陳艷楠，邱智軍，劉學(xué)強(qiáng)，任國(guó)艷，李文潔，張夢(mèng)圓，趙淵，張彬*

1(河南科技大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，河南 洛陽(yáng)，471000)2(河北科技大學(xué) 食品與生物學(xué)院，河北 石家莊，050000) 3(河南科技大學(xué) 農(nóng)學(xué)院/牡丹學(xué)院，河南 洛陽(yáng)，471000)

貽貝(Mytilussp.)是一種營(yíng)足絲附著生活的雙殼類(lèi)軟體動(dòng)物，屬軟體動(dòng)物門(mén)(Mollusca)，瓣鰓綱(Lanellibranchia)，異柱目(Anisomyaria)，貽貝科(Mytidea)[1]。作為貽貝養(yǎng)殖大國(guó)之一，我國(guó)2019年的貽貝養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)87.07萬(wàn)t，占全球產(chǎn)量的42.09%，其中紫貽貝(Mytilusedulis)、厚殼貽貝(Mytiluscoruscus)、加州貽貝(Mytiluscalifornianus)等是我國(guó)常見(jiàn)的貽貝養(yǎng)殖品種[2]。貽貝本身具有很高的食用價(jià)值，其富含蛋白質(zhì)、多聚不飽和脂肪酸、礦物質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及人體所需的8種必需氨基酸，素有“海中雞蛋”的美稱(chēng)[3]。然而，目前除少量作為凍品、罐頭和干品外，我國(guó)大部分貽貝產(chǎn)品仍作為活鮮品銷(xiāo)售，產(chǎn)品單一，資源利用不足[4]。

近年來(lái)，對(duì)于貽貝來(lái)源的生物活性肽的研究越來(lái)越受到關(guān)注。目前已從貽貝蛋白制備獲得了抗氧化肽[5]、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽[4]、抗血栓肽[6]、抗骨質(zhì)疏松肽[7]、抗菌肽[8]、免疫調(diào)節(jié)肽[3]等。然而，從貽貝制備生物活性肽的過(guò)程通常依賴(lài)于天然蛋白的酶促水解結(jié)合多肽混合物的分離和鑒定，整個(gè)過(guò)程費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、技術(shù)難度較大[9]。相比之下，計(jì)算機(jī)輔助酶解和多肽活性的生物信息學(xué)篩選能克服傳統(tǒng)方法中的缺陷，并已逐步應(yīng)用于指導(dǎo)生物活性多肽的制備和鑒定[10-11]。

基于此，本研究以我國(guó)常見(jiàn)的紫貽貝蛋白作為研究對(duì)象，使用計(jì)算機(jī)模擬蛋白消化過(guò)程并對(duì)消化物中的多肽活性進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，以期為紫貽貝蛋白生物活性的闡釋及活性肽的研發(fā)提供重要理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 紫貽貝蛋白的選擇

從美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索紫貽貝相關(guān)蛋白，選擇其中4種主要蛋白質(zhì)：前膠原蛋白P(Precollagen P，GenBank：AAB80 719.1)、前膠原蛋白D(Precollagen D，GenBank：AAB96 638.1)、肌球蛋白(Myosin heavy chain, partial，GenBank：AAA82 260.1)和肌動(dòng)蛋白(Actin, partial，GenBank：AAD48 064.1)作為目標(biāo)蛋白進(jìn)行模擬消化。

1.2 模擬消化

通過(guò)BIOPEP-UWM數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇胃蛋白酶和胰蛋白酶的組合對(duì)以上4種目標(biāo)蛋白進(jìn)行計(jì)算機(jī)模擬消化，對(duì)消化后的多肽序列進(jìn)行后續(xù)分析，使用的胰蛋白酶(EC 3.4.21.4)和胃蛋白酶(pH 1.3，EC 3.4.23.1)的性質(zhì)如表1所示[12]。

表1 所使用的蛋白酶的性質(zhì)Table 1 Properties of proteases

1.3 消化產(chǎn)物中生物活性肽的篩選

使用PeptideRanker程序(https://bioware.ucd.ie/compass/biowareweb/Serverpages/peptideranker.php)對(duì)以上收集的多肽中的寡肽(二肽至五肽)進(jìn)行生物活性預(yù)測(cè)，并以預(yù)測(cè)得分的形式表示其生物活性的相對(duì)大小[13]。以0.5作為活性預(yù)測(cè)的閾值，當(dāng)多肽預(yù)測(cè)得分大于該值時(shí)，認(rèn)為其具有潛在生物活性。

