羅丹，黃云，羅敏，羅強(qiáng)，劉杰，李玉英

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸科，四川瀘州 646000）

（2.深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)部過(guò)敏反應(yīng)與免疫學(xué)研究所，廣東深圳 518000）

研究顯示，哮喘發(fā)病率及死亡率在全球范圍內(nèi)呈明顯升高趨勢(shì)，預(yù)計(jì)未來(lái)10年，因哮喘導(dǎo)致的死亡率會(huì)增加20%，而哮喘患者病情不能得到有效控制是重要的誘因之一[1]。在誘發(fā)哮喘的諸因素中，大氣污染物不僅能誘發(fā)、加重哮喘、過(guò)敏性鼻炎和急性支氣管炎，對(duì)肺功能也會(huì)造成嚴(yán)重的損傷[2,3]。苯并芘（Benzo (a) pyrene，BaP）是多環(huán)芳烴化合物，是一種典型的環(huán)境污染物。BaP來(lái)源廣泛，包括香煙煙霧、熏烤油炸食品、工業(yè)廢水以及受污染的大氣等[4]。隨著工業(yè)化進(jìn)程的推進(jìn)，城市大氣污染狀況的加重與呼吸道疾病，尤其是哮喘的發(fā)病率有著直接的關(guān)系[5]。

中藥應(yīng)用于哮喘的臨床治療，具有改善哮喘癥狀、提高哮喘患者肺功能以及減輕呼吸道炎癥的作用。人參（Panax ginsengC.A.Mey）是五加科、多年生草本植物，具有改善心功能及提高免疫力的功效[6,7]。目前，關(guān)于人參的研究多集中于生物活性較佳的人參皂苷及人參多糖[8]。其中，人參皂苷的主要藥理作用為改善微循環(huán)[9]、提高組織抗缺氧能力、抑制血小板聚集[10]、Ca2+拮抗作用、影響前列腺素（PGs）代謝[11]、抗腫瘤[12]、抗衰老等[13]。在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中人參葉多是被丟棄部分，但作為人參植物的一部分，研究發(fā)現(xiàn)人參葉中也含有多種生物活性成分，并具有抗疲勞、抗高血糖、抗肥胖、抗衰老等作用[14]。但人參葉中的酚類成分的抗炎作用卻鮮有報(bào)道。因此，本文將對(duì)人參葉中的多酚類活性成分進(jìn)行分離、鑒定，并對(duì)其抗BaP誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞損傷活性進(jìn)行研究。本研究對(duì)人參葉有效利用及其中含有的生物活性成分應(yīng)用于哮喘的臨床治療具有重要的指導(dǎo)意義。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

新鮮人參葉購(gòu)于廣州市石牌區(qū)二天堂大藥房，由暨南大學(xué)藥學(xué)院陳河如教授鑒定；文中使用的檢測(cè)試劑盒、RIPA緩沖液和RNase購(gòu)于碧云天生物科技有限公司（上海）；16HBE細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)（上海）；抗體購(gòu)于Cell Signaling（CST，USA）；其它化學(xué)品均購(gòu)于Sigma或Adamas。

KQ-250B超聲波提取器，昆山市超聲波儀器有限公司；Hei-VAP Core ML G3 XL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購(gòu)于德國(guó)海道夫公司；Agilent 1100半制備型高效液相色譜儀購(gòu)于美國(guó)安捷倫公司。

