于智慧，周麗媛，朱迎春

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西太谷 030801）

代謝綜合征（Metabolic syndrome，MetS）是一種流行率較高的常見疾病[1]，由遺傳和環(huán)境多種因素引起，是一組代謝紊亂性疾病的總稱。常見臨床癥狀有高血脂、肥胖癥、胰島素抵抗、慢性炎癥、氧化應(yīng)急、高血壓和二型糖尿病等[2]。隨著人民的生活水平在不斷的提高，MetS的患病率在逐年上升，目前MetS已經(jīng)成為典型慢性疾病的公共健康衛(wèi)生問題。因此，飲食調(diào)控對于MetS的預(yù)防和治療具有重要意義。

我國是雞蛋的生產(chǎn)和消費(fèi)大國，雞蛋不僅營養(yǎng)豐富，而且價格低廉，是人們的日常生活中的重要營養(yǎng)來源。雞蛋蛋黃所含有的膽固醇是人體內(nèi)不可或缺的一種重要營養(yǎng)物質(zhì)。主要參與細(xì)胞膜、各種激素、膽汁酸及維生素D的合成。膽固醇的含量與人體的健康狀況直接相關(guān)，過高會導(dǎo)致動脈硬化并誘發(fā)一些綜合并發(fā)癥，過低易導(dǎo)致血管壁脆性增加，導(dǎo)致人體免疫力和應(yīng)急能力降低[3]。在過去研究中，雞蛋以其高膽固醇含量受到人們飲食限制，然而近些年許多國外研究表明蛋黃攝入可調(diào)控脂質(zhì)代謝紊亂。研究表明，健康人群食用雞蛋可改善血清高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）功能，增加血漿類胡蘿卜素含量并維持低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）與高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein cholesterol，HDL-C）比率[4,5]。此外，Lemos等[6]研究表明健康人每日食用3枚雞蛋可有效提高血清HDL-C含量，但對于LDL-C/HDL-C比率無顯著影響。Shin等[7]研究表明，每日攝入雞蛋能夠提高M(jìn)etS患者血清中HDL-C含量水平，并提高對膽固醇的運(yùn)載能力。同時，在超重和肥胖成年男性中進(jìn)行的研究表明，12周適度限制碳水化合物的飲食下，每日食用3個雞蛋不會影響血漿LDL-C。較不含膽固醇的雞蛋攝入組相比，蛋黃攝入可有效提高血漿HDL-C含量[8]。

然而，目前對于蛋黃攝入對于MetS的影響研究較少。蛋黃對MetS的作用機(jī)理不清楚。因此，探究雞蛋蛋黃對于人體的作用和影響對于人們?nèi)粘ｏ嬍尘哂兄匾闹笇?dǎo)意義。基于以上，本實(shí)驗通過高脂飼料建立MetS小鼠模型，實(shí)驗周期為60 d，比較探究全蛋（EGG）攝入與去蛋黃（SUB）攝入對MetS血脂代謝的影響。同時，洛伐他汀類藥物在MetS治療中應(yīng)用具有廣泛的積極作用，能夠改善患者血脂指標(biāo)和心功能，提高整體的治療效果，因此，本實(shí)驗設(shè)置諾伐洛伐藥物作為陽性對照組。在實(shí)驗周期中定期測定小鼠體重、攝食，在實(shí)驗?zāi)┢跍y定主要臟器指標(biāo)（心臟、肝臟、脾臟、腎臟和附睪脂肪組織），通過對血脂相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)測定，比較EGG和SUB攝入對MetS小鼠脂代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

原料：C57BL/6雄性小鼠40只、普通飼料（D12450B）、高脂飼料（D12492）、全蛋粉墊料購買于北京斯貝福生物技術(shù)有限公司，合格證號：NO.110324200102532878，動物許可證號：SCXK(京) 2019-0010。其中去蛋黃代替物粉（SUB）由（99%蛋清），1%的瓜爾豆膠和黃原膠，0.01%的β-胡蘿卜素組成，含有0 mg的膽固醇。

主要試劑：TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT及AST、SOD、MDA檢測試劑盒和總蛋白定量測定試劑盒（BCA法）購買于南京建成生物工程研究所。洛伐他?。↙ov）購買于北京萬生藥業(yè)有限公司。

1.2 主要儀器與設(shè)備

SRH高壓均質(zhì)機(jī)，上海申鹿均質(zhì)機(jī)有限公司；SPectraMax i3x多功能酶標(biāo)儀，美國Molecular Devices；小鼠用灌胃針12號，北京中科恒天科技有限公司；BSM電子分析天平，江蘇灼卓精密儀器有限公司；BC/BD-20ZHT冷凍冰箱，青島海爾特種電冰柜有限公司；BTP-8Z冷凍干燥機(jī)，SP Scientific公司；WFJT200可見分光光度計，尤尼柯儀器有限公司。

