敖金成，周桂夙，李永梅

(云南農(nóng)業(yè)大學(xué) a植物保護(hù)學(xué)院，b煙草學(xué)院，云南 昆明 650201)

健康優(yōu)質(zhì)的耕地資源對現(xiàn)代農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展至關(guān)重要。微生物在維持土壤質(zhì)量及推動(dòng)土壤健康發(fā)展方面具有十分重要的作用[1]。植物根際環(huán)境是一個(gè)特殊的生態(tài)系統(tǒng)，其與非根際土壤在生物學(xué)、化學(xué)等特性上具有顯著差異[2]。根際是植物根系、有益微生物和病原微生物同宿主植物發(fā)生相互作用的一個(gè)區(qū)域，蘊(yùn)含著豐富的微生物資源[3]，而病原菌的成功侵染必然經(jīng)過“根際”[4]。近年來，根際微生物與植物病害發(fā)生的關(guān)系已成為研究的熱點(diǎn)之一。正如楊珍等[4]指出，了解根際微生物與病害發(fā)生的互作關(guān)系，有利于從微生物種群、功能代謝和抑病物質(zhì)等方面研究找出防控土傳病害的有效方法。

煙草為茄科忌連作作物，是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。在諸多的煙草病害中，煙草根腐病是一種典型的土傳侵染性病害，具有危害面廣、防治難度大等特點(diǎn)，常與煙草黑脛病、青枯病、黑根腐病等根莖類病害混合發(fā)生，也可單獨(dú)發(fā)生。研究表明，鐮刀菌屬(Fusariumsp.)是引起煙草根腐病的主要病原菌[5-6]，其通過分泌毒素[7]、傷害煙草的維管束組織和根系組織[6]等方式對煙草侵染。煙草連作后真菌群落結(jié)構(gòu)的變化可能是引發(fā)烤煙連作障礙的主要原因之一[8]。鄭元仙等[9]研究認(rèn)為，感病根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)改變及物種多樣性降低是烤煙根腐病發(fā)生的重要特征。上述主要研究了感病煙株根際土壤真菌群落演化特征，但連作與感病互作對煙株根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性影響鮮見報(bào)道。李朋發(fā)等[10]基于FUNGuild對鐮刀菌根腐病發(fā)病煙株根際土壤真菌群落研究認(rèn)為，高通量測序與FUNGuild聯(lián)用可對土傳病害感病煙株根際土壤的優(yōu)勢病原真菌群落進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。為此，本研究基于ITS高通量測序技術(shù)探索不同連作年限煙田健株與病株根際土壤真菌群落組成、多樣性及其與土壤環(huán)境因子關(guān)聯(lián)性特征，揭示連作與感病交互作用對連作土壤微生態(tài)環(huán)境的影響，為定向優(yōu)化根際土壤微生態(tài)環(huán)境，創(chuàng)新土傳病害的防控方法提供參考。

1 材料與方法

1.1 連作土壤采集區(qū)概況

試驗(yàn)點(diǎn)地處云南省紅河州瀘西縣白水鎮(zhèn)(103°52′26″ E，24°40′03″ N)，海拔1 878.5 m，年均溫16.0～18 ℃，屬于北亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，烤煙大田生育期降水量740.0～810.0 mm。近年來煙田連作現(xiàn)象較為普遍，長期連作煙田占比較大。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集

于2020年7月烤煙成熟期分別對連作2年(T2)、4 年(T4)和8 年(T8)煙田健株(以下簡稱‘健株’，分別用HT2、HT4、HT8表示)和根腐病感病煙株(以下簡稱‘病株’，分別用ST2、ST4、ST8表示)根際土壤進(jìn)行取樣。取樣時(shí)去除地表雜物，然后將煙株整株挖起并去除根系外圍土，采用抖根法[11]，輕輕抖落并收集須根2 mm范圍內(nèi)土壤。對照(CK)為同區(qū)域撂荒2 年以上耕層土壤(0～20 cm)，未種植任何作物。同一連作年限健株與病株各取4個(gè)點(diǎn)，即4次重復(fù)，取樣點(diǎn)間距20 m，每個(gè)取樣點(diǎn)隨機(jī)選取3株烤煙采集根際土壤制成混合樣。用于化學(xué)性質(zhì)檢測的土壤樣品用自封袋密封帶回實(shí)驗(yàn)室自然風(fēng)干后過篩備用；用于真菌群落高通量測序分析的樣品用冷凍管分裝，保存于4 ℃車載冰箱迅速帶回實(shí)驗(yàn)室后保存于-80 ℃冰箱。供試烤煙品種為煙草根腐病高抗品種云煙87。供試土壤類型為紅壤。

