汪輝，鄧楠，崔曉嬌,2，陳先桂，王璐，袁圓,2，陳高超，周策睿

（1.長(zhǎng)沙市食品藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家酒類產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心（湖南），湖南長(zhǎng)沙 410016）

（2.食品安全監(jiān)測(cè)與預(yù)警湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙 410111）

隨著人們生活質(zhì)量的提高，食品安全問(wèn)題日益受到大眾的關(guān)注。近來(lái)年，細(xì)菌性食物中毒時(shí)常發(fā)生，其中關(guān)于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）中毒事件較為突出[1-6]。2020年10月，黑龍江雞西市發(fā)生的“酸子湯”（酵米面）事件造成9名中毒者全部死亡，經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)健部門定性為由椰毒假單胞菌污染引起的食物中毒事件。銀耳如果儲(chǔ)存不當(dāng)或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，也易受該菌污染而引起中毒[1,5]。引起中毒的原因是唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）產(chǎn)生了米酵菌酸和毒黃素[4,7-9]?？傮w來(lái)說(shuō)，米酵菌酸的毒性較大，關(guān)注度較高，檢測(cè)方法較成熟，且有食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法[10]。但毒黃素（見(jiàn)圖1）的毒理學(xué)表明：小鼠靜脈口服毒黃素L D50為8.39 mg/kg[8]，毒性也較大，對(duì)人、動(dòng)物、許多微生物及植物皆有毒性作用[11-13]。關(guān)于其作用部位、致毒機(jī)理的研究也有不少的報(bào)道[14-16]。熱誠(chéng)菌素是毒黃素的同分異構(gòu)體（見(jiàn)圖1），和毒黃素一樣，擁有嘧啶并三嗪環(huán)骨架結(jié)構(gòu)，且在一定化學(xué)條件下兩者能夠相互轉(zhuǎn)化[17]。其毒理學(xué)表明：倉(cāng)鼠腹腔注射LD50為11.2 mg/kg。由于兩者毒性均較高，中毒后需盡快解毒，所以其穩(wěn)定性研究很有必要，但目前該研究尚屬空白。因此，為了預(yù)防唐菖蒲伯克霍爾德氏菌中毒事件的發(fā)生以及后期中毒的鑒定和分析，需建立酵米面和銀耳及其制品中的毒黃素和熱誠(chéng)菌素的測(cè)定方法，并對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行穩(wěn)定性考察。

圖1 毒黃素和熱誠(chéng)菌素的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formulas of toxoflavin and fervenulin

目前，毒黃素和熱誠(chéng)菌素的穩(wěn)定性研究較少，關(guān)于毒黃素的檢測(cè)方法較多，關(guān)于熱誠(chéng)菌素的檢測(cè)方法較少，主要有薄層色譜法[18]、分光光度法[19,20]、高效液相色譜法[21]、高效液相-質(zhì)譜法[7]及流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法在線監(jiān)測(cè)法[22]等。這些方法大多應(yīng)用于細(xì)菌培養(yǎng)液中高濃度毒黃素的測(cè)定，不適用于食品中低含量毒素的測(cè)定。張偉等[7]采用了較昂貴的超高效液相色譜-三重四極桿/復(fù)合線性離子阱質(zhì)譜，一般實(shí)驗(yàn)室難以實(shí)現(xiàn)，且對(duì)人員操作要求較高；周鵬等[23]和王朝霞等[24]建立的高效液相色譜法采用低波長(zhǎng)檢測(cè)，可能存在一定干擾，且靈敏度有待提高。本文以酵米面和銀耳及其制品為研究對(duì)象，建立了一種測(cè)定酵米面和銀耳及其制品中毒黃素和熱誠(chéng)菌素的高效液相色譜法。同時(shí)，對(duì)毒黃素和熱誠(chéng)菌素的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，以期為后期解毒或避毒研究提供參考。該方法前處理簡(jiǎn)單，干擾較小，準(zhǔn)確度和靈敏度較高，具有一定的應(yīng)用價(jià)值，可以為毒黃素和熱誠(chéng)菌素的致毒機(jī)理及解毒方法的研究提供新的技術(shù)支撐，同時(shí)也可以更好地應(yīng)對(duì)和處理此類食品安全事故，以尋找搶救的最佳方案，減少死亡率。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1260型高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫科技有限公司；UV-2450紫外分光光度計(jì)，日本島津公司；Milli-Q Direct 8超純水儀，德國(guó)MERCK公司。

