劉雅萍 , 方圣濤 時(shí)振振 季乃云

(1. 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所, 山東 煙臺(tái) 264003; 2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué), 北京 100049)

深海是全球最大的獨(dú)立生態(tài)系統(tǒng)，蘊(yùn)含著豐富的微生物資源[1-2]，其獨(dú)特極端的生存環(huán)境使得深海微生物具備與陸地和淺海微生物不同的代謝途徑及遺傳背景[3-5]。深海沉積物是深海微生物的重要來(lái)源，近些年來(lái)，科學(xué)家們從深海中分離培養(yǎng)出大量的微生物并對(duì)其次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究[6-8]。其中深海沉積物來(lái)源微生物次生代謝產(chǎn)物也愈發(fā)受到關(guān)注，現(xiàn)已得到多種類型的化合物，如酮類、甾體類、萜類、二酮哌嗪類、生物堿類、脂類、苯腙類、喹唑啉類和過(guò)氧化物等[9-12]，但對(duì)深海冷泉沉積物來(lái)源微生物次生代謝產(chǎn)物研究較少。因此，研究深海冷泉沉積物來(lái)源微生物的次生代謝產(chǎn)物，是豐富海洋天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)多樣性的重要途徑，并且對(duì)于進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用深海資源具有重要意義。

根據(jù)前期對(duì)深海冷泉沉積物來(lái)源草酸青霉的研究[12]，本文對(duì)其次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，得到了11個(gè)化合物(1-11)，包括1個(gè)xanthone酮類化合物及其開(kāi)環(huán)衍生物(1和2)、7個(gè)蒽醌類化合物(3-9)、2個(gè)萜類化合物(10和11)。綜合運(yùn)用現(xiàn)代波譜技術(shù)包括核磁共振、質(zhì)譜、紅外光譜、X-射線單晶衍射及與參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比等方法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，并對(duì)其中新化合物(1)的生物活性進(jìn)行了測(cè)試。化合物1-11結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 化合物1-11的結(jié)構(gòu)Fig. 1 Structures of compounds 1-11

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

供試鹵蟲(Artemia salina)，為實(shí)驗(yàn)室保存卵孵化。供試微藻: 赤潮異彎藻(Heterosigma akashiwo)、東海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)和海洋卡盾藻(Chattonella marina) ，為實(shí)驗(yàn)室培植繼代微藻。供試菌株: 細(xì)菌包括檸檬假單胞菌(Pseudoalteromonas citrea)、大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鰻弧菌(Vibrio anguillarum)、哈氏弧菌(V.harveyi)和副溶血弧菌(V. parahemolyticus)和燦爛弧菌(V. splendidus)，真菌包括灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerium)、西瓜枯萎病菌(F. oxysporumf.niveum)和蘆筍莖枯病菌(Phomopsis asparagi)，為實(shí)驗(yàn)室保存菌株。

石油醚(分析純)、乙酸乙酯(分析純)、二氯甲烷(分析純)、甲醇(分析純)、乙腈(色譜純)，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

Bruker Avance III 500 型超導(dǎo)核磁共振波譜儀，Bruker公司; 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，Waters公司; Nicolet iS50紅外光譜儀Thermo Fisher Scientific公司，Agilent 1260 型高效液相色譜系統(tǒng)(Eclipese SB-C18色譜柱，9.4 mm × 250 mm，5 μm)，Agilent技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株的分離與培養(yǎng)

菌株分離于南海深海冷泉沉積物，經(jīng)ITS基因測(cè)序，鑒定該菌株為Penicillium oxalicum，菌種(CGMCC No.19913)保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

采用大米培養(yǎng)基將菌株進(jìn)行批量發(fā)酵,得到草酸青霉代謝產(chǎn)物粗提物536 g[12]。

1.2.2 單體化合物的分離與純化

將粗提物經(jīng)硅膠柱層析，依次用一定比例的石油醚-乙酸乙酯和二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，合并相同或類似部分得到8個(gè)組分(1-8)[12]。

組分4 (石油醚-乙酸乙酯，2 1)∶ 經(jīng)反相硅膠柱層析(甲醇-水，7 3)∶ ，Sephadex LH-20 (甲醇)凝膠柱層析和制備薄層層析得到化合物8 (3.1 mg)。

組分5 (石油醚-乙酸乙酯，1 1)∶ 經(jīng)反相硅膠柱層析(甲醇-水，17 3∶-9 1)∶ ，得到組分5-1 (甲醇-水，17 3)∶ 和5-2 (甲醇-水，9 1)∶ ，5-1經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯，1 1)∶ 和半制備高效液相色譜(乙腈-水，3 2∶-7 3∶，0.1%冰醋酸)得化合物9 (4.8 mg)和化合物7 (2.1 mg); 5-2經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯，2: 1)得化合物4 (36.7 mg)。