1.2 人參葉有效成分提取和分析

人參葉酚類成分的提取按照前述方法[15]進(jìn)行，即通過(guò)超聲提取法對(duì)新鮮人參葉（1.92 kg）酚類活性成分進(jìn)行提取，以水/二氯甲烷（1:1）為提取劑，料液比1:20（m/V，g/mL）萃取，并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)提取藥液濃縮，得人參葉提取物浸膏（87 g）。將二氯甲烷組分（8.25 g）硅膠柱層析，用乙酸乙酯-甲醇梯度體系（100:1、10:1、1:1、0:1）洗脫，得到4個(gè)組分?；贐aP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞損傷模型，評(píng)價(jià)以上4個(gè)組分的保護(hù)活性，活性最佳部分用于后續(xù)分離。將組分1（1.24 g）置于硅膠柱上，用二氯甲烷/甲醇溶劑體系（100:5、20:1、1:1、0:1）梯度洗脫，得5個(gè)亞組分?；贐aP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞損傷模型，評(píng)價(jià)以上5個(gè)組分的保護(hù)活性，活性最佳部分用于后續(xù)分離。組分2（0.71 g）采用半制備型高效液相色譜法（甲醇-水，40:60；流速：3 mL/min），得到GLP-1（tR 5.2 min）、GLP-4（tR 7.8 min）和GLP-11（tR 11.3 min）；組分4（0.88 g）采用半制備型高效液相色譜法（甲醇-水，30:70；流速：3 mL/min），得到GLP-2（tR 12.2 min）、GLP-5（tR 15.5 min）和GLP-9（tR 19.4 min）；組分5（0.95 g）采用半制備型高效液相色譜法（甲醇-水，50:50；流速：3 mL/min），得到GLP-3（tR 7.8 min）、GLP-6（tR 11.3 min）、GLP-7（tR 17.3 min）、GLP-8（tR 22.5 min）和GLP-10（tR 29.0 min）；進(jìn)一步的GLP-1～11的結(jié)構(gòu)通過(guò)1H-NMR、13C-NMR和ESI-MS進(jìn)行分析鑒定。

本項(xiàng)目分析儀器使用ACQUITY UPLC系統(tǒng)聯(lián)合和Q Exactive HF混合四極桿Orbitrap，并帶有ESI離子源和Orbitrap質(zhì)量分析儀。質(zhì)譜儀以35000質(zhì)量分辨率（200m/z）運(yùn)行，配備C18色譜柱（UPLC BEH C18，2.1×100 mm，1.7 mm；Waters）結(jié)合使用。梯度洗脫所用的流動(dòng)溶液為水和甲醇，其中含有0.05%的全氟戊酸（PFPA）和0.1%的FA。柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量5 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流速0.4 mL/min。質(zhì)譜掃描范圍設(shè)置為70～1000m/z。在正離子和負(fù)離子模式下，MS毛細(xì)管溫度均為350 ℃。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞活性檢測(cè)

按參考文獻(xiàn)[16]所述方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，即將人支氣管上皮（16HBE）細(xì)胞培養(yǎng)于10%胎牛血清（FBS）、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素、2 mmol/L谷氨酰胺等配置的Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）培養(yǎng)基中（37°C，5% CO2）。

GLPs對(duì)16HBE細(xì)胞的保護(hù)活性采用CCK8試劑盒測(cè)定：16HBE細(xì)胞（1×104cells/孔）接種到含有200 μL培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，過(guò)夜。細(xì)胞經(jīng)BaP（1.00 μmol/L）暴露2.0 h后，冷磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗2遍，再加入含有5 μg/mL GLPs的培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h，CCK8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力。

1.4 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）和炎癥細(xì)胞因子檢測(cè)

ROS和炎癥細(xì)胞因子（IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6）檢測(cè)分別按照相應(yīng)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行：16HBE細(xì)胞（5×105cells/孔）接種于6孔板，過(guò)夜；BaP（1 μm）暴露2 h，冷PBS清洗2遍，再加入含有GLP-8（5 μg/mL、25 μg/mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h。據(jù)檢測(cè)試劑盒要求，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)ROS和炎癥細(xì)胞因子含量。

1.5 線粒體跨膜電位（ΔΨm）及細(xì)胞凋亡檢測(cè)

按照參考文獻(xiàn)進(jìn)行線粒體跨膜電位檢測(cè)，即16HBE細(xì)胞（5×105cells/孔）接種于6孔板，過(guò)夜；然后BaP（1 μmol/L）暴露2 h，冷PBS清洗2遍，加入含有GLP-8（5 μg/mL、25 μg/mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h，收集細(xì)胞，冷PBS洗滌。室溫，加入含有1 μg/mL JC-1染液孵育30 min。棄上清液，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)[18]。

按照參考文獻(xiàn)進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)，即16HBE細(xì)胞（5×105cells/孔）接種于6孔板，過(guò)夜；然后BaP（1 μmol/L）暴露2 h，冷PBS清洗2遍，加入含有GLP-8（5 μg/mL、25 μg/mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h，收集細(xì)胞Annexin V-FITC/PI孵育，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞狀態(tài)[17]。

1.6 Western blotting實(shí)驗(yàn)

16HBE細(xì)胞（3×106cells/皿）接種于10 cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)過(guò)夜；BaP（1 μmol/L）暴露2 h，冷PBS清洗2遍，加入含有GLP-8（5 μg/mL、25 μg/mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h，收集細(xì)胞，采集總蛋白，用Bradford蛋白測(cè)定法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。參考文獻(xiàn)進(jìn)行Western blotting蛋白分析[18]。利用Image J軟件對(duì)蛋白密度進(jìn)行分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