毒黃素純度為97.22%，熱誠(chéng)菌素純度為98.17%，香港標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究所；GBW(E)130417紫外分光光度計(jì)用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（重鉻酸鉀溶液），四川中測(cè)標(biāo)物科技有限公司；甲醇為色譜純，德國(guó)MERCK公司；甲酸為色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，氨水為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；食用小蘇打（碳酸氫鈉），長(zhǎng)沙智騰食品貿(mào)易有限公司；食用純堿（碳酸鈉），武漢成達(dá)食品有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q Direct 8超純水儀制得的超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別精確稱取毒黃素和熱誠(chéng)菌素各10 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得到濃度為400 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，冷凍條件下（-18 ℃）可保存5個(gè)月。采用體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸溶液配制成標(biāo)準(zhǔn)系列使用液，供高效液相色譜分析。

1.3 波長(zhǎng)的選擇

采用不接色譜柱直接進(jìn)樣，高效液相色譜儀二極管陣列檢測(cè)器對(duì)毒黃素和熱誠(chéng)菌素在210～600 nm進(jìn)行光譜掃描，根據(jù)掃描結(jié)果設(shè)置合適波長(zhǎng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液測(cè)試，根據(jù)測(cè)試結(jié)果選擇波長(zhǎng)。

1.4 進(jìn)樣溶劑優(yōu)化

采用0.1%甲酸水、0.1%甲酸水-甲醇（95:5，V/V）、0.1%甲酸水-甲醇（90:10，V/V）、0.1%甲酸水-甲醇（80:20，V/V）和0.1%甲酸水-甲醇（70:30，V/V）配制20 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察進(jìn)樣溶劑對(duì)目標(biāo)物的色譜峰形的影響。

1.5 提取溶劑的選擇

毒黃素和熱誠(chéng)菌素溶于甲醇和水，本試驗(yàn)參考流動(dòng)相考察采用0.1%甲酸水和甲醇提取樣品，觀察提取時(shí)樣品狀態(tài)和后期樣品溶液過(guò)濾狀態(tài)。

1.6 色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水，B為甲醇，梯度洗脫程序：0～5.00 min，6% B，5.00～10.00 min，6% B～50% B，10.00～12.00 min，50% B，12.01 min，6% B；毒黃素檢測(cè)波長(zhǎng)：398 nm，熱誠(chéng)菌素檢測(cè)波長(zhǎng)：338 nm，柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：80 μL。

1.7 樣品前處理

取10 g酵米面（取樣前混勻）或5 g銀耳罐頭（取樣前勻漿）于50 mL離心管中，加入10 mL 0.1%甲酸超聲提取10 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液于25 mL容量瓶中，重復(fù)提取一次，合并上清液，用0.1%甲酸溶液定容至刻度，混勻，取溶液過(guò)0.45 μm濾膜，待測(cè)。

取5 g鮮銀耳（取樣前粉碎至顆粒狀）或干銀耳（取樣前粉碎至粉末狀）于50 mL離心管中，加入25 mL甲醇超聲提取10 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液1 mL于10 mL刻度塑料離心管中，45 ℃氮吹至近干，0.1%甲酸溶液定容至1 mL，渦旋復(fù)溶1 min，取溶液過(guò)0.45 μm濾膜，待測(cè)。

1.8 方法學(xué)驗(yàn)證

標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限：配制濃度為0.20、0.40、0.80、1.00、2.00、4.00、8.00、10.00、20.00 mg/L的毒黃素和熱誠(chéng)菌素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)濃度平行測(cè)定3次。以3倍信噪比計(jì)算檢出限，10倍信噪比計(jì)算定量限。