1.4 消化產(chǎn)物的理化性質(zhì)評(píng)價(jià)

通過(guò)Peptide Property Calculator(http://www.innovagen.com/proteomics-tools)，計(jì)算模擬消化后所得寡肽的分子質(zhì)量、等電點(diǎn)、pH 7時(shí)的凈電荷和水溶性。以水溶性強(qiáng)弱為依據(jù)，選擇用于后續(xù)研究的肽。

1.5 消化產(chǎn)物的毒性分析

使用ToxinPred程序(http://crdd.osdd.net/raghava//toxinpred/)預(yù)測(cè)所得寡肽的潛在毒性[14]。

1.6 消化產(chǎn)物的ADMET評(píng)價(jià)

ADMET(absorption, distribution, metabolism, excretion, and toxicity；吸收、分配、代謝、排泄和毒性)評(píng)價(jià)是藥物設(shè)計(jì)和篩選中的重要方法，它對(duì)識(shí)別具有強(qiáng)藥代動(dòng)力學(xué)譜的新型化合物至關(guān)重要[15]。本研究使用admetSAR(http://lmmd.ecust.edu.cn/admetsar2/)程序?qū)λx寡肽進(jìn)行在線(xiàn)評(píng)價(jià)，其中選擇人體腸道吸收(human intestinal absorption, HIA)來(lái)確定吸收特性，選擇血腦屏障(blood brain barrier, BBB)穿透率和細(xì)胞色素P450(CYP 450)2D6相互作用來(lái)分析其分布特征[16]。

1.7 消化產(chǎn)物的活性預(yù)測(cè)

使用BIOPEP-UWM(http://www.uwm.edu.pl/biochemia/index.php/pl/biopep)程序，預(yù)測(cè)消化后所產(chǎn)生寡肽的潛在生物活性。

1.8 ACE抑制肽的篩選

使用SwissDock(http://www.swissdock.ch/)，將所選寡肽與ACE進(jìn)行在線(xiàn)分子對(duì)接以比較這些寡肽的ACE抑制活性大小[17]。ACE蛋白的晶體結(jié)構(gòu)(人血管緊張素轉(zhuǎn)換酶與賴(lài)諾普利的復(fù)合物，1O86.pdb)得自RCSB蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)。使用Chemdraw軟件(19.0版)繪制多肽結(jié)構(gòu)，并作為sybyl MOL2格式保存。通過(guò)比較寡肽與ACE蛋白對(duì)接的結(jié)合能大小，選擇潛在的ACE抑制劑。

1.9 二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV, DPP-IV)抑制肽的篩選

使用iDPPIV-SCM程序(http://camt.pythonanywhere.com/iDPPIV-SCM)預(yù)測(cè)DPP-IV抑制活性并對(duì)以上所選寡肽的相對(duì)DPP-IV抑制活性打分，其中當(dāng)寡肽得分大于294時(shí)，認(rèn)為該寡肽是潛在的DPP-IV抑制劑[18]。

1.10 分子對(duì)接

使用Discovery Studio(DS)2016軟件進(jìn)行分子對(duì)接研究。從RCSB蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)獲取ACE(PDB：1O86)和DPP-IV(PDB：5 J3 J)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)，并且在對(duì)接前除去晶體結(jié)構(gòu)中的水分子并進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化。使用Chemdraw軟件(19.0版)繪制多肽結(jié)構(gòu)，以結(jié)合能最低的對(duì)接構(gòu)象顯示對(duì)接結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 In silico水解

本研究通過(guò)BIOPEP-UWM程序，使用胃蛋白酶(pH 1.3，EC 3.4.23.1)和胰蛋白酶(EC 3.4.21.4)的組合對(duì)4種紫貽貝蛋白進(jìn)行模擬消化。經(jīng)消化后，4種蛋白均能夠被較好地水解，其中肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白水解度相對(duì)較高，分別達(dá)到30.85%和22.11%，而前膠原蛋白P、前膠原蛋白D水解度相對(duì)較低，均在10%左右。通過(guò)水解，前膠原蛋白P、前膠原蛋白D、肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白分別釋放出87、97、64、43條片段(包括氨基酸)，其中二肽至五肽總計(jì)分別為30、45、27、25條，占所釋放的總多肽數(shù)的34.48%、46.39%、42.19%、58.14%(圖1)，表明經(jīng)消化后，紫貽貝蛋白釋放出大量短肽，因此對(duì)于提供生物活性肽具有良好潛力。