組分6 (乙酸乙酯)經(jīng)反相硅膠柱層析(甲醇-水，13 7∶-9 1)∶ ，得到組分6-1 (甲醇-水，13 7)∶ ，6-2 (甲醇-水，7 3)∶ ，6-3 (甲醇-水，3 1)∶ ，6-4 (甲醇-水，9 1)∶ 。6-1經(jīng)Sephadex LH-20 (甲醇)凝膠柱層析再經(jīng)過(guò)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇，30 1)∶ 得到化合物10(13.2 mg); 6-2經(jīng)Sephadex LH-20 (甲醇)凝膠柱層析分別得化合物11 (8.8 mg)和化合物3 (6.9 mg); 6-3經(jīng)Sephadex LH-20 (甲醇)凝膠柱層析、半制備高效液相色譜(乙腈-水，1 4∶-2 3)∶ 分別得化合物1 (4.7 mg)和化合物2 (5.6 mg); 6-4經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯，2 1∶-1 1)∶ ，分別得化合物5 (8.9 mg)和化合物6 (22.0 mg)。

1.2.3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

綜合運(yùn)用核磁共振、紅外光譜、質(zhì)譜、X-射線單晶衍射及與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)比較等方法，對(duì)所得化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和解析。

1.2.4 化合物生物活性測(cè)試

參照文獻(xiàn)所用的實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定新化合物對(duì)鹵蟲的毒性以及抗微藻、抗細(xì)菌、抗真菌活性[13-15]。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1: 白色粉末。[α]28D?72 (c0.056, MeOH);UV (MeOH) λmax(logε) 271 (3.6) nm; IR (KBr) vmax3 476, 2 955, 1 732, 1 648, 1 628, 1 580, 1 462, 1 359,1 290, 1 228, 1 049, 795 cm–1; 高分辨質(zhì)譜HRESIMS(m/z[M + Na]+361.090 7，計(jì)算為: 361.089 4，提示分子式為: C16H18O8，不飽和度為8。1H NMR 譜(DMSO-d6)顯示該化合物含有3個(gè)芳香區(qū)信號(hào):δH7.47 (1H, dd,J= 8.0, 7.1 Hz, H-3),δH6.53 (1H, d,J=7.1 Hz, H-2)和δH6.48 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-4)，2個(gè)甲基信號(hào):δH3.60 (3H, s, H-13)和δH0.91 (3H, d,J=6.6 Hz, H-11)。進(jìn)一步分析13C NMR和DEPT NMR譜(DMSO-d6)，發(fā)現(xiàn)該化合物分子中有16個(gè)碳原子，分別為7個(gè)季碳信號(hào):δC196.7 (C-9, C),δC172.5 (C-8,C),δC170.4 (C-12, C),δC160.8 (C-1, C),δC159.7(C-4a, C),δC107.2 (C-9a, C),δC87.5 (C-10a, C), 5個(gè)次甲基信號(hào):δC107.7 (C-2, CH),δC138.7 (C-3, CH),δC109.2 (C-4, CH),δC74.7 (C-5 CH)和δC30.9 (C-6,CH)，2個(gè)亞甲基信號(hào):δC40.5 (C-8a, CH2)和δC39.5(C-7, CH2)及2個(gè)甲基信號(hào):δC52.9 (C-13, CH3)和δC13.9 (C-11, CH3)。化合物1在分離過(guò)程中可以由化合物2逐漸變化得到，其核磁譜圖也顯示出與blennolide B[16]的相似之處，通過(guò)仔細(xì)比較核磁數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)化合物1與blennolide B的不同之處在于，blennolide B化合物C-8a位的季碳消失，變成一個(gè)亞甲基，再根據(jù)化合物1的C-8處化學(xué)位移推測(cè)C-8位連接了一個(gè)羧基，因此推測(cè)該化合物1在C-8a和C-8之間開(kāi)環(huán)，是blennolide B的開(kāi)環(huán)衍生物。通過(guò)HMBC譜圖中，H-7與C-8的相關(guān)確定羧基與C-7相連，結(jié)合COSY譜中H-6與H-5、H-7和H-11的相關(guān)，將骨架由C-5擴(kuò)展到C-8，再通過(guò)COSY、HMBC相關(guān)(圖2)推出化合物1的平面結(jié)構(gòu)?；衔?的旋光度為[α]20D+102 (c0.18, MeOH)，與blennolide B的文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，確定化合物2的絕對(duì)構(gòu)型為為5R，6S和10aR，因此，確定該新化合物的絕對(duì)構(gòu)型為5R，6S和10aR，是一個(gè)新的xanthone酮類開(kāi)環(huán)衍生物，命名為seco-blennolide B。核磁數(shù)據(jù)如下:δH11.48 (1H, brs, OH-1), 7.47 (1H, dd,J= 8.0, 7.1 Hz,H-3), 6.53 (1H, d,J= 7.1 Hz, H-2), 6.48 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-4), 5.72 (1H, d,J= 6.3 Hz, OH-5), 3.84 (1H, dd,J= 6.3, 2.2 Hz, H-5), 3.60 (3H, s, H-13), 3.42 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-8aa), 3.00 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-8ab),2.49 (1H, dd,J= 15.8, 7.0 Hz, H-7a), 2.28 (1H, dd,J=15.8, 7.0 Hz, H-7b), 2.22 (2H, m, H-6), 0.91 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-11);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC196.7 (C-9, C), 172.5 (C-8, C), 170.4 (C-12, C), 160.8(C-1, C), 159.7 (C-4a, C), 107.7 (C-2, CH), 107.2(C-9a, C), 138.7 (C-3, CH), 109.2 (C-4, CH), 87.5(C-10a, C), 74.7 (C-5 CH), 52.9 (C-13, CH3), 40.5(C-8a, CH2), 39.5 (C-7, CH2), 30.9 (C-6, CH), 13.9(C-11, CH3)。

