陶雨凡 杜 菁 兀 琦 葛學麗 王志斌 王少平 張加余

1 濱州醫(yī)學院藥學院 山東 煙臺 264003;2 北京同仁堂研究院 北京 100062

中藥主要包括植物藥、動物藥和礦物藥三大類。礦物藥作為中藥的重要組成部分，資源豐富，效果顯著，在臨床上發(fā)揮著不可缺少的作用[1-3]。煅紫貝齒首載于《新修本草》，是寶貝科動物蛇首眼球貝ErosariacaputserpentisL.、山貓眼寶貝CypraealynxL或阿文綬貝MauritiaarabicaL.貝殼的炮制加工品。其性平味咸，歸脾、肝經(jīng)，具有鎮(zhèn)靜安神、清熱解毒、清肝明目等功效，可用于治療目赤腫痛，頭暈?zāi)垦５萚4-6]。魚腦石首載于《日華子本草》，來源于石首魚科動物大黃魚Pseudosciaena crocea(Richardson)或者小黃魚Pseudosciaena polyactis Bleeker頭骨中的耳石，春秋兩季捕撈，取出頭部耳石，洗凈，曬干。其性平、味咸，歸肝、腎經(jīng)，具有化石、通淋、消腫之功效，臨床上可用于治療各種石淋、小便不利、耳痛流膿、鼻淵、腦漏等[7-8]。雖然礦物藥的中醫(yī)臨床應(yīng)用日益廣泛，但市場上此類藥品的質(zhì)量魚龍混雜。煅紫貝齒和魚腦石的臨床應(yīng)用價值受到越來越多的重視，但缺乏完善的質(zhì)量標準，因此，亟需通過研究進行提高。

目前，煅紫貝齒和魚腦石多被收載于各省市中藥材標準和飲片炮制規(guī)范，但都僅限于來源、性狀和炮制方法等。《山東中藥飲片炮制規(guī)范》2012年版僅規(guī)定了煅紫貝齒的基原和性狀，而《北京市中藥飲片炮制規(guī)范》2008年版則在基原和性狀的基礎(chǔ)上增加非專屬性的顏色鑒別檢查?，F(xiàn)行質(zhì)量標準中關(guān)于煅紫貝齒的描述僅有來源及成品性狀，而現(xiàn)有的魚腦石質(zhì)量標準中的主要項目包括藥材來源、炮制、性狀、鑒別、性味與歸經(jīng)、功能與主治、用法與用量和貯藏項。本研究基于煅紫貝齒和魚腦石的理化特性，在現(xiàn)有質(zhì)量標準的基礎(chǔ)上采用理化鑒別、性狀微觀檢查和滴定含量測定方法等建立更加科學合理的質(zhì)量標準，以期為這兩種礦物藥的質(zhì)控提供可參考的科學依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 烘箱(上海-恒科學儀器有限公司，型號為DHG-9140A)；高速中藥粉碎機(吉首市中誠制藥機械廠，型號為XFB-1000)；暗箱式紫外分析儀(上海嘉鵬科技有限公司，型號為ZF-20C)；水分測定儀(上海佑科儀器儀表有限公司，型號為DSH-10A)；天平(上海良平儀器儀表有限公司，型號為METTLER TOLEDO XPE105DR)。

1.2 材料與試劑 煅紫貝齒購于安國藥材市場、北京春風藥業(yè)公司、北京益通百瑞藥業(yè)公司，經(jīng)濱州醫(yī)學院藥學院代龍教授鑒定為寶貝科動物蛇首眼球貝ErosariacaputserpentisL.山貓眼寶貝CypraealynxL.或阿文綬貝MauritiaarabicaL.貝殼的炮制加工品。魚腦石購于安國藥材市場，經(jīng)濱州醫(yī)學院藥學院代龍教授鑒定為石首魚科動物大黃魚Pseudosciaena crocea(Richardson)或小黃魚Pseudosciaena polyactis Bleeker頭骨中的耳石。

氯化鉀(天津市鼎盛鑫化工有限公司，95%)；無水三氯化鐵(國藥集團化學試劑有限公司，95%)；甲基紅(MACKLIN，0.1)；鈣黃綠素(天津市光復(fù)精細化工研究所，99.0%)；硫酸銀(西隴科學股份有限公司，99.7%)；鹽酸(新光化工試劑廠，37%)。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀描述 煅紫貝齒后質(zhì)松脆，無光澤，呈紫棕色或灰白色(圖1)。魚腦石呈長卵狀三棱形，中間較寬，一端鈍圓，另一端尖，有一條斜凹溝，一面較平坦，表面近兩端處各具一個圓形痕，全體瓷白色，質(zhì)堅硬，難破碎，氣微，味淡(圖2)。

圖1 12批煅紫貝齒的實際性狀觀察

圖2 7批魚腦石的實際性狀觀察

2.2 理化鑒別

2.2.1 煅紫貝齒 用鹽酸潤濕鉑絲，蘸取少許粉末，在無色火焰上灼燒，呈現(xiàn)磚紅色火焰。取本品粉末0.2 g，加稀鹽酸5 mL，即有大量氣泡產(chǎn)生，將氣體導(dǎo)入氫氧化鈣溶液中，生成白色沉淀。取上述反應(yīng)后的溶液，過濾，濾液加甲基紅指示劑2滴，用氨溶液中和，再加鹽酸恰至酸性。加草酸銨溶液即生成白色沉淀，分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀鹽酸。