圖1 紫貽貝蛋白模擬水解所釋放的肽段數(shù)和水解度Fig.1 Number of fragments released from M.edulis proteins after in silico digestion and the degree of hydrolysis

2.2 消化產(chǎn)物中寡肽的生物活性評(píng)價(jià)及理化性質(zhì)分析

通過(guò)PeptideRanker程序?qū)οa(chǎn)生的小分子寡肽打分。除去重復(fù)序列后，得分大于0.5的二肽有5條，三肽、四肽均有7條，五肽有6條(表2)，表明這些寡肽具有良好生物活性。隨后，對(duì)這25條寡肽進(jìn)行理化性質(zhì)分析，發(fā)現(xiàn)這些多肽的分子質(zhì)量較小，普遍分布在200～500，這使它們?cè)谖改c道內(nèi)能夠被快速吸收，并進(jìn)一步有利于其生物活性的發(fā)揮。這些多肽的等電點(diǎn)在1.0～11.0廣泛分布，這與它們所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)量比例有關(guān)。

表2 紫貽貝蛋白水解肽的活性評(píng)價(jià)及理化性質(zhì)分析Table 2 Activity evaluation and physical and chemical property analysis of the selected oligopeptides

水溶性是藥物在機(jī)體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)分布的基礎(chǔ)，并且是多肽在生物、食品等領(lǐng)域中應(yīng)用時(shí)需要考慮的重要指標(biāo)。因此，本研究進(jìn)一步預(yù)測(cè)了所得25條寡肽的水溶性情況。在所分析的寡肽中，共獲得9條水溶性寡肽，即YR、DF、GR、GPR、HMR、PGNR、PGPK、PGPR、QYGGR。從這些寡肽的氨基酸序列來(lái)看，大部分水溶性寡肽的C末端包含堿性氨基酸賴(lài)氨酸(K)和精氨酸(R)，表明C末端堿性氨基酸的存在對(duì)多肽水溶性具有重要影響。基于此，對(duì)上述9條具有良好生物活性的水溶性寡肽進(jìn)行下一步分析。

2.3 消化產(chǎn)物的毒性和ADMET評(píng)價(jià)

本研究首先通過(guò)toxinPred程序?qū)ι鲜?條水溶性寡肽進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明其SVM得分大都在-0.8左右，表明其無(wú)毒，因而具有良好的應(yīng)用安全性。

在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步使用admetSAR2程序預(yù)測(cè)了這些多肽的ADMET性質(zhì)(表3)。HIA預(yù)測(cè)結(jié)果表明9條水溶性寡肽的HIA值分布在0.4～0.8，表明這些寡肽均具有較好的腸道吸收，其中四肽PGPK(HIA值：0.816 4)、PGPR(HIA值：0.787 0)和二肽GR(HIA值：0.728 4)的腸道吸收概率相對(duì)較大。除PGPK外，這些寡肽的BBB滲透性值均大于0.9，表現(xiàn)出良好的BBB滲透性，這可能與所選寡肽的分子質(zhì)量較小有關(guān)。CYP450酶顯著影響包括活性肽和其他膳食產(chǎn)品在內(nèi)的多種內(nèi)源性和外源性化合物的代謝。因此，本研究進(jìn)一步比較了這些寡肽與CYP450 2D6之間的相互作用。預(yù)測(cè)結(jié)果表明這些寡肽均不是CYP450 2D6的底物或抑制劑，與該酶發(fā)生相互作用的概率較低。此外，其他CYP450酶(CYP450 2C9、CYP450 3A4和CYP450 1A2)也表現(xiàn)出類(lèi)似的預(yù)測(cè)結(jié)果。

表3 所篩選的寡肽的ADMET分析和活性預(yù)測(cè)Table 3 ADMET analysis and activity prediction of the selected oligopeptides

2.4 消化產(chǎn)物的活性預(yù)測(cè)