1.3 試驗設(shè)計

實(shí)驗經(jīng)山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物實(shí)驗倫理委員會批準(zhǔn)，符合動物實(shí)驗倫理。選擇40只C57BL/6雄性小鼠作為實(shí)驗對象，體重24.5～26 g之間，飼養(yǎng)于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院小鼠屏障房內(nèi)，進(jìn)行一周的適應(yīng)性實(shí)驗。將小鼠放于層流架中喂養(yǎng)，采用12 h采光/12 h暗室采光循環(huán)條件，控制動物房溫度21～23 ℃之間，相對濕度在40%，隨機(jī)分配，分成五組，每組8只，分別為普通飼料組（ND）、高脂飼料洛伐他汀組（Lov）、高脂飼料組（HFD）、高脂飼料去蛋黃雞蛋代替物組（SUB）、高脂飼料全蛋組（EGG）。灌胃劑量按照60 kg成年人每日食用3個雞蛋（50 g雞蛋干重）的劑量為0.83 mg/g，按照小鼠劑量=人的劑量×9.1換算成小鼠的劑量為7.55 mg/g。ND、HFD組每天灌胃等量生理鹽水Lov組每天灌胃生理鹽水0.4 mL，在實(shí)驗結(jié)束前十天，變更灌胃藥品，Lov的劑量為0.3 mg/g。小鼠每天自由攝食，每3 d對飼料和小鼠進(jìn)行稱重，計算小鼠攝食量和體重變化。

1.4 試驗方法

1.4.1 樣本采集

1.4.1.1 血清收集

實(shí)驗結(jié)束前小鼠禁食12 h。通過摘取小鼠眼球眼眶處取血，隨后脊椎脫臼法處死小鼠。血液收集于離心管中，40 ℃靜止3 h后，將血樣在3000 r/min，于4 ℃離心10 min，上層血清保存于-80 ℃冰箱中。

1.4.1.2 臟器收集

用棉球蘸取少許醫(yī)用酒精來擦小鼠身體，切開腹腔，分別取出小鼠肝臟、腎臟、心臟脾及附睪脂肪，觀察肝臟形態(tài)，將肝臟立即放置液氮中保存，并轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱中保存用于生化指標(biāo)測定。

1.4.2 指標(biāo)測定

1.4.2.1 臟器指數(shù)的測定

取小鼠肝組織、腎組織、脾組織、心臟組織以及附睪脂肪組織用生理鹽水洗凈，用濾紙擦干后稱重，并且計算相關(guān)臟器指數(shù)[9]。

1.4.2.2 血脂及肝脂指標(biāo)的測定

血清和肝臟中的高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、甘油三脂（Triglycerides，TG）和總膽固醇（Total cholesterol，TC）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定，具體操作步驟根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4.2.3 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）及丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）指標(biāo)的測定

血清和肝臟中的AST及ALT測定參考南京建成生物工程研究所試劑盒說明書利用分光光度法進(jìn)行測定[10]。

1.4.2.4 肝臟超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）及丙二醛（malondialdehyde，MDA）指標(biāo)的測定

用分析天平準(zhǔn)確稱量0.20 g肝臟組織，按照重量體積比為1:9的比例加入事先準(zhǔn)備好的PBS溶液（0.01 mol/L），利用組織勻漿機(jī)進(jìn)行充分研磨，制備含量為10%的組織勻漿液，根據(jù)南京建成生物工程研究所試劑盒的操作步驟，分別測定肝臟組織勻漿中的MDA和SOD活力[11]。

1.4.2.5 小鼠肝臟及脂肪組織切片分析

用10%甲醛溶液固定肝臟及附睪脂肪組織后沖洗24 h，并用不同濃度梯度的乙醇脫水。二甲苯透明，浸蠟包埋后切片，厚度為5 μm，經(jīng)HE染色后，在顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗均重復(fù)三次，結(jié)果表示為：平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。用Microsoft Excel 2016計算各個指標(biāo)的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差；測定結(jié)果用使用SPSS 26.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，p＜0.05為顯著性差異，p＜0.01為極顯著性差異；利用Origin 8.6進(jìn)行作圖分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 EGG及SUB對MetS小鼠攝食和體重的影響