1.2 測定項(xiàng)目及方法

1.2.1 土壤化學(xué)性質(zhì) 土樣風(fēng)干磨細(xì)過篩后備用。土壤堿解氮、速效磷、速效鉀、有機(jī)質(zhì)含量和pH值的測定參照文獻(xiàn)[12]的方法進(jìn)行。

1.2.2 土壤真菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性 基于高通量測序分析連作條件下健株和病株根際土壤真菌群落組成及多樣性。

(1)基因組DNA的提取。采用土壤DNA提取試劑盒HiPure Soil DNA Kits(Magen，中國廣州，cat#3412)。首先，在2 mL珠管中加入0.25～0.50 g土壤樣品和0.6 mL 緩沖溶液，利用渦旋儀(米歐mix-28+，廣州圍古潤儀器)充分勻漿裂解，然后于70 ℃水浴10 min，離心后收集管壁上液滴，加入200 μL聚苯乙烯緩沖液 和150 μL吸收溶液，渦旋混勻20 s，靜置5 min后離心5 min，取上清液至2 mL離心管，加入等體積5′-二磷酸鳥苷二鈉緩沖液，混勻以獲得DNA柱。然后用1%瓊脂糖(Biowest Agarose，西班牙)凝膠電泳(DYY-6C,北京六一儀器廠)檢測基因組DNA的完整性及是否發(fā)生蛋白等污染，然后將DNA樣品于-80 ℃條件下保存待用。

(2)目的基因擴(kuò)增及Illumina測序。目的基因擴(kuò)增及Illumina測序方法如下：采用帶有Barcode標(biāo)記的特異引物 (ITS3-KYO2:GATGAAGAACGYAGYRAA;ITS4:TCCTCCGCTTATTGATA-TGC)對真菌核糖體基因片段上的轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)進(jìn)行MiSeq擴(kuò)增子測序。PCR采用TransStart Fastpfu DNA Polymerase 聚合酶，每個(gè)樣本3次PCR重復(fù)，擴(kuò)增后將PCR產(chǎn)物混合后用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測純化效果。使用AMPure XP Beads對第2輪擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化，用ABI StepOnePlus RealTime PCR System(Life Technologies,美國)進(jìn)行定量，最后利用Illumina MiSeq PE250模式進(jìn)行高通量測序。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

真菌操作分類單元(operational taxonomic units,OTUs)和Alpha多樣性數(shù)據(jù)采用Excel(2017)進(jìn)行分析，處理間差異顯著性分析采用IBM Statistics SPSS 20.0的Duncan’s新復(fù)極差法。生信分析利用軟件平臺Usearch(version 7.0)對相似度在97%條件下的OTUs進(jìn)行質(zhì)控拼接和tag聚類去嵌合體，獲得tag序列和豐度。真菌群落組成使用R語言的Pheatmap包繪制物種豐度熱圖。利用軟件Mothur(version v.1.30.1)計(jì)算反映群落豐富度的Sobs指數(shù)、反映群落多樣性的Shannon-Weiner 指數(shù)和用于評估多樣性程度的PD-whole tree(PD)指數(shù)。利用Vegan包進(jìn)行主坐標(biāo)分析(principal co-ordinate analysis,PCoA)，并采用Anosim檢驗(yàn)進(jìn)行分組信息檢驗(yàn)，以評價(jià)樣本間的Beta多樣性特征。采用Labdsv包計(jì)算樣本中豐度值>0且總占比>0.1%的物種在每個(gè)分組的Indicator值，并使用Cross-validation進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，獲得P值。Indicator分析基于物種在樣本中的豐度和出現(xiàn)頻率，計(jì)算各物種在每個(gè)分組的Indicator值，Indicator數(shù)值越大，表示物種可能是該分組的指示物種。采用Vegan包進(jìn)行冗余分析(redundancy analysis，RDA)和繪圖，Psych包進(jìn)行土壤化學(xué)性質(zhì)與真菌物種相對豐度之間的Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 連作煙田健株和病株根際土壤真菌OTUs數(shù)

