蘇立杰，李國(guó)坤，陳淼煥，曾鈺鵬，韋艷祝，陳驍熠，陳靜

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，廣東廣州 511436）（2.廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣東廣州 511436）

慢傳輸型便秘（slow transit constipation，STC）是一種臨床上常見的功能性便秘，以結(jié)腸動(dòng)力減弱、結(jié)腸傳輸時(shí)間延長(zhǎng)為主要特點(diǎn)，主要癥狀為便意消失、排便次數(shù)減少、糞便干硬、排便費(fèi)力，其癥狀頑固，嚴(yán)重者可誘發(fā)心腦血管疾病、結(jié)直腸癌等并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和心理健康[1,2]。據(jù)相關(guān)報(bào)道，慢性傳輸型便秘全球發(fā)病率約為14%，其中我國(guó)發(fā)病率為3.19%～11.6%，且呈上升遞增趨勢(shì)[3]。已有的研究表明，STC發(fā)病因素眾多，其可能與胃腸動(dòng)力不足、激素水平紊亂、腸道菌群失調(diào)[4]、Cajal間質(zhì)細(xì)胞變化[5]、腸神經(jīng)異常[6-8]、結(jié)腸粘膜水通道改變[9,10]等有關(guān)。STC現(xiàn)有的治療方法主要有藥物治療（緩瀉劑和促動(dòng)力劑）、手術(shù)和糞便移植等，常規(guī)的藥物治療雖然短期內(nèi)療效較好，但長(zhǎng)期使用會(huì)引起藥物依賴、惰性結(jié)腸等不良反應(yīng)，而手術(shù)和糞便移植在臨床上難以普遍開展，手術(shù)治療的復(fù)發(fā)率也較高[11,12]。因此，尋找安全有效的天然活性物質(zhì)在治療和緩解慢傳輸型便秘具有重要的意義。

研究顯示，慢性便秘的發(fā)生與腸道菌群失調(diào)密切相關(guān)。便秘型腸易激綜合征患者糞便中的雙歧桿菌豐度水平較低[13]。Khalif等[14]研究發(fā)現(xiàn)成年功能性便秘的患者糞便中雙歧桿菌菌屬和乳桿菌屬細(xì)菌菌落數(shù)量顯著減少。張旭等[15]發(fā)現(xiàn)老年便秘患者糞便中腸道菌群的雙歧桿菌含量顯著降低。黃小明等[16]認(rèn)為腸道微生物可能通過(guò)改變宿主代謝和代謝產(chǎn)物（包括氣體、短鏈脂肪酸和膽汁酸）而影響腸道蠕動(dòng)，進(jìn)而導(dǎo)致慢性便秘。因此，以腸道菌群為靶點(diǎn)干預(yù)STC是切實(shí)可行的。

芹菜素（apigenin）是天然存在的一種黃酮類化合物，已知其具有抗腫瘤、抗炎、抗疲勞、抗動(dòng)脈硬化、抗氧化、抗痛風(fēng)、降壓、降糖、免疫調(diào)節(jié)等多種作用[17-22]。王麗等[23]發(fā)現(xiàn)芹菜素能降低糖尿病小鼠血糖，并通過(guò)提高M(jìn)LCK蛋白表達(dá)來(lái)改善腸動(dòng)力障礙。Thaiss等[24]發(fā)現(xiàn)芹菜素可調(diào)節(jié)腸道菌群，進(jìn)而影響減肥后的體重恢復(fù)速率。常佩亮等[25]發(fā)現(xiàn)腸道菌群會(huì)影響芹菜素的代謝。Hanske等[26]研究發(fā)現(xiàn)人體腸道微生物群對(duì)芹菜素-7-葡萄糖苷（A7G）生物利用及代謝有很大貢獻(xiàn)。結(jié)合已有的研究報(bào)道，芹菜素與腸動(dòng)力以及腸道菌群密切相關(guān)，我們推測(cè)其可能通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群進(jìn)而發(fā)揮改善慢傳輸型便秘的作用。