用Graphpad Prism 5（San Diego，USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；通過(guò)Student'st-檢驗(yàn)進(jìn)行對(duì)照和治療之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。所有實(shí)驗(yàn)至少進(jìn)行3次；數(shù)據(jù)表示為平均值（mean）±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差（SD）；p＜0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 人參葉酚類化合物的分離及鑒定

經(jīng)活性追蹤及多種色譜分離方法共分離鑒定出11個(gè)人參葉酚類化合物（圖1）分別為GLP-1（Oligophculatin A）、GLP-2（Oligophculatin B）、GLP-3（Oligophculatin C）、GLP-4（Oligophculatin D）、GLP-5（Oligophculatin E）、GLP-6（Oligophculatin F）、GLP-7（Albaspidin AP）、GLP-8（Albaspidin AA）、GLP-9（Albaspidin AB）、GLP-10 （Methylene-bis-phlorobutyrophenone）、GLP-11（1-[3-[(3-acetyl-2,4,6-trihydroxyphenyl)methyl]-2,4,6-t rihydroxyphenyl] butanone）。其中，GLP-1～11均為首次從人參葉中分離獲得。

參考相關(guān)文獻(xiàn)[19]，通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)得GLP-1～11的純度＞98.0%。

?

?

2.2 人參葉酚類化合物保護(hù)活性評(píng)價(jià)

用不同濃度的GLPs最終化合物的純品（0.01～5.00 mg/mL）處理16HBE細(xì)胞24 h，并通過(guò)CCK8測(cè)定細(xì)胞活力以測(cè)定GLPs自身細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組相比，GLPs在低于3.60 mg/mL時(shí)，16HBE細(xì)胞活力均無(wú)顯著性差異。

與空白對(duì)照組（細(xì)胞存活率設(shè)為100%）相比，BaP暴露使16HBE細(xì)胞活力降低19.70%，由此說(shuō)明BaP暴露對(duì)細(xì)胞造成了一定的損傷，進(jìn)而使其細(xì)胞活力降低。而與BaP組相比，經(jīng)GLPs處理后16HBE細(xì)胞活力升高。其中，GLP-8組16HBE細(xì)胞活力提升最為顯著；與BaP組相比，16HBE細(xì)胞活力提升13.90%（表3）。由此得出，GLPs可減輕BaP暴露導(dǎo)致的16HBE細(xì)胞損傷，進(jìn)而發(fā)揮保護(hù)活性。基于GLP-8具有最佳抗BaP暴露誘導(dǎo)的損傷活性，進(jìn)而以GLP-8為代表，研究其潛在的分子作用機(jī)制。

表3 GLP-1～11增強(qiáng)人氣道上皮細(xì)胞（16HBE）抗Bap暴露導(dǎo)致的損傷活性 Table 3 GLP-1~11 enhance protective activity of 16HBE cells against Bap-exposure induced cell viability decline

2.3 GLP-8抑制BaP暴露導(dǎo)致的16HBE細(xì)胞氧化應(yīng)激

自由基活性氧（Reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生過(guò)剩或抗氧化能力下降會(huì)誘發(fā)DNA損傷和DNA損傷修復(fù)反應(yīng)及細(xì)胞凋亡[20]。研究報(bào)道，BaP能夠作用于人支氣管上皮細(xì)胞、肺泡組織使谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性降低，誘發(fā)ROS及MDA含量升高，進(jìn)而導(dǎo)致氧化應(yīng)激，損傷人支氣管上皮細(xì)胞及肺泡組織[21]。因此，減少ROS的生成是減輕氧化損傷的一種重要策略。如圖2a所示，BaP暴露顯著誘導(dǎo)了16HBE細(xì)胞ROS的生成，與空白對(duì)照組相比，BaP組ROS含量升高247%。GLP-8處理后，BaP誘導(dǎo)的ROS含量升高被顯著抑制，ROS含量分別降低19.30%（5 μg/mL）和41.30%（25 μg/mL）?；诖丝赏茰y(cè)人參葉多酚類化合物可能是通過(guò)抑制BaP暴露導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)ROS過(guò)量產(chǎn)生，抑制氧化應(yīng)激發(fā)揮保護(hù)活性的。