不同連作年限煙田健株和病株根際土壤真菌OTUs數(shù)見圖1。

基于97%序列相似性要求，共獲得113 134個(gè)有效序列，聚類得到517個(gè)真菌OTUs。從圖1可以看出，與CK相比，不同連作年限煙田HT2、HT4、HT8健株OTUs數(shù)降幅分別為2.9%，24.7%和50.2%，ST2、ST4、ST8病株OTUs數(shù)降幅分別為14.7%，37.8%和58.1%，隨連作年限的延長，健株和病株根際土壤OTUs數(shù)呈現(xiàn)明顯減少趨勢，但同一連作年限病株OTUs數(shù)降幅大于健株，短期連作(2～4年)土壤OTUs數(shù)降幅低于長期連作(8年)土壤。

2.2 連作煙田健株和病株根際土壤微生物群落豐度

由圖2-a可以看出，青霉菌屬(Penicillium)、鐮刀菌屬(Fusarium)、被孢霉屬(Mortierella)、淡紫紫孢菌屬(Purpureocillium)、圓孢霉屬(Staphylotrichum)、Fusicolla、毛殼菌屬(Chaetomium)、異莖點(diǎn)霉屬(Paraphoma)、鬼傘屬(Coprinellus)、Sistotrema、曲霉屬(Aspergillus)、Coelastrella、莖點(diǎn)霉屬(Phoma)、鏈格孢屬(Alternaria)、Setophoma、Spizellomyces、Plectosphaerella、Cladorrhinum、Roussoella是撂荒土壤和不同連作年限煙田健株和病株根際土壤排前19位的優(yōu)勢菌屬，累積相對豐度總和為20.5%～54.9%，其中HT2樣本的優(yōu)勢菌群累積相對豐度總和(20.5%)最低，CK樣本(36.4%)次之，ST8樣本最高，達(dá)54.9%。與CK相比，HT2、HT4和HT8樣本優(yōu)勢菌群累積相對豐度總和降幅分別為14.1%，43.9%和11.5%，ST2和ST8樣本優(yōu)勢菌群累積相對豐度總和增幅分別為9.4%和50.9%，而ST4降幅為4.5%。

由圖2-a還可知，與CK相比，HT2、HT4樣本鐮刀菌屬相對豐度增幅分別為226.8%和149.2%，ST2和ST4樣本增幅分別為665.1%和81.3%，而HT8和ST8樣本降幅分別為44.0%和32.9%；HT2、HT4和HT8樣本淡紫紫孢菌屬相對豐度降幅分別為960.8%，1 387.1%和295.2%，而ST2、ST4和ST8樣本降幅分別為1 107.1%，653.4%和1 373.9%；HT4和HT8樣本土壤青霉菌屬相對豐度增幅分別為17.0%和1 907.1%，ST2、ST4和ST8樣本土壤青霉菌屬相對豐度增幅分別為82.1%，965.9%和3 529.7%；毛殼菌屬相對豐度演化規(guī)律不明顯。

由圖2-b可以看出，與CK相比，HT2、HT4樣本茄腐鐮刀菌(F.solani)相對豐度增幅分別為270.5%和187.4%，ST2和ST4樣本增幅分別為844.3%和88.5%，而HT8、ST8樣本降幅分別為37.8%和24.5%。