但目前關(guān)于芹菜素對(duì)便秘及腸道菌群的研究報(bào)導(dǎo)較少，故本課題擬基于STC小鼠模型，探討芹菜素對(duì)STC小鼠的通便效果及其對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用，為STC防治及相關(guān)功能食品的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

芹菜素（HPLC≥98%），上海金穗生物科技有限公司；鹽酸洛哌丁胺膠囊，西安楊森制藥有限公司；碳粉，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；阿拉伯膠，上海麥克林生化科技有限公司；吐溫80，天津市福晨化學(xué)試劑廠；氯化鈉，天津市大茂化學(xué)試劑廠；戊巴比妥鈉（1%），天津市大茂化學(xué)試劑廠；伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；膽汁七葉苷瓊脂，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；LBS瓊脂，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SPX-250B微機(jī)生化培養(yǎng)箱，上海悅豐儀器儀表有限公司；移液槍，艾本德中國(guó)有限公司；玻璃儀器氣流烘干器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；旋渦混合儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；FE20 pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；T6773電子天平，普利賽斯科學(xué)儀器有限公司（瑞士）；ZHJH-C1106B超凈工作臺(tái)，上海智城分析儀器制造有限公司；MULTISKAN GO全自動(dòng)酶標(biāo)儀，廣東丹利科技有限公司；MLS-3750高壓蒸汽滅菌機(jī)，日本三洋；純水機(jī)，南京貝登醫(yī)療股份有限公司；DZF-6050真空干燥，上海-恒科學(xué)儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

BALB/c小鼠，SPF級(jí)，30只，雄性，四周齡，健康狀況良好，購(gòu)買于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：NO. 44007200049595，許可證號(hào)：SCXK(粵) 2013-0002。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠的灌胃

30只BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組：空白組（K組）、模型組（M組）和芹菜素干預(yù)組（G組）。根據(jù)各組小鼠體重按量給藥，其中模型組和干預(yù)組給予10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液，另外干預(yù)組再同時(shí)給予200 mg/kg·BW的芹菜素溶液，空白組和模型組再給予相應(yīng)的生理鹽水。灌胃14 d后觀察黑便判斷其造模和干預(yù)效果。其中，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道選擇200 mg/kg·BW芹菜素劑量進(jìn)行干預(yù)[27]。

1.4.2 黑便實(shí)驗(yàn)

連續(xù)灌胃14 d后，將各組小鼠禁食不禁水12～16 h，再進(jìn)行黑便觀察實(shí)驗(yàn)。模型組和干預(yù)組小鼠使用洛哌丁胺灌胃，空白組小鼠相應(yīng)的生理鹽水進(jìn)行灌胃。30 min后，模型組和空白組使用生理鹽水和0.2 mL墨汁灌胃，芹菜素干預(yù)組使用200 mg/kg芹菜素和0.2 mL墨汁灌胃，分別放入準(zhǔn)備好的小隔間，進(jìn)行黑便觀察實(shí)驗(yàn)。通過(guò)對(duì)黑便粒數(shù)、墨汁灌胃時(shí)間和首顆黑便排出的時(shí)間的記錄，統(tǒng)計(jì)出首顆黑便時(shí)間和黑便粒數(shù)。

1.4.3 糞便含水率的測(cè)定

使用隔板將老鼠隔離開，用鑷子收集小鼠糞便于滅菌過(guò)的2 mL EP管中，做好標(biāo)記。使用分析天平稱量新鮮糞便重量，置于37 ℃的烘箱中，在24 h、48 h后稱量烘干后的糞便重量，通過(guò)計(jì)算，得出糞便的含水量。

1.4.4 墨汁推進(jìn)率的測(cè)量

重復(fù)1.4.1灌胃操作25 min后，立即使用腹腔注射50 mg/kg戊巴比妥鈉（1%），待麻醉后，摘眼球取血，處死，開腹取小腸測(cè)量小腸長(zhǎng)度和墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度，計(jì)算得出小鼠墨汁推進(jìn)率。計(jì)算公式如下：

