■王金榮

（河南工業(yè)大學生物工程學院，河南鄭州 450001）

近年來，隨著科技的進步，飼料中單組分分析檢測技術(shù)已經(jīng)非常成熟，檢測限和定量限均能滿足飼料安全監(jiān)督的要求。但是在實際飼料安全檢測中，飼料基質(zhì)復(fù)雜，污染物種類繁多，一方面同類物質(zhì)之間在檢測時可能存在相互干擾，另一方面對每種單一物質(zhì)的檢測與排除也增加了檢測的工作量。傳統(tǒng)的化學分析方法很難一次性精確定量檢測出多種組分，因此多組分同步分析技術(shù)逐漸成為飼料安全檢測的重要技術(shù)支撐。樣品的預(yù)處理是實現(xiàn)飼料多組分同步分析的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，目前也是整個分析過程的瓶頸，其結(jié)果的精準性直接決定分析結(jié)果的準確性。常規(guī)的樣品預(yù)處理包括被分析物的提取、凈化和濃縮等步驟，有些樣品預(yù)處理過程中還需要同時進行衍生化處理。傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理過程通常是分步進行的，過程冗長，甚至需要消耗大量的化學試劑等，不符合現(xiàn)代飼料安全快速、高通量檢測分析的要求。因此，研究與建立新型的簡單、便捷、快速的飼料樣品預(yù)處理技術(shù)變得尤為重要。QuEChERS 是近年來發(fā)展迅速的一種多組分分析凈化方法，其結(jié)合了液液萃取和分散固相萃取凈化，為氣相色譜、液相色譜分析及質(zhì)譜確證分析提供了干凈的樣品，非常適合對復(fù)雜基質(zhì)的樣品進行分析。由于該方法在最初提出的時候被認為特別適用于提取極性和堿性化合物，因此，基于QuEChERS 開發(fā)的大多數(shù)方法主要涉及從各種基質(zhì)中提取農(nóng)藥和污染物，特別是對水果、蔬菜和其他食品中農(nóng)殘及污染物分析中應(yīng)用較為廣泛。文章主要圍繞QuEChERS技術(shù)進展及其在飼料中霉菌毒素、禁限用藥物等飼料安全檢測方面的應(yīng)用進行綜述，并對QuEChERS在飼料安全檢測中的應(yīng)用進行展望。

1 QuEChERS方法簡介

QuEChERS 是快速（Quick）、簡便（Easy）、廉價（Cheap）、高效（Effective）、穩(wěn)定（Rugged）和安全（Safe）的簡稱，作為多殘留分析方法首次于2002 年在羅馬召開的歐洲農(nóng)藥殘留研討會上，由Anastassiades等[1]提出，并于2003 年公開發(fā)表詳細的操作方法[2]，2005 年Lehotay等[3]采用該方法測定了蔬菜和水果中的229種農(nóng)藥，驗證了該方法的可行性。QuEChERS 方法的基本原理是分散固相萃取，采用乙腈對樣品進行提取，經(jīng)氯化鈉、無水硫酸鎂等進行鹽析分層后采用吸附劑對提取液進行凈化，去除雜質(zhì)，凈化后的樣品再由色譜或質(zhì)譜儀器進行定量分析，并形成了最初的3種標準方法（見表1）。