2.3 連作煙田健株與病株根際土壤真菌群落Alpha多樣性

從表1可以看出，隨煙田連作年限的延長，HT2、HT4和HT8樣本與ST2、ST4和ST8樣本根際土壤真菌群落Alpha多樣性均呈降低趨勢，其中Sobs指數(shù)顯著降低(P<0.05)，PD指數(shù)極顯著降低(P<0.01)，Shannon-Weiner 指數(shù)整體呈降低趨勢。與CK相比，除HT2樣本Shannon-Weiner 指數(shù)提高1.7%外，HT4和HT8樣本Shannon-Weiner 指數(shù)分別下降20.9%和42.2%，ST2、ST4和ST8樣本分別下降22.4%，24.4%和38.0%。與CK相比，HT2、HT4和HT8樣本的PD指數(shù)降幅分別為2.5%，18.5%，42.2%，ST2、ST4和ST8樣本的PD指數(shù)降幅分別為14.1%，32.2%和48.0%。綜上所述，隨連作年限的延長，土壤真菌群落豐富度、多樣性及多樣性程度明顯銳減，且病株降幅整體大于健株。

表1 不同連作年限煙田健株和病株根際土壤真菌群落Alpha多樣性Table 1 Alpha diversity of rhizosphere soil fungal communities of healthy and diseased plants of different continuous cropping tobacco fields

2.4 連作煙田健株與病株根際土壤真菌群落Bate多樣性分析

由圖3可以看出，不同連作年限健株和病株根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)差異明顯，第1、2主成分軸對真菌群落結(jié)構(gòu)變異的解釋量分別為27.56%和23.80%。CK樣本與其他連作煙田健株和病株樣本距離較遠(yuǎn)，其中連作2年和4年煙田的健株和病株土壤樣本距離較近，說明其土壤真菌群落結(jié)構(gòu)較為相似，連作8年煙田的健株和病株土壤樣本均較其他樣本距離遠(yuǎn)。Anosim(analysis of anosim)檢驗(yàn)結(jié)果(表2)進(jìn)一步表明，連作2年煙田的健株與病株根際土壤樣本間存在顯著差異，P值為0.031;連作4年和連作8年煙田的健株與病株根際土壤樣本間差異不顯著。不同連作年限健株間、不同連作年限病株間以及不同連作年限健株與病株間根際土壤真菌的群落結(jié)構(gòu)R2值分別為0.793，0.719和0.677，P值均為0.001，說明各樣本組間與組內(nèi)差異均達(dá)到極顯著性水平。

2.5 連作煙田健株與病株根際土壤真菌群落指示物種

從圖4可以看出，高山被孢霉菌(Mortierellaalpina)，Saitozymapodzolica和Lobomonasfrancei為CK樣本的指示物種，其相對豐度分別為0.74%，0.87%和0.80%，均顯著或極顯著高于其他樣本。Oidiodendroncereale、Mycothermusthermophilus和Stemphyliumsp為HT2樣本的指示物種，其相對豐度分別為0.68%，0.73%和0.79%，均顯著或極顯著高于其他樣本。Lophiotremarubi為HT4樣本的指示物種，其相對豐度(0.66%)顯著高于其他樣本。Filobasidiummagnum和綠僵菌(Metarhiziumanisopliae)真菌為ST8樣本的指示物種，其相對豐度分別為0.65%和0.67%，均顯著高于其他樣本(P<0.05)。綜上所述，撂荒土壤、連作2年土壤指示物種相對豐度較高，而連作4年和8年煙田的健株和病株真菌指示物種整體較少。

2.6 連作煙田健株和病株根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)與土壤化學(xué)性質(zhì)的相關(guān)性

2.6.1 土壤化學(xué)性質(zhì) 從表3可以看出，不同連作年限煙田健株和病株根際土壤pH值以及有機(jī)質(zhì)、堿解氮、速效磷和速效鉀含量存在顯著或極顯著差異。與CK相比，隨連作年限的增加，健株和病株根際土壤pH值極顯著降低(P<0.01)，而土壤速效磷和速效鉀含量極顯著增加；堿解氮含量以HT4和ST4樣本最高，且均顯著高于CK；HT2，HT8和ST8根際土壤樣本有機(jī)質(zhì)含量均低于CK，其他處理顯著高于CK?？傮w來看，連作2年(HT2和ST2)和連作4年(HT4和ST4)土壤養(yǎng)分含量整體一致，而連作8年(HT8和ST8)土壤pH值和有機(jī)質(zhì)、堿解氮含量整體較低。同一連作年限健株根際土壤pH值整體低于病株，而速效磷含量均明顯高于病株，短期連作(2～4年)健株根際土壤速效鉀含量明顯低于病株，而連作8年煙田健株根際土壤速效鉀含量明顯高于病株。