1.4.5 新鮮糞便的采集及處理

1.4.5.1 糞便采集

對(duì)小鼠肛門附近進(jìn)行充分消毒后，使用無(wú)菌棉棒輕微擦拭小鼠肛門，刺激小鼠排便，并收集糞便于已知質(zhì)量（b）的2 mL EP管中，蓋緊備用。稱量帶有小鼠糞便的EP管，質(zhì)量為a，計(jì)算得小鼠糞便重量為m，單位為g，其計(jì)算公式如下：

1.4.5.2 糞便稀釋液的制備

對(duì)手部充分消毒后，在超凈工作臺(tái)上，使用移液槍向裝有糞便的EP管中加入99倍糞便重量的生理鹽水，攪拌搗碎，待充分混合后，再吸取1 mL糞便混合液于10 mL的無(wú)菌試管中，加入9 mL無(wú)菌生理鹽水，制成濃度為10-3的糞便稀釋液。重復(fù)以上方法分別制備濃度為10-4、10-5、10-6的糞便稀釋液，做好標(biāo)記后備用。

1.4.6 腸道細(xì)菌的體外培養(yǎng)鑒定與計(jì)數(shù)

1.4.6.1 培養(yǎng)基的配制

伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）：稱取37.5 g培養(yǎng)基配方粉末，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，120 ℃高壓滅菌15 min，冷至50 ℃傾注滅菌培養(yǎng)皿。

膽汁七葉苷瓊脂培養(yǎng)基（BEA）：稱取44.5 g培養(yǎng)基配方粉末，加入1 L蒸餾水或去離子水，攪拌加熱煮沸至完全溶解，120 ℃高壓滅菌15 min，備用。

雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基（BBL）：稱取59.3 g培養(yǎng)基配方粉末，加入蒸餾水或去離子水600 mL和西紅柿浸出液400 mL，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，120 ℃高壓滅菌15 min。（西紅柿浸出液制備：將新鮮西紅柿洗凈后稱量切碎，加入等量的蒸餾水在100 ℃水浴中加熱，攪拌90 min，然后用紗布過(guò)濾，校正pH至7.0）

乳桿菌選擇性培養(yǎng)基（LBS）：稱取84.0 g培養(yǎng)基配方粉末，再吸取1 mL吐溫80和冰乙酸1.3 mL，加熱攪拌溶解于1000 mL蒸餾水中，120 ℃高壓滅菌15 min。

1.4.6.2 生化鑒定

觸酶試驗(yàn)：取潔凈玻片1片，用接種環(huán)挑取細(xì)菌，加入3%過(guò)氧化氫1滴，立即觀察結(jié)果。若立即出現(xiàn)大量氣泡則為陽(yáng)性，否則為陰性。

氧化酶試驗(yàn)：直接往待測(cè)菌菌落上滴加1%鹽酸四甲基對(duì)苯二胺。若細(xì)菌在與試劑接觸10 s內(nèi)呈深紫色，為陽(yáng)性。

硝酸鹽還原試驗(yàn)：將待測(cè)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，于35 ℃培養(yǎng)1～4 d，將甲、乙液等量混合后（約0.1 mL）加入培養(yǎng)基中，立即觀察結(jié)果。若培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色則為陽(yáng)性，否則為陰性（或假陰性）。

高鹽耐受試驗(yàn)：將待測(cè)菌接種于6.5%氯化鈉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的平板中，使用涂布棒涂勻，后置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。24～48 h后，觀察平板上是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。

45 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)：將待測(cè)菌接種至腸球菌選擇培養(yǎng)基中，使用涂布棒涂布均勻，后置于45 ℃下恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。24～48 h后，觀察平板上是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。

氧氣生長(zhǎng)試驗(yàn)：將待測(cè)菌接種至雙歧桿菌選擇培養(yǎng)基中，用涂布棒涂布均勻，后置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。24～48 h后，觀察平板是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。