在實(shí)驗開始初期，各組小鼠攝食量均出現(xiàn)降低增加交替的現(xiàn)象，這是由于初期灌胃小鼠產(chǎn)生的應(yīng)急反應(yīng)造成的。由圖1a可知，小鼠攝食量范圍在1.81～3.85 g之間，HFD組攝食量顯著低于ND組（p＜0.01），原因為高脂飼料為小鼠提供的能量（5.24 kcal/g）比普通飼料（3.85 kcal/g）多，進(jìn)而減少小鼠的攝食量。在實(shí)驗周期后10 d后，EGG和SUB組小鼠的攝食量顯著低于HFD組（p＜0.05）。由圖1b可知，為期60 d的飼養(yǎng)實(shí)驗中，小鼠的體重從24.51～26.02 g增加到26.51～32.52 g，各組小鼠總體呈現(xiàn)穩(wěn)定增長趨勢。這表明高脂飲食能夠引起小鼠體重異常增長，這與高脂誘導(dǎo)小鼠肥胖的研究一致[12]。同時HFD組小鼠體重的增加量顯著高于EGG等其他組小鼠體重增加量，表明EGG比SUB能更顯著抑制HFD引起小鼠體重異常增長[13]。

2.2 EGG及SUB對MetS小鼠主要臟器指數(shù)的影響

由圖2a可知，ND組小鼠心臟指數(shù)最高為0.75，Lov組最低為0.62，EGG組小鼠的心臟指數(shù)顯著高于HFD組（p＜0.05）。由圖2b可得，HFD組小鼠腎臟指數(shù)最低為1.27，EGG組和SUB組都顯著高于HFD組（p＜0.05），EGG組和SUB組的腎臟指數(shù)無顯著差異（p＞0.05），實(shí)驗說明，HFD能引起小鼠腎損傷，而EGG和SUB能顯著改善由HFD引起腎臟指數(shù)下降的結(jié)果，對高脂飲食導(dǎo)致的腎損傷具有一定的修護(hù)作用[14]。

脾臟是機(jī)體內(nèi)重要的淋巴器官，其指數(shù)可以反映機(jī)體的免疫能力的強(qiáng)弱，指數(shù)越大，則表明機(jī)體的免疫能力越強(qiáng)[15]。由圖2c可知，EGG組顯著高于HFD組和SUB組（p＜0.05），而SUB組HFD組脾臟指數(shù)無顯著差異（p＞0.05），數(shù)據(jù)表明EGG組在一定程度上提高了小鼠的免疫系統(tǒng)抵抗能力，而SUB對于脾臟指數(shù)無明顯作用效果。如圖2d可得，ND組小鼠肝臟指數(shù)均顯著高于高脂各組，且高脂各組間無顯著差異（p＞0.05）。由圖2e可知，ND組小鼠附睪脂肪指數(shù)最低為0.88，HFD組最高為3.65。EGG組和SUB組顯著低于HFD組（p＜0.05），而SUB組顯著高于EGG組（p＜0.05）。這與表明，EGG攝入較SUB能更加顯著降低由HFD引起的機(jī)體附睪脂肪的積累。Yu等人[16]基于脂質(zhì)組學(xué)分析長期食用蛋黃對高脂飲食小鼠的高脂血癥的影響，發(fā)現(xiàn)，蛋黃攝入可顯著降低肥胖小鼠腹部脂肪積累，這與本研究結(jié)果相一致。