加標(biāo)回收率和精密度：在空白酵米面中添加0.50、1.00、5.00 mg/kg的毒黃素和熱誠(chéng)菌素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在空白鮮銀耳、干銀耳和銀耳罐頭分別添加1.00、2.00、10.00 mg/kg的毒黃素和熱誠(chéng)菌素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.4節(jié)方法進(jìn)行前處理和1.2節(jié)儀器條件進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)添加水平濃度平行測(cè)定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度。

專屬性試驗(yàn)：毒黃素和熱誠(chéng)菌素是水溶性黃色毒素。本試驗(yàn)配制了實(shí)驗(yàn)室常測(cè)的水溶性橙黃色色素（酸性橙1、酸性橙2、堿性橙2、堿性橙22、檸檬黃、日落黃）和生物毒素（黃曲霉毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲毒毒素A）標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用建立的方法進(jìn)行分析，考察對(duì)目標(biāo)分析物有無(wú)影響。

1.9 穩(wěn)定性比對(duì)

采用甲醇配制100 mg/L的毒黃素和熱誠(chéng)菌素的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別采用0.1%甲酸，1%甲酸和0.1%氨水配制10 mg/L的毒黃素和熱誠(chéng)菌素的標(biāo)準(zhǔn)使用液。在相應(yīng)的環(huán)境中分別保存0、1、2、3、4、5個(gè)月，采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定毒黃素（258 nm和398 nm）和熱誠(chéng)菌素（240 nm和338 nm）的吸光度（見(jiàn)表1）。每次測(cè)定前采用GBW(E)130417紫外分光光度計(jì)用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（重鉻酸鉀溶液）對(duì)紫外分光度計(jì)進(jìn)行透射比測(cè)定。

表1 毒黃素和熱誠(chéng)菌素的穩(wěn)定性試驗(yàn)Table 1 Stability tests of toxoflavin and fervenulin

1.10 數(shù)據(jù)處理

本文化合物結(jié)構(gòu)式采用ACD/Labs releasee：12.00軟件繪圖，其他繪圖均采用OriginPro 2018C(64-bit)SR1 b9.5.195軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 波長(zhǎng)的選擇

毒黃素在258 nm和398 nm有較大吸收峰，熱誠(chéng)菌素在240 nm和338 nm有較大吸收峰，且兩種目標(biāo)物在低波長(zhǎng)的吸收峰均高于高波長(zhǎng)吸收峰（見(jiàn)圖2）。在分析標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，采用對(duì)應(yīng)的低波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)兩種目標(biāo)物的靈敏度均高于高波長(zhǎng)（見(jiàn)圖3），但采用低波長(zhǎng)分析樣品溶液時(shí)，由于大多數(shù)化合物在低波長(zhǎng)均有一定的吸收，且樣品基質(zhì)較復(fù)雜，雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物的測(cè)定干擾較嚴(yán)重。當(dāng)波長(zhǎng)為398 nm，毒黃素能獲得較高的靈敏度，當(dāng)波長(zhǎng)為338 nm時(shí)，熱誠(chéng)菌素能獲得較高的靈敏度，且在這兩種波長(zhǎng)下目標(biāo)化合物的干擾較小[23]。因此，本方法選擇在398 nm波長(zhǎng)下測(cè)定毒黃素和在338 nm波長(zhǎng)下測(cè)定熱誠(chéng)菌素。

圖2 毒黃素和熱誠(chéng)菌素的光譜圖Fig.2 Spectrograms of toxoflavin and fervenulin

圖3 4種加標(biāo)樣品溶液在不同波長(zhǎng)下的色譜圖Fig.3 Chromatograms of 4 kinds of spiked sample solutions at different wavelength