表1 基于QuEChERS方法分析的主要步驟

該方法的使用不僅減少了實驗室玻璃器皿等耗材的使用，同時也減少了樣品和有機溶劑的使用，減少了環(huán)境污染。大多數(shù)被測物質(zhì)（尤其是殺蟲劑）應(yīng)用QuEChERS方法處理都能獲得滿意的回收率，對于提取效率低的（如極性大的、酸或堿性）分析物相對比較麻煩，通常需要對QuEChERS 方法進行改進[6]。QuEChERS 方法最初僅僅用于對含水量高或低脂肪含量的樣品檢測的預(yù)處理（如水分含量高的水果、蔬菜和果汁等），而其他類型的食品樣品（如中、高脂肪含量和色素含量高或者葉綠素含量高的食品樣品），則需要進一步地處理。而對于含水量低于80%的樣品，通過加水使樣品總質(zhì)量達到10 g，可以減少分析物與基質(zhì)間的相互作用，從而提高分析物的凈化效率。此外，干燥食品、飼料和一些復(fù)雜基質(zhì)的樣品，通常共同提取物比較多，應(yīng)用QuEChERS方法預(yù)處理相對較為困難。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，檢測樣品的種類及性質(zhì)也不斷發(fā)生變化，上述3種方法不能完全滿足實際分析的要求，因此國內(nèi)外研究學者對QuEChERS 前處理方法進行了改進，針對分析目標物的不同，優(yōu)化有效的提取溶劑、鹽析的質(zhì)量和比例、樣品質(zhì)量以及樣品/溶劑值、pH等條件，根據(jù)復(fù)雜基質(zhì)分析的要求選擇適宜的吸附劑類型，實現(xiàn)樣品的高效提取與凈化分離。

根據(jù)PubMed 統(tǒng)計，QuEChERS 方法自2002 年提出發(fā)展至2021 年12 月，采用QuEChERS 作為樣品預(yù)處理方法已發(fā)表2 196 篇論文，測定蔬菜、食品、飼料等樣品中農(nóng)藥殘留、霉菌毒素、抗氧化劑等分析的樣品凈化方法。一些研究報告對QuEChERS 方案進行了不同的改進或修改，以確保更加有效地提取被測目標物，并最大程度地減少不穩(wěn)定分析物的降解，提高分析效率。綜合文獻分析，采用QuEChERS進行預(yù)處理方法與傳統(tǒng)的萃取技術(shù)相比具有很多優(yōu)勢，測定所需要的樣品質(zhì)量和溶劑使用量均減少，同時樣品預(yù)處理的時間更短。此外，大多數(shù)已發(fā)表的研究成果表明，QuEChERS 方案提供了比傳統(tǒng)程序更高的回收率和更好的分析性能。

2 QuEChERS方法與其他預(yù)處理方法比較

QuEChERS 方法的應(yīng)用范圍十分廣泛，傳統(tǒng)的樣品前處理方法[如液-液萃取、液固萃?。òㄋ魇咸崛。┓椒╙需要使用大量的有機溶劑，不僅對操作人員有潛在的健康影響，同時廢液的處理困難，還可能造成環(huán)境污染；此外這兩種方法操作步驟較為繁瑣，耗時長，選擇專屬性差，無法滿足復(fù)雜樣品或痕量物質(zhì)分析要求。近些年發(fā)展起來的樣品預(yù)處理方法包括固相萃?。⊿PE）、液-液萃取（LLE）、加速溶劑萃取（ASE）、超聲輔助萃?。║AE）和微波輔助提取萃?。∕AE）等技術(shù)逐漸取代了傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理方法，在分析效率上有了明顯的提高。QuEChERS 方法與這些取代方法相比，減少了一些特殊設(shè)備的使用（如微波、超聲波設(shè)備等），但是對于不同的分析物分析效果還是有顯著的差別。Di等[7]分析土壤中的有機氯殺蟲劑類化合物，與UAE 和ASE 方法相比，MAE 和QuEChERS 方法獲得的結(jié)果偏高，但對于除草劑2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）的提取效率卻僅為57%。Orellana-Silla等[8]用MAE方法提取果汁中的氯苯脲，其凈化效果優(yōu)于QuEChERS 和C18 的固相萃取方法。但是QuEChERS 方法提取中草藥植物根和莖中的農(nóng)藥殘留比SPE 和LLE 方法效果好[9]。同樣，在蜂蜜中農(nóng)藥殘留的檢測也是QuEChERS 方法效果優(yōu)于SPE 和LLE方法[10]。Dong等[11]比較了SPE和QuEChERS方法對蔬菜和水果中真菌毒素凈化分析效率，發(fā)現(xiàn)SPE在真菌毒素的測定中表現(xiàn)出更高的選擇性、準確度和精密度。與ASE方法相比，QuEChERS 方法提取芹菜和萵苣中卡馬西平、對乙酰氨基酚等11 種目標藥物更有效，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定11種藥物的回收率為70.1%～118.6%，相對標準偏差（RSD）均低于20%，并且減少了樣品制備的時間和成本，使用的有機溶劑更少[12]。Panasiuk 等[13]采用固液萃取（OASIS HLB 柱或免疫親和柱）、QuEChERS 和Mycosep 225 Trich 柱的樣品預(yù)處理，同時測定飼料中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（3Ac-DON）、15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15Ac-DON）、DON-3-葡萄糖苷（DON-3Glc）雪腐鐮刀菌烯醇和鐮刀菌烯酮-X，并使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行檢測，發(fā)現(xiàn)6種免疫親和柱對所有霉菌毒素測定均沒有交叉反應(yīng)，但是免疫親和柱如果與3Ac-DON 結(jié)合，則不能與15Ac-DON結(jié)合；其中Mycosep 225 Trich凈化效果最好，能夠凈化所有上述6種毒素完全分離，包括3Ac-DON 和15Ac-DON 異構(gòu)體形式，回收率為92%～97%，定量限（LOQ）為1.30～50.00 g/kg。