表3 不同連作年限煙田健株與病株根際土壤的化學(xué)性質(zhì)Table 3 Soil chemical properties of healthy and diseased plants in tobacco fields with different continuous cropping years

2.6.2 真菌群落結(jié)構(gòu)與土壤化學(xué)性質(zhì)的相關(guān)性 由圖5-a可以看出，連作煙田健株和病株根際土壤真菌群落第1、2排序軸貢獻(xiàn)率累積解釋變異量達(dá)到91.74%，說明排序軸能很好地反映連作煙田健株和病株根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)和土壤化學(xué)性質(zhì)之間的關(guān)系。由圖5-b可知，在屬水平上，土壤優(yōu)勢真菌群落結(jié)構(gòu)與土壤化學(xué)性質(zhì)存在明顯的相關(guān)性。pH值與青霉菌屬相對豐度呈顯著負(fù)相關(guān)，而與被孢霉屬相對豐度顯著正相關(guān)。有機(jī)質(zhì)含量與曲霉屬(Aspergillus)相對豐度顯著正相關(guān)。堿解氮含量與圓孢霉屬相對豐度、速效鉀含量與異莖點(diǎn)霉屬相對豐度均顯著負(fù)相關(guān)。pH值與被孢霉屬(Mortierella)相對豐度、有機(jī)質(zhì)含量與曲霉屬(Aspergillus)相對豐度、堿解氮含量與圓孢霉屬(Staphylotrichum)相對豐度、速效鉀含量與異莖點(diǎn)霉屬(Paraphoma)和Coelastrella相對豐度均顯著相關(guān)?；贛antel相關(guān)性(圖5-c)分析表明，物種對應(yīng)的樣本距離和土壤化學(xué)性質(zhì)對應(yīng)的樣本距離矩陣相關(guān)系數(shù)r為0.456，P值為0.001,說明兩個(gè)矩陣極顯著相關(guān)。其中以pH值對真菌物種分布的影響最大，其貢獻(xiàn)值為7.56%；其次為速效鉀含量(圖5-d)。

3 討 論

3.1 連作和根腐病感染對煙株根際土壤真菌群落組成的影響

本研究中，連作和根腐病感染整體降低了煙株根際土壤真菌優(yōu)勢菌屬相對豐度水平，病株降幅明顯大于健株，病原菌群落相對豐度增加，生防菌豐富度降低。與CK相比，3種連作年限煙田健株和病株根際土壤真菌優(yōu)勢菌群累積相對豐度總和整體呈降低趨勢，其中病株增幅是健株的2.44～4.44倍。這與陳丹梅等[13]的研究結(jié)果連作導(dǎo)致真菌種群數(shù)相對減少，但優(yōu)勢種群突出一致。本試驗(yàn)中，鐮刀菌屬、鏈格孢屬、異莖點(diǎn)霉屬均是連作及感病煙株根際土壤優(yōu)勢真菌菌群。前人研究結(jié)果表明，土壤鐮刀菌屬是農(nóng)作物和經(jīng)濟(jì)作物的重要病原菌[14]，能引起煙草根腐病感染的鐮刀菌病原菌已有較多報(bào)道[5-7,15-17]。本試驗(yàn)中，與對照相比，HT2、ST2、HT4和ST4樣本的鐮刀菌屬相對豐度增幅為81.3%～665.1%，種水平鑒定為茄腐鐮刀菌，相對豐度增幅為88.5%～844.3%，說明茄腐鐮刀菌可能是引起試驗(yàn)煙株感染根腐病的主要病原菌，形態(tài)鑒定有待進(jìn)一步研究。HT8和ST8樣本茄腐鐮刀菌相對豐度下降，很可能與該煙田進(jìn)行過防治黑脛病、青枯病藥物灌根處理有關(guān)。鏈格孢屬真菌是重要的植物病原菌之一[18-19]，煙草上主要引起赤星病[20]。淡紫紫孢菌屬是一種重要的生防菌，在根結(jié)線蟲防治方面有廣泛應(yīng)用[21-22]。本試驗(yàn)中，健株和病株樣本淡紫紫孢菌屬群落相對豐度降幅為295.2%～1 387.1%，說明連作煙田還存在根結(jié)線蟲感染的潛在風(fēng)險(xiǎn)?？梢姡B作煙田根腐病感病煙株根際土壤大量病原菌成優(yōu)勢菌群，很可能是茄腐鐮刀菌在群落的競爭中占據(jù)優(yōu)勢，拮抗菌因?yàn)楦偁幠芰θ醵惶蕴虮灰种?，從而?dǎo)致作物真菌病害的發(fā)生機(jī)率增加[13]。