2.2 進(jìn)樣體積的選擇和進(jìn)樣溶劑優(yōu)化

本試驗(yàn)使用的進(jìn)樣器的進(jìn)樣范圍為0.1～100 μL，為得到更低的檢出限值，又避免采用進(jìn)樣器極限值，最終選用較大體積即80 μL作為進(jìn)樣體積[25]。進(jìn)樣溶劑對(duì)目標(biāo)物的色譜峰形影響較大，且對(duì)毒黃素的色譜峰形的影響大于熱誠(chéng)菌素（見(jiàn)圖4）。當(dāng)溶劑為0.1%甲酸水和0.1%甲酸水-甲醇（95:5，V/V）時(shí)，兩種目標(biāo)物的峰形對(duì)稱且尖銳。當(dāng)甲醇含量≥10%時(shí)，毒黃素峰形開(kāi)始出現(xiàn)展寬，當(dāng)甲醇含量≥20%時(shí)，熱誠(chéng)菌素的峰形也開(kāi)始出現(xiàn)展寬，當(dāng)甲醇含量為30%時(shí)，毒黃素出現(xiàn)了肩峰。因此，選用0.1%甲酸水作進(jìn)樣溶劑，操作較簡(jiǎn)便。

2.3 提取溶劑的選擇

圖4 不同溶劑配制的毒黃素和熱誠(chéng)菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖Fig.4 Chromatograms of toxoflavin and fervenulin n standard solution prepared with different solvent

采用0.1%甲酸水時(shí)，較適合酵米面和銀耳罐頭中目標(biāo)物的提取，提取率大于85%；但干銀耳和鮮銀耳會(huì)吸水，提取溶液較粘稠，后期無(wú)法通過(guò)濾膜；而采用甲醇時(shí)，適合所有類型的樣品中目標(biāo)物的提取，提取率大于80%?？紤]本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑提取，后期需要濃縮后置換溶劑，使前處理過(guò)程變得復(fù)雜，最終選用0.1%甲酸水溶液提取酵米面和銀耳罐頭，甲醇溶液提取干銀耳和鮮銀耳。

表2 方法的檢出限、定量限、線性范圍、回歸方程和R2Table 2 LODs, LOQs, linear ranges, regression equations and R2 of this method

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限

以質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，平均峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，兩種目標(biāo)物在0.20～20.00 mg/L呈良好線性。酵米面中的毒黃素和熱誠(chéng)菌素的檢出限均為0.15 mg/kg，定量限為0.50 mg/kg；銀耳及其制品中的毒黃素和熱誠(chéng)菌素的檢出限均為0.30 mg/kg，定量限為1.00 mg/kg，具體結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 加標(biāo)回收率和精密度

回收率試驗(yàn)結(jié)果表明：四種樣品基質(zhì)中毒黃素的加標(biāo)回收率為79.77%～104.02%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.50%～8.91%；熱誠(chéng)菌素的加標(biāo)回收率為93.31%～104.36%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.96%～5.77%，具體結(jié)果見(jiàn)表3。

2.6 專屬性試驗(yàn)

生物毒素（黃曲霉毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲毒毒素A）在338 nm和398 nm波長(zhǎng)處無(wú)吸收，在色譜圖中無(wú)響應(yīng)，橙黃色色素（酸性橙1、酸性橙2、堿性橙2、堿性橙22、檸檬黃、日落黃）雖有響應(yīng)，但在目標(biāo)物出峰處均無(wú)干擾（見(jiàn)圖5），說(shuō)明該方法有一定的抗干擾能力，專屬性較好。

圖5 干擾試驗(yàn)的色譜圖Fig.5 Chromatogram of interference test

2.7 實(shí)際樣品分析

應(yīng)用建立的方法測(cè)定4個(gè)酵米面、6個(gè)干銀耳、2個(gè)銀耳罐頭，均未檢出毒黃素（＜檢出限）和熱誠(chéng)菌素（＜檢出限），測(cè)定10個(gè)鮮銀耳，2個(gè)鮮銀耳樣品檢出毒黃素，含量范圍為1.50～7.77 mg/kg；3個(gè)樣品鮮銀耳檢出熱誠(chéng)菌素，含量范圍為1.01～3.41 mg/kg。典型陽(yáng)性樣品色譜圖和光譜圖見(jiàn)圖6。

表3 回收率試驗(yàn)和精密度Table 3 Recovery and precision test (n=6)

圖6 典型陽(yáng)性樣品色譜圖和光譜圖Fig.6 Chromatograms and spectrograms of typical positive samples