3 QuEChERS在飼料安全多組分分析檢測中的應(yīng)用

3.1 飼料中霉菌毒素的檢測

霉菌毒素是由真菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，具有致畸、致癌、致突變特性。霉菌毒素的污染對糧食生產(chǎn)、飼料生產(chǎn)及養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失，此外霉菌毒素在動物性食品中的殘留還可通過食物鏈對人類健康構(gòu)成潛在危害。因此，對飼料中霉菌毒素的準確檢測是飼料安全的重要技術(shù)保障。黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等某些菌株產(chǎn)生的雙呋喃環(huán)類毒素，其衍生物約有20 種，其中以B1 的毒性最大，致癌性最強，也是飼料及食品安全衛(wèi)生中必檢的指標之一。Choochuay 等[14]建立了碎米、花生、玉米和魚粉4 種飼料中的黃曲霉毒素B1（AFB1）的方法，樣品預(yù)處理基于QuEChERS 方法進行，用乙腈/甲醇（40/60，V/V）提取AFB1，用氯化鈉和硫酸鎂進行層析凈化，采用柱前衍生化和熒光檢測的高效液相色譜法進行檢測，回收率為82.50%～109.85%，在20～100 ng/g范圍內(nèi)AFB1 的相對標準偏差低于11%，檢測限（LOD）為0.2～1.2 ng/g，LOQ 為0.3～1.5 ng/g。用這種方法對120份飼料樣品進行檢測，AFB1 污染程度：碎米0.44～2.33 ng/g、花生3.97～106.26 ng/g、玉米0.88～50.29 ng/g和魚粉1.06～10.35 ng/g。玉米赤霉烯酮（ZEA）是具有雌激素樣作用的霉菌毒素，主要污染玉米、小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物，能造成動物急性、慢性中毒，引起動物繁殖機能異常甚至死亡。Llorent-Martínez等[15]利用QuEChERS程序提取飼料原料中的玉米赤霉烯酮，回收率為93%～107%，用LC-MS進行定量分析，定量限滿足歐洲共同體委員會規(guī)定的最大殘留水平。藤毒素是由鏈格孢霉產(chǎn)生的一種霉菌毒素，廣泛污染谷物和飼料。王瑞國等[16]應(yīng)用QuEChERS-超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-MS/MS）分析飼料中的騰毒素，以0.1%甲酸乙腈提取，用C18和PSA 做吸附劑進行凈化后檢測，騰毒素在1～500 μg/kg 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.997 6～0.999 2，在飼料中添加濃度為5、25、125 μg/kg 時回收率為89.1%～105.7%，定量限為2.0 μg/kg。

