汪笑秋，虞偉妃，趙麗萍，周玨伊，馮繼紅

(麗水市人民醫(yī)院 溫州醫(yī)科大學附屬第六醫(yī)院腫瘤內科，浙江 麗水 323000)

卵巢癌作為一種惡性腫瘤疾病，其早期缺少癥狀或癥狀不典型，易被患者忽視，早期診斷較困難。部分患者就診時已處于晚期，而晚期病例療效不佳。因此，該病的死亡率居婦科腫瘤的第一位[1-2]。目前臨床治療卵巢癌以手術治療為主，輔以化學治療、放射治療、免疫治療等[3]。奧拉帕利是多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose poly-merase，PARP)抑制劑，可通過抑制PAPR酶對腫瘤細胞中DNA損傷的修復，從而阻滯癌變。有研究顯示，若其與抗血管生成劑聯(lián)合使用時，有助于提高療效[4]。血管生成是腫瘤生長和轉移的重要環(huán)節(jié)，抗血管生成在卵巢癌治療中具有一定成效，其中阿帕替尼為一種抗血管生成靶向藥物，在卵巢癌治療中具有一定療效[5]。目前國內外暫未發(fā)現(xiàn)奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼在卵巢癌患者治療中的報道，故在本文研究中選取2016年1月-2020年1月我院收治的200例卵巢癌患者，觀察奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼在卵巢癌中治療效果及對可溶性間皮素相關肽(soluble mesothelin related peptide，SMRP)、人肺腺癌轉移相關轉錄本1(metastasis associated in lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT-1)水平的影響，現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2016年1月至2020年1月于我院就診的卵巢癌患者200例作為研究對象。以隨機數(shù)字表法分為奧拉帕利組(n=94)和聯(lián)合治療組(n=106)。奧拉帕利組僅采用奧拉帕利進行治療，聯(lián)合治療組采用奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼進行治療。納入標準：①符合《卵巢癌診療規(guī)范(2018年版)》[6]中卵巢癌診斷標準；②無炎癥、感染且可正常交流者；③預計生存期>3個月。排除標準：①合并凝血、精神異?；虬橛凶陨砻庖呒膊≌?；②治療期間未能完成隨訪者；③對研究所用藥物過敏者。所有患者及其家屬對本次研究知情且已簽署知情同意書，研究已獲得我院倫理委員會批準。

奧拉帕利組年齡為43～69歲，聯(lián)合治療組年齡為45～68歲。奧拉帕利組和聯(lián)合治療組的一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 研究方法

1.2.1 治療方法

奧拉帕利組采用奧拉帕利進行治療，200mg/d，2次/d；聯(lián)合治療組組采用奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼進行治療，奧拉帕利服用方法同奧拉帕利組，阿帕替尼起始劑量為500mg/次，1次/d。兩組服藥時間均為餐后30min口服，以28d為1個觀察周期。對耐受患者持續(xù)給藥至疾病進展，以4周為1個療程。分別于兩組治療開始前和1個觀察周期后采集研究對象的血液樣本，以進行相關指標檢測。

1.2.2 指標檢測

T淋巴細胞水平：采用江蘇博美達生命科學有限公司的Life Attune聲波聚焦流式細胞儀檢測T淋巴細胞水平。

腫瘤標志物及血清SMRP水平：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測腫瘤標志物癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、糖類抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)、糖類抗原153(carbohydrate antigen 153，CA153)及血清SMRP水平。實驗步驟：設置10個標準孔并準備相應水平標準品，設置1個空白孔及若干待測樣品，在10μL待測樣品中加入40μL樣本稀釋液，封板膜封板，置于37℃水浴箱溫育30min，清洗反應板5次，每次間隔30s；拍干，在除空白孔以外的各孔中加入酶標液50μL，封膜溫育30min，清洗反應板5次，每次間隔30s；拍干，在各孔中加入顯色A液、B液各50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光環(huán)境下顯色15min，在反應孔內加入終止液5μL/孔以終止反應，450nm波長測量每孔吸光度，查出上述指標水平。

血清MALAT-1水平：采用實時熒光定量法檢測血清MALAT-1水平。實驗步驟：將1mL TRNzol加入血清樣本取總DNA并檢測其純度和濃度，提取2μg總DNA并加入內參GAPDH及目的小分子RNA MALAT-1逆轉錄引物，42℃ 15min，85℃ 5s，逆轉錄合成cDNA；熒光定量PCR的循環(huán)參數(shù)設定為95℃每10min，然后95℃每15min，60℃每1min，一共40個循環(huán)。使用Primer 5.0軟件對引物序列進行設計，MALAT-1引物序列上游：5′-TCACTAAAGGCACCGAAGG-3′，下游：5′-CCAGAAAGAGGGAGTTGAGG-3′；內參GA PDH引物序列上游：5′-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3′，下游：5′-CAAAGTTGTCATGGATGHACC-3′，Ct值(2-△△Ct)法表示MALAT-1。

1.2.3治療效果評估

治療效果評估：參照世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)實體瘤療效評估標準及國際婦科腫瘤學會(International Gynecologic Cancer Society，IGCS)卵巢癌療效判斷標準，其中完全緩解為可測量病灶消失和/或CA125值降至正常范圍維持4周以上；部分緩解為可測量病灶消失和/或CA125值下降≥50%；疾病穩(wěn)定為可測量病灶消失和/或CA125值下降<50%或無變化；疾病進展為病灶大小和/或CA125值持續(xù)增長，疾病控制率=(完全緩解+部分緩解+疾病穩(wěn)定)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

遠期療效評估：對所有入組卵巢癌患者進行為期3年的電話隨訪，對比兩組1年、3年生存率。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 兩組T淋巴細胞水平比較