2.2.2 魚腦石 取本品粉末置紫外燈下(365 nm)進行檢測，結(jié)果均呈現(xiàn)藍紫色熒光(圖3)。取本品適量，置稀鹽酸中浸泡3 min，取出，用水洗凈備用。取樣品2粒，置于試管中，加入10%三氯化鐵溶液，表面呈褐色。另取樣品1粒置于莫菲格爾溶液中(取硫酸錳11.8 g，加水100 mL溶解后，加硫酸銀1 g，煮沸，冷卻，過濾，加入稀氫氧化鈉溶液2滴，搖勻，即得)中，1 min后表面變灰色，約10 min后變?yōu)楹谏?。此反?yīng)各階段顏色變化主要涉及褐色、灰色和黑色。

圖3 魚腦石粉末紫外燈下反應(yīng)圖像

2.3 水分 本研究參照《中國藥典》2020年版通則提及的水分測定法，對12批煅紫貝齒和7批魚腦石進行了水分測定(表1)。

表1 煅紫貝齒加樣回收實驗結(jié)果

2.4 含量測定

2.4.1 樣品溶液配制 分別取煅紫貝齒、魚腦石細粉約0.15 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，加熱使之溶解。

2.4.2 滴定液的配制 精密稱取乙二胺四醋酸二鈉16.80 mg，將其加入去離子水100 mL中。采用氧化鋅標定濃度為0.05 moL/L。2.4.3 含量測定方法 參照《中國藥典》2020年版提及的石決明碳酸鈣含量測定方法，分別取煅紫貝齒或魚腦石細粉約0.15 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，加熱使溶解，加水20 mL與甲基紅指示液1滴，滴加10%氫氧化鉀溶液至溶液顯黃色，繼續(xù)多加10 mL，再加少量鈣黃綠素指示劑，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液滴定至溶液黃綠色熒光消失而顯橙色。每1 mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 moL/L)相當于5.004 mg的碳酸鈣。

2.4.4 精密度考察 依據(jù)“2.4.3”項下配置煅紫貝齒、魚腦石樣品各1份，不同人員采用EDTA滴定法對以上樣品進行滴定。結(jié)果表明，煅紫貝齒中CaCO3平均含量為95.92%，魚腦石中CaCO3平均含量為94.91%，其RSD值分別為1.05%和1.89%。這表明，本研究方法的中間精密度好。

2.4.5 重復(fù)性考察 依據(jù)“2.4.3”項下配置煅紫貝齒、魚腦石樣品各6份，采用EDTA滴定法對以上樣品進行滴定。結(jié)果表明，煅紫貝齒中CaCO3平均含量為96.2%，魚腦石內(nèi)CaCO3平均含量為95.01%，其RSD值分別為1.23%和0.89%。這表明，本研究方法的重復(fù)性良好。

2.4.6 加樣回收考察 取煅紫貝齒、魚腦石樣品各6份，每份0.075 g左右，置于錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，加熱使之溶解，再加入CaCO3標準品75 mg，依據(jù)“2.4.3”方法對以上樣品進行考察。結(jié)果表明，煅紫貝齒中CaCO3加樣回收率為98.12%，魚腦石內(nèi)CaCO3平均含量為99.43%，均穩(wěn)定在95%～105%的置信區(qū)間內(nèi)，其RSD值分別為2.03%和1.36%(表1、2)。這表明，本研究方法的加樣回收率良好。

表2 魚腦石加樣回收實驗結(jié)果

2.4.7 含量測定 分別取煅紫貝齒和魚腦石樣品0.15g，依照“2.4.3”方法測定其中CaCO3的含量。結(jié)果顯示，12批煅紫貝齒的水分均不超過0.3%，7批魚腦石的水分均不超過0.6%。由此可得，煅紫貝齒的水分含量顯著低于魚腦石。12批煅紫貝齒的CaCO3含量平均為96.71%，7批魚腦石的CaCO3平均含量為94.95%，煅紫貝齒的CaCO3含量高于魚腦石。本研究依據(jù)上述結(jié)果，對煅紫貝齒和魚腦石的水分和CaCO3含量進行限度規(guī)定：按干燥品計算，煅紫貝齒水分限度不超過0.5%，含CaCO3不得少于95.00%；魚腦石水分限度不得超0.8%，含CaCO3不得少于90.00%(表3)。

表3 煅紫貝齒、魚腦石的來源、產(chǎn)地水分及CaCO3含量測定結(jié)果

3 討論

中藥飲片為市場上流通的一種特殊商品，除了確保其不濫用外，對其進行質(zhì)量保證也是非常重要的[10]。隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的日益發(fā)展，人們對中藥飲片的需求增加。生長環(huán)境、地理位置、采集差異等諸多因素會導(dǎo)致中藥質(zhì)量等級參差不齊。中藥飲片的質(zhì)量直接影響其臨床療效，因此，對其制定科學合理的質(zhì)量標準成為當務(wù)之急。礦物藥是中藥的重要組成部分之一，其質(zhì)量標準控制水平相對偏低，亟需通過相關(guān)研究進行提升。

本研究顯示，煅紫貝齒和魚腦石的水分含量分別不高于0.5%和0.8%，CaCO3的含量分別不少于95%和90%。結(jié)合所制定的性狀和理化鑒別方法，本研究所建立的質(zhì)控方法操作簡單，結(jié)果準確可靠，可有效地控制煅紫貝齒和魚腦石飲片的質(zhì)量。然而，本研究僅針對煅紫貝齒和魚腦石的理化鑒別、水分、CaCO3三個方面進行研究，具有一定的局限性，后續(xù)將在現(xiàn)有控制內(nèi)容的基礎(chǔ)上增加對煅紫貝齒和魚腦石的重金屬含量測定方法及限度，使其標準更加完善。