由于飼料中霉菌種類很多，產(chǎn)毒霉菌在外環(huán)境滿足霉菌生長需求時則繼續(xù)產(chǎn)生毒素，并且會存在多種霉菌毒素的積累疊加，飼料中具有多種霉菌毒素同時存在的風險。Jo 等[17]使用QuEChERS 結(jié)合LC-MS/MS方法測定了飼料中13 種霉菌毒素，并對方法的檢出限、定量限、線性和回收率進行了分析方法驗證，同時考慮了基質(zhì)效應(yīng)，均達到了可接受的驗證水平范圍。用該方法測定的39個飼料樣品中，9個樣品主要由伏馬菌素B1（FB1）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬菌素B2和玉米赤霉烯酮污染，其中FB1 的檢測濃度最高為18.094 3 mg/kg。崔曉娜等[18]建立了飼料中17種霉菌毒素同時檢測的方法，包括黃曲霉毒素（B1、B2、G1、G2）、赭曲霉毒素A、T-2毒素、HT-2毒素、橘青霉素、蛇形菌素、疣孢青霉原、新茄鐮孢菌醇、O-甲基雜色曲霉素、雜色曲霉素、青霉酸、環(huán)匹阿尼酸、伏馬菌素（B1、B2），采用QuEChERS 方法凈化后用高效液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜（HPLC-Q-TOF/MS）檢測，外標法定量，在1.0～200.0 μg/L范圍內(nèi)呈線性，相關(guān)系數(shù)均大于0.990，檢出限在0.5～3.0 μg/kg，定量限在1.0～10.0 μg/kg。同樣，劉玲利[19]也利用改進的QuEChERS方法對飼料及其原料樣品進行預(yù)處理，測定了19 種霉菌毒素，以0.3%甲酸的乙腈溶液為提取劑提取30 min，以0.5 g氯化鈉和1.5 g無水硫酸鎂為鹽析劑，吸附劑由150 mg C18、20 mg 伯仲胺（primary secondary amine，PSA）和150 mg 無水硫酸鎂組成。通過對色譜條件、質(zhì)譜條件和前處理條件的優(yōu)化，建立同時測定19種霉菌毒素的HPLC-MS/MS法。19種霉菌毒素的相關(guān)系數(shù)為0.992 1～0.999 6，線性范圍為0.05～200.00 μg/L。飼料樣品中19種霉菌毒素的方法檢出限和定量限分別為0.12～3.85 μg/kg和0.40～10.80 μg/kg，加標回收率為80.6%～94.0%，相對標準偏差為7.15%～13.70%。原料樣品中19種霉菌毒素的方法檢出限和定量限分別為0.10～3.40 μg/kg 和0.25～10.00 μg/kg，加標回收率為83.6%～95.4%，相對標準偏差為6.20%～12.60%，所建立的方法線性良好、檢出限低、準確度高、精密度好。由于飼料基質(zhì)成分復(fù)雜，一些被測物質(zhì)在樣品提取后通常需要凈化后才能進行儀器分析，否則提取液中復(fù)雜的成分不僅干擾測定結(jié)果，同時還可能會對分析柱或分析設(shè)備造成損壞，因此提高飼料樣品的凈化程度是提高分析效率的有效方法。優(yōu)化QuEChERS 提取程序可以降低飼料基質(zhì)影響，González-Jartín 等[20]通過優(yōu)化QuEChERS 程序并結(jié)合超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS）對飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 等22 種霉菌毒素進行定性、定量分析，方法的回收率67%～94%，定量限0.22～32.64 μg/kg。用這種方法檢測7 種原料和8 種飼料產(chǎn)品的回收率符合現(xiàn)行標準的要求。同時分析了附近飼料廠的75 個樣品，發(fā)現(xiàn)玉米和基于玉米的飼料產(chǎn)品中霉菌毒素發(fā)生率最高，但均低于標準限量。恩尼克菌素（ENNs）和白僵菌素（BEA）是鐮刀菌屬產(chǎn)生的次生毒性代謝物，近年來在谷物和副產(chǎn)品中被廣泛發(fā)現(xiàn)，對飼料安全構(gòu)成了重大風險。采用乙腈萃取、QuEChERS 樣品處理后用LC-MS/MS 對39份飼料原料和其生產(chǎn)的48份飼料進行檢測，發(fā)現(xiàn)飼料原料和配合飼料的檢出率分別為18%和92%[21]。Facorro等[22]采用分散萃取和QuEChERS 萃取方法對20 個奶牛場飼料中的26 種霉菌毒素進行提取分離，采用高分辨質(zhì)譜進行確證分析，大多數(shù)毒素的回收率都大于80%，檢出限達到ng/mL 水平，其中玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1和β-玉米赤霉烯醇的檢出率為60%～90%。范志辰等[23]采用QuEChERS 前處理技術(shù)，建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UHPLC-MS/MS）檢測飼料樣品中30 種不同的真菌毒素含量的分析方法。飼料樣品用水和含1%（V/V）甲酸的乙腈溶液等比例混合后提取，上清液氮吹至近干，殘渣經(jīng)5 mmol/L乙酸銨水溶液-乙腈（80∶20，V/V）復(fù)溶后上機測定，30 種真菌毒素的平均加標回收率為72.0%～118.4%（n=5），在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.99，檢出限和定量限分別為0.7～20.0 μg/L 和2～50 μg/L。Amelin等[24]采用氣-液色譜法電子捕獲檢測器同時測定谷物和飼料中單端孢霉烯類毒素T2、HT-2、脫氧纈氨醇和雪腐鐮刀菌烯醇，用乙腈提取樣品中的毒素，與三氟乙酸酐衍生后用QuEChERS方法凈化和濃縮，4種毒素的回收率均大于90%，分析時間0.5～1.0 h，相對標準偏差RSD＜5%。