2.3 EGG及SUB對MetS小鼠血脂及肝脂的影響

研究表明，臨床診斷中，通過血脂血清學(xué)指標(biāo)的檢測有助于明確脂肪肝疾病診斷，對及早確診和接受治療，具有良好促進(jìn)作用[17]，血脂中重要的指標(biāo)如HDL-C、LDL-C、TC、TG與MetS等疾病的相關(guān)性已經(jīng)得到證實(shí)[18]。LDL-C是膽固醇向肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)的主要載體工具，其含量與心血管疾病的發(fā)病率及病變程度相關(guān)，被認(rèn)為是動脈粥樣硬化的主要致病因子[19]。HDL-C主要是將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，由膽汁排出體外，其含量的高低與動脈粥樣硬化的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)[20]。由圖3a和3b可知，HFD組LDL-C含量最高為1.13 mmol/L，ND組最低為0.54 mmol/L。EGG組和SUB組LDL-C含量顯著低于HFD組（p＜0.05），為HFD的74.51%。同時，HFD顯著抑制了血清中HDL-C水平，而EGG能顯著改善由HFD引起的不良后果，使得血清中HDL-C上升到正常水平，而SUB對于MetS小鼠血清中HDL-C無顯著作用，這與之前的研究一致[21]。Christopher等[22]研究發(fā)現(xiàn)，較去蛋黃雞蛋替代物，食用全蛋可改善代謝綜合征患者脂蛋白分布，表現(xiàn)為增加LDL-C含量及HDL粒徑，增強(qiáng)血清HDL運(yùn)載膽固醇的能力，這與本研究結(jié)果相一致。圖3c和3d為血清TC和TG水平，與ND組（3.80 mmol/L）相比，HFD組（6.52 mmol/L）血清中TC含量顯著升高（p＜0.05），EGG組（5.02 mmol/L）和SUB組（5.37 mmol/L）的TC含量顯著低于HFD組（p＜0.05），EGG組和SUB組無顯著差異（p＞0.05）。由圖3d可知，EGG組TG（0.64 mmol/L）含量顯著高于HFD組（0.55 mmol/L）和SUB組（0.57 mmol/L）水平（p＜0.05）。圖3e和3f為肝臟TC和TG水平，EGG和SUB均可降低肝臟中TC、TG含量，SUB肝臟TC和TG含量更低，分別為0.11 mmol/L和0.42 mmol/L。Samantha等[23]表明食用全蛋可有效抑制2型糖尿病大鼠TG濃度，與酪蛋白相比，食用全蛋飲食導(dǎo)致大鼠血漿TG濃度降低52%。同時，Lisa等[24]研究發(fā)現(xiàn)，與SUB飲食相比，食用EGG可增加超重婦女膽固醇外排能力，對膽固醇代謝具有積極作用。這表明，EGG顯著抑制血清和肝臟中TC水平，然而對血清TG并沒有產(chǎn)生改善作用。

2.4 各組小鼠血清及肝臟ALT和AST水平變化

由圖4a～c可知，與ND相比，HFD組血清ALT和AST水平顯著升高（p＜0.05），EGG和SUB能夠顯著降低MetS小鼠血清AST水平。盡管EGG組ALT水平較HFD增加了0.42倍，然而EGG可顯著下調(diào)AST/ALT比例。由圖4d～e可知，相比于HFD組，EGG和SUB均可顯著降低肝臟AST、ALT和AST/ALT比值，其中EGG組AST、ALT和AST/ALT比值分別為HFD組的44.99%、54.79%和81.74%。據(jù)有關(guān)研究證明，ALT以及AST作為評價肝功能的重要指標(biāo)，ALT主要存在于肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，而AST主要存在于肝細(xì)胞的線粒體中，受到細(xì)胞膜包被，正常情況下，ALT和AST不會在血液當(dāng)中，然而，當(dāng)肝臟組織發(fā)生破損或出現(xiàn)炎癥時，細(xì)胞膜的通透性就會發(fā)生改變，會引起血清中AST和ALT水平上升。AST/ALT比值上升常見于重型肝炎、肝硬化、肝癌及酒精性肝病等肝臟疾病，AST/ALT比值隨著肝臟病變的加重而逐漸升高[25]。這表明EGG和SUB對高脂飲食引起的肝臟組織破損和炎癥的發(fā)生有一定的改善作用。雞蛋蛋黃中含有豐富的卵磷脂，蛋黃中的卵磷脂具有顯著的抗氧化能力，研究表明攝入蛋黃卵磷脂可有效降低肝臟中ALT及AST水平，這解釋了相對于SUB，EGG更能緩解由于高脂飲食而引起的肝損傷[26]。

2.5 各組小鼠肝臟SOD和MDA水平變化

MetS常伴隨著肝臟脂肪過度積累。肝臟氧化應(yīng)激、肝臟脂質(zhì)失調(diào)和促炎細(xì)胞因子的協(xié)同作用會導(dǎo)致肝臟脂肪堆積，并促進(jìn)MetS發(fā)生[27]。史雅凝[28]研究表明，肝臟中包含的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）等是重要的抗氧化酶，可以作為評價人體氧化還原狀態(tài)的重要指標(biāo)，可作為檢測MetS疾病相關(guān)的抗氧化指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食可引起肝組織SOD使機(jī)體的抗氧化損傷的防御機(jī)制受損不能清除過多的自由基而導(dǎo)致肝損傷[29]。由圖5a可知，HFD組SOD酶活水平顯著高于其他組，是ND組SOD酶活水平的1.64倍（p＜0.05），EGG組和SUB組的SOD酶活水平均顯著低于HFD組（p＜0.05），分別為HFD組的75.10%和62.26%。