本研究使用BIOPEP程序進(jìn)一步預(yù)測(cè)了9種寡肽的具體生物活性(表3)。結(jié)果表明，在這些寡肽中，DF、GR、GPR、PGNR、PGPK、PGPR、QYGGR顯示出ACE抑制活性，YR、HMR、GPR、PGNR、PGPK、PGPR、QYGGR顯示出DDP-IV抑制活性，YR、GPR、HMR、PGPR、QYGGR顯示出DDP-III抑制活性，GPR、PGNR、PGPK、PGPR顯示出抗血栓和抗失憶活性，PGNR顯示出腎素抑制活性，YR顯示出神經(jīng)肽活性等。這些結(jié)果表明，紫貽貝蛋白在消化后產(chǎn)生了大量生物活性肽，因而具有良好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和生物學(xué)功能。

2.5 ACE抑制肽的篩選

本研究使用SwissDock分子對(duì)接比較了7條預(yù)測(cè)具有ACE抑制活性寡肽的抑制能力(表4)。7條寡肽與ACE蛋白對(duì)接時(shí)的吉布斯自由能均為負(fù)值，表明這些寡肽均能與ACE發(fā)生良好相互作用，從而發(fā)揮抑制活性。根據(jù)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)其中GR已有報(bào)道，其IC50值為3 110 μmol/L，而GPR和DF作為寡肽序列的N末端(GPRGF)或C末端(KPAGDF)部分報(bào)道，其余4條寡肽均為尚未報(bào)道的新型ACE抑制肽。在這4條新型寡肽中，五肽QYGGR的ΔG值最小(-11.19 kcal/mol)，該對(duì)接結(jié)果優(yōu)于大西洋鮭膠原蛋白(ΔG值最小為四肽GPEG，ΔG：-9.87 kcal/mol)[19]和黃花魚(yú)肌聯(lián)蛋白(ΔG值最小為三肽WAR，ΔG：-10.40 kcal/mol)[20]模擬水解多肽中ACE抑制肽的篩選結(jié)果，表明QYGGR具有良好的ACE抑制能力和開(kāi)發(fā)潛力。

表4 ACE抑制肽的篩選Table 4 Screening of ACE inhibitory peptides

在所篩選出的7條潛在的ACE抑制肽中，QYGGR、PGPR和GPR來(lái)源于前膠原蛋白D，PGNR、GPR、PGPK和GR來(lái)源于前膠原蛋白P，而DF來(lái)源于肌動(dòng)蛋白，由此可以看出膠原蛋白在獲得新型ACE抑制肽方面具有重要研究?jī)r(jià)值。從另一方面考慮，紫貽貝中膠原蛋白含量約為干重的8%[21]，而肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白分別約占干重的20%和30%[22]。因此，對(duì)于單一多肽，肌動(dòng)蛋白來(lái)源的多肽豐度可以大致估算為膠原蛋白來(lái)源多肽的4倍，表明盡管通過(guò)模擬消化從肌動(dòng)蛋白所獲得的ACE抑制肽的條數(shù)較少，但由于其相對(duì)高的豐度，因而在紫貽貝消化物的ACE抑制活性方面仍具有一定作用。

2.6 DPP-IV抑制肽的篩選

DPP-IV參與腸促胰島素激素加工過(guò)程并在血糖調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用[26]?；诖?，本研究根據(jù)表5中的篩選結(jié)果，使用iDPPIV-SCM程序?qū)哂袧撛贒PP-IV抑制活性的7條寡肽打分。除PGPR和QYGGR外，5條寡肽的預(yù)測(cè)得分大于閾值294，表明其具有DPP-IV抑制活性，其中HMR的抑制活性最高，其預(yù)測(cè)得分達(dá)到380.5，優(yōu)于已報(bào)到的大部分植物來(lái)源(大豆、羽扇豆、藜麥)的DPP-IV抑制肽[27]。同時(shí)，通過(guò)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)以上5條寡肽均無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，表明它們是具有良好研究?jī)r(jià)值的新型DPP-IV抑制肽。由于HMR的預(yù)測(cè)打分最高，因此將其用作潛在的DPP-IV抑制劑進(jìn)行后續(xù)研究。