1.4.6.3 菌落計(jì)數(shù)（腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、乳桿菌）

分別取以上一系列濃度（10-3、10-4、10-5、10-6）的糞便稀釋液100 μL于四種不同培養(yǎng)基中，均勻涂布后，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h（雙歧桿菌、乳桿菌的培養(yǎng)需使用厭氧培養(yǎng)袋）。每種菌種做三個(gè)平行，選取菌落總數(shù)在30～300 CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)菌落總數(shù)取平均數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均獨(dú)立平行測(cè)定，數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，采用SPSS 24.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，通過(guò)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差檢驗(yàn)做顯著性分析，p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 小鼠STC模型的建立

將空白組與模型組的排便指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，如表1和圖1所示，可得模型組的首粒黑便時(shí)間（188.70 min）相對(duì)于空白組（74.60 min）增加了1.53倍（p＜0.05）；6 h排便粒數(shù)（10.40 n）相對(duì)于空白組（18.80 n）減少了45%（p＜0.05）；糞便重量（0.42 g）相對(duì)于空白組（0.91 g）減少了53.85%（p＜0.05）；墨汁推進(jìn)率43.99%相對(duì)于空白組（78.63%）減少了44.05%（p＜0.05）。判斷慢性傳輸型便秘小鼠模型建立成功與否的標(biāo)準(zhǔn)包括首粒黑便時(shí)間、6 h排便粒數(shù)、糞便重量、墨汁推進(jìn)率。通過(guò)觀察，小鼠6 h排便粒數(shù)和糞便重量任一結(jié)果陽(yáng)性，并且首粒黑便時(shí)間和墨汁推進(jìn)率任一結(jié)果陽(yáng)性，即可判定STC模型成功建立[28,29]。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，首粒黑便時(shí)間、6 h排便粒數(shù)、糞便重量、墨汁推進(jìn)率均呈陽(yáng)性，可說(shuō)明小鼠STC模型建立成功。本實(shí)驗(yàn)使用10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液灌胃14 d可成功建立小鼠STC模型，與相關(guān)文獻(xiàn)的STC模型研究建立方法一致[30-32]。

表1 洛哌丁胺對(duì)小鼠排便指標(biāo)的影響 Table 1 Effect of loperamide on defecation indexes of mice

2.2 芹菜素對(duì)小鼠首次黑便時(shí)間、6 h排便粒數(shù)、糞便重量、墨汁推進(jìn)率的影響

將干預(yù)組與模型組的排便指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，如表2和圖1所示，得干預(yù)組的首粒黑便時(shí)間（141.80 min）相對(duì)于模型組（188.70 min）減少了24.85%（p＜0.05）；6 h排便粒數(shù)（19.30 n）相對(duì)于模型組（10.40 n）增加了0.86倍（p＜0.05）；糞便重量（0.93 g）相對(duì)于模型組（0.42 g）增加了1.21倍（p＜0.05）；墨汁推進(jìn)率（90.61%）相對(duì)于模型組（43.99%）增加了1.05倍（p＜0.05）。根據(jù)保健食品的通便功能檢驗(yàn)方法：6 h排便粒數(shù)和糞便重量任一項(xiàng)結(jié)果顯著，同時(shí)墨汁推進(jìn)率和首粒黑便時(shí)間任一項(xiàng)結(jié)果顯著，可判定該受試樣品對(duì)便秘小鼠具有通便功效[33]，而在本次實(shí)驗(yàn)中，首粒黑便時(shí)間、6 h排便粒數(shù)、糞便重量、墨汁推進(jìn)率均呈陽(yáng)性，可判定200 mg/kg·BW芹菜素對(duì)STC小鼠具有顯著的通便作用。

表2 芹菜素對(duì)小鼠排便指標(biāo)的影響 Table 2 Effect of apigenin on defecation indexes of mice