綜上，飼料中的霉菌毒素采用QuEChERS方法或改進后的QuEChERS方法進行樣品預(yù)處理，均能提高霉菌毒素的分析性能，縮短檢測時間，同時所用的提取溶劑少，并能夠?qū)崿F(xiàn)多種霉菌毒素的同步分析。

3.2 飼料中藥物的檢測

飼料中藥物的使用是一定歷史時期的產(chǎn)物，我國從2020 年1 月1 日起，在飼料中全面禁止添加抗生素，減少濫用抗生素造成的危害，以維護動物源性食品安全和公共衛(wèi)生安全。一些激素類的違禁藥物、用于治療或促生長的抗生素類藥物等的違規(guī)使用，可能會導致飼料及食品安全事件發(fā)生，因此對飼料中藥物的監(jiān)測顯得更為重要?；赒uEChERS 及其改良的預(yù)處理技術(shù)對藥物進行凈化與濃縮，是近年來飼料中藥物準確及快速檢測的重要保證。羅輝泰等[25]用改進的QuEChERS 對飼料中17 種β-受體激動劑、18 種β-內(nèi)酰胺類、6種抗球蟲類、5種大環(huán)內(nèi)酯類、2種林可胺類、15 種喹諾酮類、21 種磺胺類及3 種磺胺類增效劑等8類共計87種獸藥進行測定，樣品經(jīng)Na2EDTA溶液分散后，以甲醇-乙腈（50∶50）超聲提取，提取液用Bondesil—PSA 吸附劑以分散固相萃取方式快速凈化，超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進行定性篩查和定量分析，87 種藥物在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，加標回收率為63.7%～108.8%，檢出限和定量限分別為3～15 μg/kg 及10～50 μg/kg[25]。磺胺類藥物因其廣譜抗菌、高效、低毒及價格低廉，在動物養(yǎng)殖中廣泛應(yīng)用，曾經(jīng)一個重要的給藥途徑是通過添加到飼料中使用。徐堅等[26]用乙腈提取飼料樣品中5 種磺胺類藥物，采用QuEChERS 進行預(yù)處理后用高效液相色譜進行檢測，在10～500 μg/L 范圍內(nèi)，5 種磺胺類藥物線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999 0，檢出限和定量限分別為0.05 mg/kg 和0.1 mg/kg，在0.1～10.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，豬、雞配合飼料中磺胺類藥物平均回收率為76.0%～101.0%[26]。劉新輝等[27]基于QuEChERS 方法對飼料樣品進行凈化，采用Cleanertlipo No 和Cleanert PSA 進行凈化，比固相萃取凈化基質(zhì)效果好，并實現(xiàn)了飼料中20種β-受體激動劑類和3種喹噁啉類藥物的同時檢測，超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜定量，在1～50 ng/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2＞0.99），β-受體激動劑類定量限為5 μg/kg、喹噁啉類定量限為50 μg/kg，添加回收率在88.2%～105.0%范圍內(nèi)，相對標準偏差均小于8.4%。表2是近10年來采用QuEChERS方法進行樣品預(yù)處理并結(jié)合質(zhì)譜對飼料中的藥物進行檢測的文獻[28-34]。由表2可知，QuEChERS方法或改進的QuEChERS 方法對飼料中的藥物分析均具有良好的凈化效果，并且能夠?qū)Χ喾N藥物實現(xiàn)同步分析，提高了分析方法性能，大部分文獻的回收率均達到建立分析方法的標準，檢出限和定量限也能滿足現(xiàn)行分析方法的要求。