兩組治療前T淋巴細胞水平對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組治療后CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD4+/CD8+水平均高于治療前，CD8+T細胞水平均低于治療前，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。治療后，與奧拉帕利組相比，聯(lián)合治療組的CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD4+/CD8+水平均顯著增高，而CD8+T細胞水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組T淋巴細胞水平比較

2.2 兩組腫瘤標志物水平比較

兩組治療前腫瘤標志物水平對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后，兩組腫瘤標志物CEA、CA125、CA153的水平低于治療前(P<0.05)。與奧拉帕利組相比，聯(lián)合治療組腫瘤標志物CEA、CA125、CA153的水平均顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組腫瘤標志物水平比較

2.3 兩組血清SMRP、MALAT-1水平比較

兩組治療前血清SMRP、MALAT-1水平對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組治療后血清SMRP、MALAT-1水平低于治療前(P<0.05)。與奧拉帕利組相比，聯(lián)合治療組血清SMRP、MALAT-1水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組血清SMRP、MALAT-1水平比較

2.4 兩組治療效果比較

聯(lián)合治療組的疾病控制率為93.40%，高于奧拉帕利組的疾病控制率84.04%，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 兩組治療效果比較[n(%)]

2.5 兩組遠期療效比較

如表6、圖1所示，聯(lián)合治療組1年生存率、3年生存率均明顯高于奧拉帕利組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表6 兩組遠期療效比較[n(%)]

圖1 1年、3年生存曲線圖

3 討論

3.1 卵巢癌的臨床治療

卵巢癌是一種惡性腫瘤，其整體發(fā)病率略低于其他婦科腫瘤，但部分患者在確診時已處于晚期階段，病死率較高。目前，卵巢癌的臨床治療以手術治療為主，輔以藥物化療，加之維持治療，形成綜合治療模式。作為PARP抑制劑的代表藥物，奧拉帕利可通過抑制基因同源重組缺陷，殺死突變腫瘤細胞，治療有特異性DNA修復缺陷的腫瘤；此外，可修復化療后DNA損傷，降低血清CA125水平[7-9]。近年來，隨著分子靶向藥物研究的不斷進展，抗血管生成藥物被用于卵巢癌的維持治療。阿帕替尼是一種小分子酪氨酸激酶抑制劑，由我國自主研制，可高度地選擇性結合并抑制血管內皮生長因子受體活性。其作為新型的口服小分子抗血管生成抑制劑，臨床常將其作為晚期胃癌三線及以上治療藥物。有研究顯示，阿帕替尼可能通過阻斷血管內皮生長因子與血管內皮生長因子受體2結合及血管內皮生長因子受體2自磷酸化，抑制血管內皮生長因子在刺激內皮細胞增殖、遷移和降低微血管密度方面的功能，進而發(fā)揮其抗腫瘤的作用[10-12]。

3.2 奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼對卵巢癌免疫細胞及腫瘤標志物的影響

既往研究顯示，免疫功能是生物體進化、個體發(fā)育過程中相對重要的防衛(wèi)能力，亦是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，其中腫瘤細胞通過自分泌與旁分泌促進腫瘤的生長與增殖[13]。T淋巴細胞不僅在免疫耐受中發(fā)揮著重要作用，亦在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮作用，多表現(xiàn)為CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD4+/CD8+水平下降，CD8+T細胞水平升高，表明在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中伴隨免疫水平下降[14]。在本文研究中，經聯(lián)合治療組治療后，T淋巴細胞水平改善程度顯著優(yōu)于奧拉帕利組，說明兩者聯(lián)合可提高卵巢癌患者機體免疫功能，防止腫瘤微環(huán)境向促進卵巢癌方向發(fā)展。

血清腫瘤標志物是臨床用于篩查惡性腫瘤的常用手段，其中CEA、CA125、CA153為常見的卵巢癌特異性指標，CEA是一種廣譜腫瘤標志物，CA125、CA153是糖類抗原腫瘤標志物，上述三種指標在卵巢癌診斷中具有一定價值，聯(lián)合檢測可提高腫瘤檢出率[15-16]。在本文研究中，通過對卵巢癌患者血清CEA、CA125、CA153腫瘤標志物水平進行檢測，間接反映腫瘤惡性程度，結果顯示，奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼在卵巢癌治療中可顯著降低腫瘤標志物水平，其原因可能為兩藥聯(lián)合可發(fā)揮互補作用，可能通過某種特定機制調節(jié)腫瘤標志物水平，但具體機制有待后續(xù)研究進一步證實。

3.3 奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼對卵巢癌血清指標的影響

有研究顯示，SMRP是錨定于細胞表面的MSLN經過酶修飾后的異構體，可作為篩查惡性腫瘤的血清指標之一，其在卵巢癌患者中表達水平顯著高于良性卵巢腫瘤患者[17-18]。MALAT-1長度超過8000 nt，屬于長鏈非編碼RNA，定位于染色體11q13.1，全長8.7 kb，在乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中表達異常，且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉移過程中發(fā)揮著重要功能，其表達升高對腫瘤的發(fā)生具有促進作用[19-20]。改善腫瘤患者生存情況是抗腫瘤治療的最終目的[21]。在本文研究中，奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼可有效降低卵巢癌患者血清SMRP、MALAT-1水平，提升隨訪期內生存率，延長生存時間，說明兩者聯(lián)合可通過下調SMRP、MALAT-1水平表達，阻滯卵巢癌進展和優(yōu)化遠期結局。

綜上所述，本文研究結果顯示，奧拉帕利聯(lián)合阿帕替尼在卵巢癌治療中可降低患者血清腫瘤標志物及SMRP、MALAT-1水平，提高機體免疫功能，改善治療效果，延長生存時間，在一定程度上改善總體治療效果，值得在臨床上推廣。