細(xì)胞凋亡線粒體途徑在細(xì)胞氧化應(yīng)激過(guò)程中起著重要作用[22]。為研究GLP-8減輕BaP誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷的潛在機(jī)制，進(jìn)一步檢測(cè)了16HBE細(xì)胞ΔΨm的變化情況。如圖2b所示，與空白對(duì)照組相比（4.46%），BaP暴露使16HBE細(xì)胞ΔΨm顯著下降13.33%。而經(jīng)GLP-8共培養(yǎng)后，ΔΨm下降被顯著抑制，BaP暴露誘導(dǎo)的ΔΨm分別下降7.87%（5 μg/mL）和4.46%（5 μg/mL）。GLP-8能夠減少BaP暴露導(dǎo)致的16HBE細(xì)胞內(nèi)ROS積累并抑制BaP暴露導(dǎo)致的16HBE細(xì)胞ΔΨm下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，GLP-8可能通過(guò)抑制BaP暴露導(dǎo)致的氧化應(yīng)激發(fā)揮保護(hù)16HBE細(xì)胞作用。

線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔（Mitochondrial Permeability Transition Pore，MPTP）是位于線粒體內(nèi)外膜之間由多個(gè)蛋白質(zhì)組成的復(fù)合通道。其中，Bcl-2家族相關(guān)蛋白能夠調(diào)控MPTP。其次細(xì)胞內(nèi)Ca2+，ROS等也可能直接或間接參與MPTP的調(diào)控[23]。MPTP開(kāi)放導(dǎo)致線粒體基質(zhì)內(nèi)的高滲透壓可能使基質(zhì)腫脹導(dǎo)致外膜破裂，釋放出細(xì)胞色素C（Cytochrome C，Cyt c）。而Cyt c從線粒體釋放到細(xì)胞漿會(huì)降低細(xì)胞抗氧化能力，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞凋亡[24]。本實(shí)驗(yàn)中，BaP暴露顯著誘導(dǎo)了Cyt c從線粒體釋放到胞質(zhì)中（圖2c）。而GLP-8顯著抑制了BaP暴露導(dǎo)致的Cyt c從線粒體到胞質(zhì)的釋放。Bcl-2家族蛋白對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控至關(guān)重要，其中抗凋亡蛋白（Bcl-2）和促凋亡蛋白（Bax）的比例是調(diào)控MPTP，決定細(xì)胞凋亡進(jìn)程的關(guān)鍵調(diào)控因素[23]。因此，本文檢測(cè)了GLP-8對(duì)BaP暴露導(dǎo)致的Bcl-2家族蛋白（Bcl-2和Bax）表達(dá)變化的影響。如圖2c所示，BaP暴露導(dǎo)致的Bcl-2下調(diào)及Bax表達(dá)上調(diào)，Bcl-2/Bax比例降低。而GLP-8處理后，BaP暴露導(dǎo)致的Bcl-2/Bax比例降低被顯著扭轉(zhuǎn)，這些結(jié)果表明GLP-8可通過(guò)線粒體信號(hào)途徑減輕BaP暴露導(dǎo)致的16HBE細(xì)胞氧化應(yīng)激。

2.4 GLP-8抑制BaP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞炎癥因子分泌

研究報(bào)道，BaP暴露能夠促進(jìn)Der f 1誘導(dǎo)的上皮細(xì)胞因子釋放，進(jìn)而加重對(duì)氣道上皮細(xì)胞的損傷[16]。接下來(lái)，本文研究了BaP暴露是否能誘導(dǎo)上皮細(xì)胞因子的產(chǎn)生，以及GLP-8是否能抑制這種反應(yīng)。16HBE細(xì)胞BaP暴露后，ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6含量顯著升高（圖3）；與空白對(duì)照組相比，BaP暴露使IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6含量分別升高247%、67.90%、62.70%及103.20%。相反的，GLP-8抑制了BaP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞上皮細(xì)胞因子IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6的過(guò)表達(dá)。與BaP暴露組相比，GLP-8（25 μg/mL）使IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6的分泌減少60.10%、28.90%、33.50%及41.90%。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，GLP-8可能是通過(guò)抑制BaP暴露導(dǎo)致的炎癥細(xì)胞因子發(fā)揮保護(hù)功能的。