表2 飼料中藥物檢測

3.3 其他應(yīng)用

QuEChERS 凈化技術(shù)不僅僅用在飼料中霉菌毒素、抗生素、違禁藥物等的檢測，也可以用于飼料中抗氧化劑、著色劑、植物精油、農(nóng)藥殘留等成分檢測的樣品預(yù)處理。乙氧基喹啉屬于喹諾酮類藥物，曾經(jīng)在飼料中用作抗氧化添加劑和殺菌劑，歐盟（EU）2017/962規(guī)定禁止其作為所有動物物種和類別的飼料添加劑使用。使用改進的QuEChERS 方法從動物飼料中提取乙氧基喹啉，并加入抗壞血酸緩沖液防止降解，用氣相色譜聯(lián)用三重四極桿質(zhì)譜(GC-QQQ)進行檢測，回收率為70%～120%（RSD＜20%）。采用QuEChERS方法在2018 年和2019 年期間，對來自西班牙加泰羅尼亞（Catalonian）地區(qū)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生產(chǎn)的70 份飼料樣品進行了分析，43%的樣品檢出乙氧基喹啉[35]。同樣，用乙腈提取飼料樣品中的8 種抗氧化劑，采用改進優(yōu)化的QuEChERS 預(yù)處理方法結(jié)合UPLC-MS/MS進行檢測，檢出限為0.005～0.100 mg/kg，定量限0.01～0.20 mg/kg，在低、中、高3 個不同濃度梯度的平均加標回收率為76.2%～102.8%[36]。

飼料中使用著色劑可以增加畜禽（蛋禽、肉禽）和水產(chǎn)養(yǎng)殖動物產(chǎn)品色澤，如使牛奶中黃油、禽蛋的蛋黃等具有更鮮艷美觀的色澤，水產(chǎn)養(yǎng)殖動物諸如魚類和甲殼類、對蝦等產(chǎn)品肉質(zhì)比天然產(chǎn)品更鮮艷，提高了商品的價值。在飼料中添加適量的著色劑，可以實現(xiàn)對畜禽產(chǎn)品（特別是禽類蛋黃及皮膚）色澤的精準調(diào)控。為滿足飼料樣品中脂溶性著色劑監(jiān)控的需要，對飼料中著色劑的定性定量分析顯得尤為重要。付巖等[37]用基于QuEChERS 的分散固相萃取方法對蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ、對位紅、蘇丹紅7B、蘇丹紅G 和蘇丹黃進行提取及樣品凈化，結(jié)合LC-MS/MS 方法檢測，8 種脂溶性著色劑在1.0～200.0 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.998。所建立的方法對飼料的檢出限為5.0 μg/kg，定量限為10 μg/kg，在10、50 μg/kg 和500 μg/kg 加標濃度下8種脂溶性著色劑的回收率為102%～111%。