2.3 芹菜素對(duì)STC小鼠糞便含水率的影響

將空白組和干預(yù)組的糞便含水率與模型組進(jìn)行對(duì)比，如表3所示，可得模型組的糞便含水率（39.45%）相較于空白組（62.37%）減少了36.75%（p＜0.05），干預(yù)組的糞便含水率（72.15%）相較于模型組（39.45%）增加了0.82倍（p＜0.05）?？傻贸雎暹叨“吩诮⑿∈骃TC模型可顯著地降低糞便含水率，而芹菜素可增加STC小鼠的糞便含水率。

表3 芹菜素對(duì)小鼠糞便含水率的影響 Table 3 Influence of apigenin on various defecation indexes in mice

上述結(jié)果表明芹菜素具有潤(rùn)腸通便作用。相關(guān)研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)一些富含黃酮類物質(zhì)成分的天然產(chǎn)物也有通便的效果。付山等[34]通過(guò)檢測(cè)便秘小鼠的小腸推進(jìn)率，發(fā)現(xiàn)桑葚果汁具有通便作用，并證明其通便作用與總黃酮類成分有關(guān)；研究發(fā)現(xiàn)[35]沙蔥中的黃酮類物質(zhì)成分對(duì)洛哌丁胺誘導(dǎo)的便秘有通便作用，可以通過(guò)影響腸動(dòng)力和腸道水分轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)達(dá)到通便的效果。因此，同屬于黃酮化合物的芹菜素，也可能通過(guò)影響腸道蠕動(dòng)和水分轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)發(fā)揮通便作用。

2.4 芹菜素對(duì)STC小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

2.4.1 試驗(yàn)菌生化鑒定

取各組小鼠糞便，用生理鹽水稀釋后，分別接種在EMB、BEA、BBL、LBS培養(yǎng)基上，放37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24～48 h，通過(guò)對(duì)所培養(yǎng)的試驗(yàn)菌進(jìn)行生化鑒定，確保菌群為研究所需的試驗(yàn)菌，其菌落形態(tài)和生化鑒定結(jié)果如表4和圖2所示，腸桿菌、腸球菌、乳桿菌和雙歧桿菌菌落形態(tài)的生化鑒定結(jié)果均符合《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第九版的相關(guān)規(guī)定，可用作以下小鼠腸道細(xì)菌菌落總數(shù)計(jì)數(shù)使用。

表4 試驗(yàn)菌菌落形態(tài)和生化鑒定結(jié)果 Table 4 Colony morphology and biochemical identification results of the test bacteria

2.4.2 菌落計(jì)數(shù)

如表5所示，模型組的腸桿菌菌落總數(shù)（7.1×106）顯著多于空白組（2.6×106），而干預(yù)組的菌落總數(shù)（2.9×106）相對(duì)于模型組顯著降低（p＜0.05）。模型組的腸球菌菌落總數(shù)（5.4×106）相對(duì)于空白組（1.2×106）顯著增加，而干預(yù)組的菌落總數(shù)（1.9×106）（p＜0.05）有顯著下降。模型組的雙歧桿菌菌落總數(shù)（2.4×107）顯著少于空白組（6.9×107），而干預(yù)組（4.6×107）則顯著增加雙歧桿菌菌落總數(shù)（p＜0.05）。模型組的乳酸桿菌菌落總數(shù)（2.1×107）顯著少于空白組（8.4×107），而干預(yù)組可顯著增加乳酸桿菌菌落總數(shù)（6.7×107）（p＜0.05）。上述結(jié)果表明STC小鼠糞便有害菌腸桿菌、腸球菌顯著增加，芹菜素的干預(yù)可有效地抑制腸桿菌、腸球菌的過(guò)度生長(zhǎng)；另一方面，STC小鼠糞便中有益菌雙歧桿菌、乳酸桿菌顯著減少，芹菜素干預(yù)可有效地扶植雙歧桿菌、乳酸桿菌的增殖。

表5 芹菜素對(duì)腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌的影響(CFU/g) Table 5 Effects of apigenin on Enterobacterium, Enterococcus, Bifidobacterium and Lactobacillus (CFU/g)