表5 DPP-IV抑制肽的篩選Table 5 Screening of DPP-IV inhibitory peptides

在所篩選出的5條潛在的DPP-IV抑制肽中，GPR來(lái)源于前膠原蛋白D，PGPK、GPR和PGNR來(lái)源于前膠原蛋白P，而HMR、YR來(lái)源于肌球蛋白，由此可見(jiàn)膠原蛋白和肌球蛋白在獲得新型DPP-IV抑制肽方面具有重要價(jià)值。同樣，從多肽豐度角度考慮，膠原蛋白和肌球蛋白來(lái)源的多肽均在紫貽貝消化物的DPP-IV抑制活性方面發(fā)揮著重要作用。

2.7 分子對(duì)接

為了進(jìn)一步闡明多肽與目標(biāo)蛋白之間的相互作用，本研究進(jìn)一步將QYGGR(ACE抑制活性)和HMR(DPP-IV抑制活性)分別與ACE蛋白和DPP-IV蛋白進(jìn)行分子對(duì)接。

在QYGGR與ACE的分子對(duì)接中，QYGGR能夠結(jié)合ACE的活性殘基，形成穩(wěn)定復(fù)合物，其-CDOCKER能值為-156.078 kcal/mol，表明兩者之間具有良好的結(jié)合親和力(圖2-a)。對(duì)接結(jié)果顯示QYGGR主要通過(guò)與ACE蛋白分子的Tyr523、Glu411、Ala356、Ala354、Ser355、His513、His353、Glu376、Gln281、Asn277、Thr166形成11個(gè)氫鍵，與Trp357、Glu384、Asp415、Glu376、Glu162形成靜電吸引來(lái)形成穩(wěn)定復(fù)合物(圖2-b)。ACE蛋白分子的活性位點(diǎn)主要包括12個(gè)氨基酸殘基，即Gln281、Glu411、His513、His383、Glu384、His387、Tyr523、His353、Glu162、Tyr520、Lys511和Ala354[17]。QYGGR通過(guò)與Tyr523、Glu411、Ala354、His513、His353、Gln281、Glu384、Glu162發(fā)生相互作用而產(chǎn)生抑制。

a-ACE-QYGGR復(fù)合物的預(yù)測(cè)3D結(jié)構(gòu);b-ACE-QYGGR分子相互作用的2D圖圖2 ACE-QYGGR的分子對(duì)接圖Fig.2 Molecular docking diagram of ACE-QYGGR

在HMR與DPP-IV的分子對(duì)接中，HMR能夠結(jié)合DPP-IV的活性殘基，形成穩(wěn)定復(fù)合物，其-CDOCKER能值為-92.410 kcal/mol，表明兩者之間具有良好的結(jié)合親和力(圖3-a)。HMR主要通過(guò)與DPP-IV蛋白分子中的Tyr547、Tyr662和Glu205形成氫鍵、與His740形成π-烷基鍵、與Ser630、Tyr666和Tyr662形成π-π或酰胺-π鍵、與Tyr666、Asp663、Glu205、Glu206、Arg669和Arg358形成電荷吸引進(jìn)行結(jié)合(圖3-b)。DPP-IV分子包含3個(gè)活性口袋：S1、S2和S3，其中S1含有Tyr547、Ser630、Tyr631、Val656、Trp659、Tyr662、Tyr666、Asn710、Val711和His740；S2含有Glu205、Glu206和Tyr662；S3含有Ser209、Arg358和Phe357[18]。因此，HMR通過(guò)與S1中的Tyr547、Tyr662、His740、Ser630和Tyr666、S2中的Glu205、Glu206和Tyr662以及S3中的Arg358發(fā)生相互作用而產(chǎn)生抑制。