2.5 GLP-8抑制BaP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡形式，在細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)會(huì)發(fā)生顯著的變化，如細(xì)胞收縮、核碎裂和染色質(zhì)凝聚等[25]。本實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組（細(xì)胞總凋亡率為7.80%）相比，BaP暴露使細(xì)胞凋亡顯著增加（BaP組，細(xì)胞總凋亡率為24.50%）。而與BaP暴露組相比，GLP-8治療組細(xì)胞凋亡率分別降低5.80%和9.30%（圖4）。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)為GLP-8抑制BaP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞損傷提供了進(jìn)一步的證據(jù)。

2.6 GLP-8抑制BaP誘導(dǎo)的芳基烴受體（AhR）活化及核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體激活

研究報(bào)道，芳基烴受體（AhR）活化在BaP加重塵螨誘發(fā)的過(guò)敏性哮喘患者炎癥細(xì)胞因子IL-33、IL-25和胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP）的過(guò)表達(dá)中具有十分重要的作用[17]。為了檢測(cè)GLP-8能否抑制BaP暴露誘導(dǎo)的AhR活化，本文檢測(cè)了AhR及其下游主要蛋白細(xì)胞色素P450亞酶1A1（CYP1A1）的表達(dá)情況。結(jié)果如圖5a、5b顯示，BaP暴露使AhR及CYP1A1的表達(dá)顯著增加，而GLP-8抑制了BaP暴露誘發(fā)的AhR信號(hào)激活。研究報(bào)道，BaP暴露會(huì)誘導(dǎo)呼吸道上皮細(xì)胞ROS產(chǎn)生，激活A(yù)hR信號(hào)通路并進(jìn)一步誘發(fā)上皮細(xì)胞因子過(guò)表達(dá)。本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GLP-8能夠抑制BaP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞ROS過(guò)量產(chǎn)生，GLP-8處理后，ROS含量分別降低19.30%（5 μg/mL）和41.30%（25 μg/mL）；GLP-8也能夠抑制BaP暴露誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞AhR信號(hào)通路激活，與空白對(duì)照組（AhR表達(dá)設(shè)為100%）相比，BaP暴露使AhR的表達(dá)增加89.10%，CYP1A1的表達(dá)增加49.32%，經(jīng)GLP-8處理后，BaP暴露使AhR的表達(dá)降低了40.00%，CYP1A1的表達(dá)降低了65.50%。

NLRP3炎癥小體是由NOD樣受體（NOD-like receptor，NLR）家族成員NLRP3蛋白與ASC接頭蛋白及胱冬肽酶-1（Caspase-1）胱冬肽酶形成的一個(gè)多蛋白復(fù)合物，其活化后能促進(jìn)IL-1β、IL-18和IL-33等多種炎癥細(xì)胞因子的剪切，成熟與分泌，因而在炎癥發(fā)生過(guò)程中起關(guān)鍵作用。NLRP3炎癥小體作為固有免疫的重要組分在機(jī)體免疫反應(yīng)和疾病發(fā)生過(guò)程中具有重要作用[26]。因此，本實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步檢測(cè)了BaP暴露及GLP-8對(duì)NLRP3炎癥小體NLRP3、ASC及Caspase-1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果如圖5c、5d所示，BaP暴露顯著誘導(dǎo)了NLRP3炎癥小體NLRP3、ASC及Caspase-1蛋白的表達(dá)，分別增加69.80%、92.60%、151.20%；而GLP-8抑制了BaP暴露誘發(fā)的NLRP3炎癥小體激活，GLP-8處理后的NLRP3、ASC及Caspase-1蛋白表達(dá)量增加顯著降低，分別為19.40%（5 μg/mL）、18.58%（5 μg/mL）、67.40%（5 μg/mL）。

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境污染物BaP暴露會(huì)誘發(fā)氣道上皮細(xì)胞ROS過(guò)量產(chǎn)生并誘發(fā)氧化應(yīng)激，激活A(yù)hR信號(hào)通路；進(jìn)一步的，BaP暴露會(huì)誘發(fā)氣道上皮細(xì)胞炎癥因子分泌并激活NLRP3炎癥小體，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。本文分離的人參葉多酚類化合物具有抗BaP誘導(dǎo)的氧化損傷及炎癥損傷的活性。其中，GLP-8能夠抑制BaP暴露誘導(dǎo)的ROS過(guò)量產(chǎn)生及炎癥細(xì)胞因子（IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6）等過(guò)表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，GLP-8可能是基于抑制NLRP3炎癥小體及AhR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮抗炎及抗氧化活性的。同時(shí)，本研究為人參葉有效活性成分的提取及其應(yīng)用于哮喘的臨床治療方面提供了一定的理論借鑒依據(jù)。