3.2 連作和根腐病感染對煙株根際土壤真菌群落多樣性的影響

植物與土壤之間的反饋?zhàn)饔靡话銜ㄟ^微生物進(jìn)行調(diào)節(jié)[23]。目前學(xué)術(shù)界關(guān)于連作導(dǎo)致土壤真菌群落多樣性發(fā)生趨向性改變存在不同觀點(diǎn)。許多學(xué)者研究認(rèn)為，隨連作年限的增加真菌數(shù)量增加[24-25]。也有研究表明，真菌群落多樣性和豐富度指數(shù)隨連作年限的增加呈先上升后下降趨勢[26]。也有學(xué)者研究認(rèn)為，健株根際土壤中真菌多樣性顯著高于病株根際土壤[27-30]。本研究結(jié)果表明，隨連作年限的延長，健株和病株根際土壤真菌群落多樣性均不同程度降低，但整體以病株根際土壤真菌群落多樣性降幅大于健株。另有學(xué)者研究認(rèn)為，健株與病株根際土壤真菌群落在組成上存在差異，而真菌多樣性差異不顯著[31-33]。因而連作2年和4年的健株和病株根際土壤樣本真菌群落結(jié)構(gòu)較為相似，而與撂荒土壤和連作8年的健株和病株差距較大。

3.3 連作和根腐病感染煙株根際土壤理化性質(zhì)與真菌群落分布的關(guān)系

礦質(zhì)營養(yǎng)不僅對植物的正常生長發(fā)育起重要作用，而且以多種方式直接或間接影響病原物的侵染、繁殖及植株的感病性和抗病性[34-35]。Song等[22]研究指出，黃連(CoptischinensisFranch.)連作土壤理化性質(zhì)可直接或間接影響真菌生長，進(jìn)而影響真菌群落結(jié)構(gòu)。土壤理化性質(zhì)與硒砂瓜連作年限無顯著相關(guān)性，而與土壤真菌群落結(jié)構(gòu)存在顯著相關(guān)性[26]。本研究結(jié)果表明，連作煙田健株和病株根際土壤真菌群落分布與土壤主要化學(xué)性質(zhì)之間存在明顯的關(guān)聯(lián)性，其中以與pH值極顯著或顯著正相關(guān)或負(fù)相關(guān)的真菌種群較大，其貢獻(xiàn)值最高，其次為速效鉀含量。說明土壤pH值和速效鉀含量是影響真菌群落的核心環(huán)境因子，連作土壤改良應(yīng)首要調(diào)控土壤pH值和速效鉀含量，可以間接調(diào)控連作土壤真菌群落結(jié)構(gòu)及分布，這與劉株秀等[36]的研究結(jié)果一致。這也解釋了連作煙田板結(jié)嚴(yán)重、易發(fā)病，而有些地塊即使連作年限較長，其病害發(fā)生也較輕。

4 結(jié) 論

(1)連作和根腐病感染提高了煙株根際土壤真菌優(yōu)勢菌屬豐富度水平，病株增幅明顯大于健株，總體表現(xiàn)為病原菌群落豐度增加，而有益菌群落豐度降低。茄腐鐮刀菌可能是引起試驗(yàn)煙株根腐病的主要病原菌。

(2)連作及感病促使土壤真菌群落結(jié)構(gòu)單一化加劇，多樣性程度降低，長期連作(4～8年)土壤樣本群落組成較相似，指示物種豐度較低。

(3)土壤pH值和速效鉀含量是影響連作和感病煙株根際土壤真菌群落分布的核心環(huán)境因子。