2.8 與現(xiàn)有方法的對(duì)比

本方法與現(xiàn)在方法進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果見(jiàn)表4。張偉等[7]建立的超高效液相色譜-三重四極桿/復(fù)合線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS/Q-Trap）檢出限能達(dá)到0.004 μg/kg，但該設(shè)備較昂貴，對(duì)檢測(cè)人員要求也較高，一般實(shí)驗(yàn)室難以實(shí)現(xiàn)；劉倩妤等[22]建立的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法靈敏度也較高，方法檢出限可達(dá)到0.01 mg/L，但分析對(duì)象僅適用于飲用水，且只能檢測(cè)毒黃素；周鵬等[23]建立的高效液相色譜法（HPLC）雖然分析了三種目標(biāo)物，但采用低波長(zhǎng)檢測(cè)樣品時(shí)會(huì)導(dǎo)致基線較高，方法檢出限僅為3 mg/kg，且分析的新鮮銀耳樣品為已泡發(fā)的樣品，有一定的局限性；王朝霞等[24]建立高效液相色譜法（HPLC），雖同樣采用低波長(zhǎng)檢測(cè)，但前處理采用液液萃取方法，可以一定程度上凈化樣品，從而使方法靈敏度有了一定的提高，檢出限為0.8 mg/kg，但方法不適用于酵米面和銀耳及其制品的分析；本方法針對(duì)酵米面、鮮銀耳、干銀耳和銀耳罐頭樣品特性，采用不同的提取溶劑進(jìn)行提取，并克服溶劑效應(yīng)，采用大體積進(jìn)樣[25]，利用毒黃素和熱誠(chéng)菌素的高波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)，大大降低了雜質(zhì)的干擾，同時(shí)提高方法靈敏度，方法檢出限相對(duì)于周鵬等建立的方法降低了一個(gè)數(shù)量級(jí)，即0.15 mg/kg。本文采用梯度洗脫排除了等度洗脫會(huì)導(dǎo)致后出峰組分色譜峰展寬和雜質(zhì)富集色譜柱的影響，大體積進(jìn)樣和高波長(zhǎng)檢測(cè)有效地解決了復(fù)雜基質(zhì)的干擾，大大提高了方法的穩(wěn)定性和靈敏度。經(jīng)方法驗(yàn)證和實(shí)際樣品測(cè)定，本方法切實(shí)可行，效果令人滿意。

表4 與現(xiàn)有方法的對(duì)比Table 4 Comparison with existing methods

2.9 穩(wěn)定性比對(duì)

采用GBW(E)130417紫外分光光度計(jì)用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（重鉻酸鉀溶液）對(duì)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行透射比測(cè)定，每次三次平行測(cè)定的透射比允許誤差符合I級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，且連續(xù)5個(gè)月的透射比的RSD小于0.65%，說(shuō)明儀器的穩(wěn)定性較好[26]。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)圖7）表明：采用甲醇配制100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在冷凍條件下（-18 ℃），兩種目標(biāo)化合物5個(gè)月內(nèi)的吸光值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.90%和0.58%，說(shuō)明在此條件下，毒黃素和熱誠(chéng)菌素較穩(wěn)定；采用0.1%甲酸（V/V）和1%甲酸（V/V）配制10 mg/L的使用液，毒黃素的吸光值會(huì)隨著時(shí)間變長(zhǎng)而變小，5個(gè)月內(nèi)降解至26%以下，且采用1%甲酸（V/V）配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液降解速度快于0.1%甲酸（V/V），而熱誠(chéng)菌素在5個(gè)月內(nèi)吸光值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3.18%，說(shuō)明在此條件下，熱誠(chéng)菌素較穩(wěn)定。另外，同一濃度毒黃素和熱誠(chéng)菌素在高波長(zhǎng)下吸光值較低波長(zhǎng)的吸光值穩(wěn)定，說(shuō)明在高波長(zhǎng)下測(cè)定兩種目標(biāo)物偏差較??；采用0.1%氨水（V/V）配制10 mg/L的使用液顏色較采用0.1%甲酸（V/V）配制10 mg/L的使用液淺，其中毒黃素的吸光值不到后者的40%，熱誠(chéng)菌素的吸光值不到后者的20%，說(shuō)明在此條件下，毒黃素和熱誠(chéng)菌素極不穩(wěn)定，易發(fā)生降解。