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，可以選擇益生菌中的雙歧桿菌和乳桿菌，及有害菌中的腸桿菌和腸球菌為試驗(yàn)菌進(jìn)行體外培養(yǎng)，來(lái)評(píng)價(jià)對(duì)腸道菌群的影響。如李根林等[36]通過(guò)對(duì)STC模型老鼠新鮮糞便中的腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、乳桿菌進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，研究復(fù)方地芬諾酯建立的STC模型老鼠中腸道菌群的變化情況。彭禛菲等[37]通過(guò)對(duì)腸桿菌、腸球菌、乳桿菌和雙歧桿菌進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)野山杏果肉不溶性膳食纖維具有改善小鼠腸道菌群和通便的作用。因此，本課題選取雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌和腸球菌作為試驗(yàn)菌對(duì)象來(lái)評(píng)價(jià)芹菜素對(duì)腸道微生物的調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)芹菜素干預(yù)可有效地抑制腸桿菌、腸球菌的過(guò)度生長(zhǎng)，以及有效地扶植雙歧桿菌、乳酸桿菌的增殖。相關(guān)研究報(bào)道也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果。如魏濤等[38]以復(fù)方地芬諾酯建立小鼠便秘模型，連續(xù)給予低聚木糖干預(yù)14 d后，低、高劑量組小鼠糞便內(nèi)乳桿菌、雙歧桿菌均顯著增加，從而證明了低聚木糖具有改善小鼠腸道菌群及潤(rùn)腸通便的功能。唐飛等[39]發(fā)現(xiàn)適度的青磚茶可以抑制腸桿菌、腸球菌繁殖，扶植雙歧桿菌和乳桿菌，從而改善小鼠腸道功能。腸球菌是一種條件性致病菌，可導(dǎo)致院內(nèi)感染和抗生素耐藥。研究報(bào)道通過(guò)體外模擬人升結(jié)腸的糞便接種物培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)芹菜素有效地抑制了腸球菌的生長(zhǎng)，并影響腸球菌中涉及DNA修復(fù)、應(yīng)激反應(yīng)等基因的表達(dá)[40]。雙歧桿菌和乳桿菌是常見的益生菌。研究報(bào)道富含雙歧桿菌和乳桿菌的酸奶可以抑制洛哌丁胺誘導(dǎo)的便秘[41]。雙歧桿菌可增加腸動(dòng)力，可能與其促進(jìn)短鏈脂肪酸（SCFAs）的產(chǎn)生相關(guān)[42]。研究報(bào)道給予便秘小鼠乳桿菌處理，可增加糞便含水量從而達(dá)到通便效果[43]。因此，推測(cè)芹菜素的通便作用可能與促進(jìn)雙歧桿菌和乳桿菌的生長(zhǎng)，從而增加腸動(dòng)力和糞便含水量相關(guān)。當(dāng)然，本研究?jī)H能表明芹菜素對(duì)四種試驗(yàn)菌的調(diào)節(jié)作用，還應(yīng)用16s rRNA測(cè)序等技術(shù)對(duì)便秘小鼠腸道菌群中的其他微生物種群、豐度進(jìn)行分析，進(jìn)一步探究芹菜素調(diào)節(jié)腸道菌群改善便秘的作用機(jī)制。

3 結(jié)論

芹菜素可通過(guò)減少首粒黑便時(shí)間，增加排便粒數(shù)和重量，促進(jìn)腸蠕動(dòng)和增加糞便含水量，對(duì)慢傳輸型便秘小鼠起到通便的作用。芹菜素可能通過(guò)抑制有害菌腸球菌和腸桿菌的過(guò)度生長(zhǎng)，以及扶植有益菌雙歧桿菌和乳桿菌的生長(zhǎng)，改善腸道微生態(tài)環(huán)境，增加腸動(dòng)力和糞便含水量，從而達(dá)到通便的效果。