生的DNA損傷主要通過(guò)NER系統(tǒng)進(jìn)行修復(fù)。DNA損傷識(shí)別階段，NER系統(tǒng)有全基因組修復(fù)(GGR)和轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)修復(fù)(TCR)2條子路徑[31]。在GGR中，XPC-HR23B蛋白復(fù)合物與著色性干皮病基因組E蛋白(XPE蛋白)通過(guò)識(shí)別 DNA 損傷位點(diǎn)啟動(dòng)修復(fù)反應(yīng)[32]。安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPC基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平影響如圖3所示。由圖3可知，安石榴苷顯著上調(diào)了XPC基因的轉(zhuǎn)錄水平，這表明安石榴苷經(jīng)單層Caco-2細(xì)胞模型吸收轉(zhuǎn)運(yùn)后可通過(guò)增強(qiáng)XPC基因的表達(dá)促進(jìn)光損傷的修復(fù)。有研究表明，氧化應(yīng)激會(huì)抑制NER途徑對(duì)DNA損傷的修復(fù)[33]，NER途徑的激活與抗氧化活性相關(guān)[34]，而安石榴苷作為SIRT1蛋白的激活劑，對(duì)光損傷修復(fù)的促進(jìn)作用可能是由于其較強(qiáng)的抗氧化活性。

圖3 安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPC基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平影響Fig.3 Effects of Punicalagin on XPC mRNA transcription levels in HaCaT cells

2.4 安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPA蛋白乙酰化水平的影響分析

圖4 安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPA蛋白乙?；降挠绊慒ig.4 Effects of punicalagin on the acetylation level of XPA in HaCaT cells

XPA蛋白在DNA損傷驗(yàn)證環(huán)節(jié)中發(fā)揮作用，并作為分子支架通過(guò)蛋白質(zhì)間的相互作用在損傷位點(diǎn)附近召集其他NER核心因子[35]以完成后續(xù)的損傷修復(fù)工作。UVB照射條件下，安石榴苷對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)XPA蛋白乙?；降挠绊懭鐖D4所示。由圖4可知，安石榴苷顯著降低了Mock細(xì)胞中XPA蛋白乙?；剑宦《巨D(zhuǎn)導(dǎo)敲低SIRT1基因表達(dá)明顯抑制了安石榴苷對(duì)XPA蛋白乙?；降挠绊憽＞C上所述，在腸-皮膚共培養(yǎng)體系中，安石榴苷以SIRT1基因依賴的方式上調(diào)了NER途徑相關(guān)的XPA蛋白去乙?；?。這可能是由于UVB照射后，SIRT1蛋白與XPA蛋白結(jié)合，使其處于低乙?；癄顟B(tài)，從而調(diào)節(jié)NER途徑[36]。在NER途徑中，DNA損傷被識(shí)別后，TFIIH復(fù)合物在損傷部位周圍解開DNA鏈，XPA蛋白和復(fù)制蛋白A(RPA)分別與DNA的損傷部位和未受損部位結(jié)合，允許內(nèi)切酶結(jié)合并切除受損DNA鏈[37]。而SIRT1蛋白對(duì)XPA蛋白的調(diào)控能增強(qiáng)XPA蛋白與RPA蛋白相互作用的能力[36]，優(yōu)化NER途徑。盡管本文闡述了安石榴苷在腸-皮膚共培養(yǎng)體系中抑制UVB誘導(dǎo)的光損傷的可能機(jī)制，但安石榴苷在經(jīng)過(guò)腸道吸收后是以何種形式作用于HaCaT細(xì)胞從而發(fā)揮保護(hù)作用仍有待深入研究。

3 結(jié)論

本文構(gòu)建了Caco-2細(xì)胞與HaCaT細(xì)胞的腸-皮膚共培養(yǎng)體系，發(fā)現(xiàn)安石榴苷在經(jīng)過(guò)單層Caco-2細(xì)胞模型吸收轉(zhuǎn)運(yùn)后仍可促進(jìn)UVB誘導(dǎo)的光損傷的修復(fù)，其作用機(jī)制可能與激活NER途徑相關(guān)的XPC基因轉(zhuǎn)錄水平及以SIRT1基因依賴的方式提高XPA蛋白去乙?；较嚓P(guān)。本研究為篩選能夠激活SIRT1蛋白的天然活性成分提供了可行的體外模型，并提示了SIRT1蛋白的激活劑在促進(jìn)修復(fù)UVB誘導(dǎo)的皮膚損傷中的重要性，也為安石榴苷作為膳食活性成分的開發(fā)提供了理論依據(jù)，有利于促進(jìn)石榴資源的綜合開發(fā)利用。后續(xù)研究工作將利用動(dòng)物模型進(jìn)一步闡明安石榴苷的生物活性和分子作用機(jī)制。