根據(jù)毒黃素和熱誠(chéng)菌素在堿性條件下不穩(wěn)定的現(xiàn)象，我們采用0.1%、0.5%、1.0%、2.0%食用小蘇打（m/m）和0.1%、0.5%、1.0%、2.0%食用純堿（m/m）分別配制毒黃素和熱誠(chéng)菌素溶液進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)采用食用小蘇打溶液（m/m）配制的毒黃素變化不明顯，熱誠(chéng)菌素的吸光值（338 nm）變?yōu)?.1%甲酸（V/V）配制的熱誠(chéng)菌素溶液的85%左右，且隨著溶液濃度升高變化不顯著；采用食用純堿（m/m）配制的兩種目標(biāo)物溶液顏色迅速變淺，其中采用0.1%食用純堿（m/m）配制的毒黃素，吸光值（398 nm）為0.1%甲酸（V/V）配制的毒黃素溶液的18.28%，隨著食用純堿（m/m）的濃度增大，降解比例隨之降低，當(dāng)濃度為1%時(shí)，降解比例達(dá)到12.48%；而熱誠(chéng)菌素的降解更為明顯，當(dāng)采用0.1%食用純堿（m/m）配制的熱誠(chéng)菌素，吸光值（338 nm）為0.1%甲酸（V/V）配制的熱誠(chéng)菌素溶液的1.11%，且隨著食用純堿（m/m）濃度增加，變化不顯著（見(jiàn)圖8）。因此，我們?cè)谌粘Ｉ钪胁捎?%食用純堿（m/m）清洗或浸泡相關(guān)食品，可以大幅度降解毒黃素和熱誠(chéng)菌素，從而降低中毒的風(fēng)險(xiǎn)。

圖7 毒黃素和熱誠(chéng)菌素在不同溶液和不同儲(chǔ)存環(huán)境中的穩(wěn)定性Fig.7 Stability of toxoflavin and fervenulin in different solution and storage environment

圖8 毒黃素和熱誠(chéng)菌素在不同質(zhì)量濃度的食用小蘇打和純堿溶液中降解至原濃度的比例Fig.8 The ratio of toxoflavin and fervenlulin degraded to their original concentrations in different concentrations of edible baking soda and sodium carbonate

3 結(jié)論

本文以酵米面和銀耳及其制品為研究對(duì)象，采用C18色譜柱對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行分離，在其高波長(zhǎng)下進(jìn)行分析，建立測(cè)定毒黃素和熱誠(chéng)菌素的高效液相色譜法。采用該方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)保留時(shí)間和光譜圖定性，外標(biāo)法定量，檢測(cè)出部分鮮銀耳中含有目標(biāo)物。該方法與現(xiàn)有的方法比較，前處理簡(jiǎn)單易行，干擾較小，準(zhǔn)確度和靈敏度較高，可適用于酵米面、銀耳及其制品中毒黃素和熱誠(chéng)菌素的定性定量分析，可為食品安全監(jiān)管和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)控提供技術(shù)支撐。目標(biāo)物的穩(wěn)定性研究表明，毒黃素和熱誠(chéng)菌素在堿性條件下易發(fā)生降解，日常生活中，采用1%食用純堿（m/m）清洗或浸泡相關(guān)食品，可能會(huì)降低毒黃素和熱誠(chéng)菌素中毒的風(fēng)險(xiǎn)。毒黃素在酸性條件下會(huì)隨著時(shí)間變長(zhǎng)慢慢降解，熱誠(chéng)菌素在酸性條件下穩(wěn)定性較好。穩(wěn)定性對(duì)比結(jié)果可為后期的解毒（如果降解產(chǎn)物毒性小）或避毒（如果降解產(chǎn)物毒性大）提供了有力的參考。