盡管本研究未對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，但先前研究表明通過(guò)生物信息學(xué)方法對(duì)多肽分子生物活性的預(yù)測(cè)具有較好的可信性。例如，YU等[28]在對(duì)來(lái)源于卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的ACE抑制三肽的研究中比較了分子對(duì)接過(guò)程中-CDOCKER能值最大的2種三肽EWL(106.486 kcal/mol)和KDF(103.876 kcal/mol)的體外抑制活性，結(jié)果顯示-CDOCKER能值更高的三肽EWL同時(shí)也具有更強(qiáng)的體外抑制活性，表明分子對(duì)接方法能夠在一定程度上指示小分子配體對(duì)目標(biāo)蛋白的抑制效果。同時(shí)，本研究中所發(fā)現(xiàn)的ACE抑制肽QYGGR與ACE的-CDOCKER能值達(dá)到156.078 kcal/mol，遠(yuǎn)大于上述研究中的EWL，表明其具有較好的潛在ACE抑制活性和研究?jī)r(jià)值。同時(shí)，本研究中所發(fā)現(xiàn)的DPP-IV抑制肽HMR與DPP-IV的-CDOCKER能值達(dá)到92.410 kcal/mol，其高于雞蛋來(lái)源的水溶性DPP-IV抑制肽CDR(-CDOCKER能值為81.371 3 kcal/mol，IC50=24.49 mmol/L)[29]，表明其具有較好的潛在DPP-IV抑制活性。另一方面，盡管體外、體內(nèi)和隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)?zāi)軌蛑苯又甘臼吃葱远嚯牡纳锘钚?，但這些肽對(duì)健康的有益作用仍需研究證實(shí)，而本研究提供了對(duì)紫貽貝源多肽活性的快速篩選，這為其長(zhǎng)期研究提供了參考[30]。

a-DPP-IV-HMR復(fù)合物的預(yù)測(cè)3D結(jié)構(gòu);b-DPP-IV-HMR分子相互作用的2D圖圖3 DPP-IV-HMR的分子對(duì)接圖Fig.3 Molecular docking diagram of DPP-IV-HMR

另外，本研究使用胃蛋白酶和胰蛋白酶的組合對(duì)紫貽貝蛋白進(jìn)行模擬消化，獲得了具有高ACE抑制活性的五肽QYGGR和高DPP-IV抑制活性的三肽HMR。然而，胰凝乳蛋白酶同樣是人腸道中存在的一種重要的絲氨酸蛋白酶，因此對(duì)本研究中所篩選出的多肽存在潛在的酶切可能?；谏鲜隹紤]，使用胰凝乳蛋白酶(EC 3.4.21.1)分別對(duì)QYGGR和HMR進(jìn)行模擬水解，發(fā)現(xiàn)兩者均能被其進(jìn)一步酶切。這提示當(dāng)在人體中使用時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步確認(rèn)2種功能性多肽在體內(nèi)的實(shí)際消化穩(wěn)定性，從而為其廣泛應(yīng)用提供更完備的依據(jù)。

3 結(jié)論

本論文研究了紫貽貝主要蛋白的模擬消化情況，其中肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白水解度相對(duì)較高，分別達(dá)到30.85%和22.11%，而前膠原蛋白P、前膠原蛋白D水解度相對(duì)較低，均在10%左右，消化后4種蛋白均釋放出大量寡肽(二肽至五肽)。通過(guò)PeptideRanker活性評(píng)分以及理化性質(zhì)分析，從這些寡肽中篩選出9條具有潛在研究?jī)r(jià)值的多肽。通過(guò)ADMET分析和生物活性預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)9條寡肽中，DF、GR、GPR、PGNR、PGPK、PGPR、QYGGR具有ACE抑制活性，YR、HMR、GPR、PGNR、PGPK、PGPR、QYGGR具有DPP-IV抑制活性。對(duì)具有潛在ACE抑制活性和DPP-IV抑制活性的寡肽進(jìn)行篩選，將QYGGR和HMR分別確定為具有潛在研究?jī)r(jià)值的ACE抑制肽和DPP-IV抑制肽。通過(guò)分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)，QYGGR和ACE蛋白以及HMR和DPP-IV蛋白能夠形成穩(wěn)定復(fù)合物，其-CDOCKER能值分別為-156.078和-92.410 kcal/mol，其中QYGGR通過(guò)與ACE分子中的Tyr523、Glu411、Ala354、His513、His353、Gln281、Glu384、Glu162發(fā)生相互作用而產(chǎn)生抑制，而HMR通過(guò)與DPP-IV的S1中的Tyr547、Tyr662、His740、Ser630和Tyr666、S2中的Glu205、Glu206和Tyr662以及S3中的Arg358發(fā)生相互作用而產(chǎn)生抑制。本研究為紫貽貝營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的闡釋以及紫貽貝來(lái)源的生物活性肽的開(kāi)發(fā)提供了理論依據(jù)。