MDA含量是反映機(jī)體潛在抗氧化能力的重要參數(shù)，它能反映脂質(zhì)過氧化速率和強(qiáng)度，間接反映組織過氧化損傷的程度，其含量與組織氧化程度呈正比[30]。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)肝臟組織中脂質(zhì)含量過高時，會導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化反應(yīng)加劇，使過氧化產(chǎn)物MDA增加，而MDA可與線粒體結(jié)合形成希夫氏堿化合物，使線粒體膜的流動性下降，干擾脂肪酸β-氧化，使脂肪在肝內(nèi)積累，造成肝臟結(jié)構(gòu)和功能損害[31]。由圖5b可知，與HFD組相比，EGG（0.81 nmol/mg prot）和SUB組（0.63 nmol/mg prot）MDA酶活含量水平顯著低于HFD組（2.03 nmol/mg prot）水平（p＜0.05），EGG組和SUB組組無顯著差異（p＞0.05）。這表明，EGG和SUB都能顯著抑制小鼠肝臟內(nèi)過氧化，抑制機(jī)體炎癥的發(fā)生，SUB對調(diào)控肝氧化作用顯著高于EGG。相似的結(jié)果在之前研究中也報道過[24]。

2.6 各組小鼠病理學(xué)觀察

機(jī)體中的肝臟是進(jìn)行脂質(zhì)代謝的主要場所，MetS常常伴隨著肝臟脂質(zhì)代謝系統(tǒng)紊亂，從而誘發(fā)肝臟脂肪過度積累，肝細(xì)胞中脂肪發(fā)生變性等肝臟疾病[32]。圖6a為各組小鼠的肝臟形態(tài)，ND組小鼠肝臟顏色鮮艷紅亮，表面有明亮光澤，質(zhì)地較軟。HFD組小鼠肝臟顏色顏色呈現(xiàn)紅色略帶黃色，質(zhì)地稍微偏硬，在肝臟的表面帶有脂肪顆粒，呈現(xiàn)病變狀態(tài)，表明模型構(gòu)建成功，與王寧等[33]研究結(jié)果一致。EGG組、SUB組和Lov組的肝臟表面顏色呈現(xiàn)紅色略帶黃色，其中EGG組肝臟表面略帶光澤，并且沒有脂肪的積累，不帶有脂肪顆粒，而SUB組肝臟組織表面有輕微的脂肪顆粒，較HFD組數(shù)量較少。

觀察圖6b肝臟組織切片，發(fā)現(xiàn)ND組小鼠肝臟組織的表面結(jié)構(gòu)完整清晰，肝細(xì)胞之間的界限清楚，細(xì)胞外形向周圍呈現(xiàn)放射形態(tài)，細(xì)胞核清晰位于細(xì)胞中央，沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞炎癥或細(xì)胞壞死等現(xiàn)象。HFD組小鼠肝細(xì)胞具有一定程度的脂肪變性，排列結(jié)構(gòu)是不規(guī)則的，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的脂滴溶解后的空泡且大小不一致。在EGG組和SUB組中，脂滴空泡的分布較少。實(shí)驗表明EGG組和SUB能夠在一定程度上抑制肝組織中脂肪的積累，并且EGG能夠顯著降低肝細(xì)胞中脂解空泡的形成。相關(guān)實(shí)驗研究表明HFD可引起的TG儲存增加會導(dǎo)致脂肪細(xì)胞的體積增大，脂肪細(xì)胞體積的增大是MetS主要特征[34]。觀察圖6c得知，ND組小鼠附睪脂肪細(xì)胞體積小、結(jié)構(gòu)完整、形態(tài)清晰，HFD組小鼠附睪脂肪細(xì)胞與ND組相比，體積顯著增大。EGG組、SUB組小鼠脂肪細(xì)胞大小相對于HFD組明顯變小，Lov組脂肪細(xì)胞最小。實(shí)驗說明，HFD能夠引起肝臟組織中脂肪細(xì)胞增大，EGG和SUB攝 入都顯著減小了附睪脂肪細(xì)胞體積。

3 結(jié)論

本研究建立為期60 d的MetS小鼠模型，研究EGG和SUB攝入對MetS小鼠血脂以及酶水平相關(guān)指標(biāo)。EGG和SUB能緩解高脂飲食所導(dǎo)致的脂質(zhì)代謝紊亂，主要表現(xiàn)在降低小鼠的體重、攝食量。EGG和SUB都顯著抑制了由HFD引起的肝臟中SOD、AST、ALT以及MDA酶活上升，降低了肝臟中TC和TG的積累。相比于SUB組，EGG攝入能夠顯著降低血清TC和TG，LDL-C，同時顯著提高血清HDL-C。組織病理學(xué)顯示，與HFD組相比，EGG和SUB攝入具有減少肝臟脂肪空泡的功能，對高脂飲食引起的脂代謝紊亂有良好的預(yù)防作用。