牛至香酚的主要成分為香芹酚和百里香酚，香芹酚和百里香酚屬于同分異構(gòu)體，香芹酚中的-OH基團在甲基鄰位，而百里香酚的-OH 在甲基的間位，兩者的化學性質(zhì)相似。采用QuEChERS 結(jié)合高效液相色譜法測定飼料中牛至香酚中的主成分含量，不同樣品中的加標回收率為香芹酚92.4%～101.5%，百里香酚92.9%～98.7%；精密度（n=6）為香芹酚1.4%～4.8%，百里香酚為1.7%～4.5%；兩種物質(zhì)檢出限均為0.1 mg/kg，定量限均為0.3 mg/kg[38]。

近年來QuEChERS 方案在飼料中農(nóng)藥殘留檢測方面也取得一定的進展，如飼料中的有機磷農(nóng)藥[39]、除草劑[40]、殺蟲劑[41]、敵敵畏[42]等采用QuEChERS 預(yù)處理方法，結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進行快速篩查確證及定量分析，不僅提高了飼料中農(nóng)藥殘留快速篩查的可靠性，同時可以獲得較高靈敏度的定量結(jié)果，為飼料安全監(jiān)測的快速高通量篩查提供準確、可靠的方法。

4 建議和未來展望

飼料安全的分析趨勢不僅在于開發(fā)快速的檢測方法，同時對于樣品快速凈化的預(yù)處理技術(shù)非常重要，能夠在一次凈化過程后分析盡可能多的污染物及其化學組成是理想的分析模式。QuEChERS 方法應(yīng)用于飼料分析中的樣品預(yù)處理，不僅擴大了被測物質(zhì)的分析范圍，同時對于復(fù)雜基質(zhì)的凈化能力也得到了提高。QuEChERS 萃取法結(jié)合HPLC-MS/MS 或GCMS/MS 分析可以同時確證和定量分析復(fù)雜基質(zhì)中多類別、多殘留分析物的方法。Teledyne Tekmar[43]提出了QuEChERS提取程序的全自動化方法，系統(tǒng)自動執(zhí)行以下樣品制備功能，如液體分配/移液、旋渦混合、小瓶搖動、打開/關(guān)閉樣品小瓶、添加固體試劑（鹽、緩沖液）、識別液位、傾析、離心、基質(zhì)加標和d-SPE 凈化。因此，未來QuEChERS方法在飼料分析自動化研發(fā)，可用于實驗室大量樣品的快速分析，實現(xiàn)樣品的振蕩、提取及凈化任務(wù)的自動化程序。凈化程序的自動化有助于節(jié)約成本，同時提高分析效率、高通量和再現(xiàn)性。

5 小結(jié)

由于QuEChERS應(yīng)用的靈活性和快速特點，該方法已經(jīng)成為樣品分析預(yù)處理通用的一種方法，根據(jù)被分析物及樣品基質(zhì)的不同，可以對不同溶劑、鹽、緩沖液和吸附劑等的具體參數(shù)進行優(yōu)化，從而使QuECh-ERS方法能夠廣泛用于食品、飼料等復(fù)雜基質(zhì)樣品分析。基于QuEChERS方法的整體分析具有成本效益，因此應(yīng)用范圍還在不斷地擴大。由于GC-MS/MS、LC-MS/MS、UHPLC-MS/MS、TOF-MS/MS 等檢測系統(tǒng)無需進行大量樣品制備，QuEChERS 程序可提供足夠干凈的提取物，因此二者結(jié)合應(yīng)用可以實現(xiàn)多種農(nóng)藥、違禁藥物以及抗氧化劑、精油、著色劑等多組分的同步分析。