圖2 化合物1重要的COSY和HMBC相關(guān)Fig. 2 Key COSY and HMBC correlations of compound 1

化合物2: C16H16O7，淡黃色無(wú)定型粉末。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:δH13.90 (1H, brs, OH-8), 11.29 (1H, s,OH-1), 7.43 (1H, t,J= 8.2 Hz, H-3), 6.54 (2H, dd,J=8.2, 0.8 Hz, H-4), 6.47 (1H, dd,J= 8.2, 0.8 Hz, H-2),5.95 (1H, d,J= 5.5 Hz, OH-5), 3.77 (1H, m, H-5), 3.56(3H, s, H-13), 2.58 (1H, m, H-7b), 2.40 (2H, m, H-6),2.28 (1H, m, H-7a), 1.01 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-11);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC185.7 (C-9, C), 179.6(C-8, C), 170.7 (C-12, C), 161.4 (C-1, C), 160.0 (C-4a,C), 138.4 (C-3, CH), 110.0 (C-2, CH), 108.2 (C-4, CH),107.2 (C-9a, C), 102.2 (C-8a, C), 85.6 (C-10a, C), 75.8(C-5, CH), 53.1 (C-13, CH3), 36.3 (C-7, CH2), 30.3(C-6, CH), 18.2 (C-11, CH3)。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)檢索與數(shù)據(jù)比對(duì)發(fā)現(xiàn)化合物2與文獻(xiàn)報(bào)道的已知化合物blennolide B[16]波譜數(shù)據(jù)基本一致，因此將化合物2鑒定為blennolide B。

化合物3: C15H10O6，橙黃色粉末狀固體。1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH12.07 (1H, s,OH-8), 12.04 (1H, s, OH-1), 7.61 (1H, s, H-5), 7.22(1H, s, H-7), 7.10 (1H, d,J= 2.4 Hz, H-4), 6.57 (1H, d,J= 2.4 Hz, H-2), 5.57(1H, brs, OH-6), 4.60 (2H, s,H-11);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC190.2 (C-9,C), 181.8 (C-10, C), 166.1 (C-3, C), 164.9 (C-1, C),161.9 (C-8, C), 153.3 (C-6, C), 135.6 (C-10a, C), 133.4(C-4a, C), 121.2 (C-7, CH), 117.5 (C-5, CH), 114.5(C-8a, C), 109.4 (C-4, CH), 109.3 (C-9a, C), 108.3(C-2, CH), 62.5 (C-11, CH2)。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)檢索與數(shù)據(jù)比對(duì)發(fā)現(xiàn)化合物 3與文獻(xiàn)報(bào)道的已知化合物citreorosein[17]數(shù)據(jù)基本一致，因此將化合物3鑒定為citreorosein。

化合物4: C15H10O5，黃色粉末狀固體。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH12.09 (1H, brs, 8-OH), 12.03 (1H, brs, OH-1)，7.49 (1H,d,J= 1.2 Hz, H-5), 7.17 (1H, m, H-4), 7.12 (1H, d,J=2.4 Hz, H-7), 6.60 (1H, d,J= 2.4 Hz, H-2), 2.42 (3H, s,H-11);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC189.7 (C-9,C), 181.4 (C-10, C), 165.6 (C-1, C), 164.5 (C-3, C),161.4 (C-8, C), 148.3 (C-6, C), 135.1 (C-4a, C), 132.9(C-10a, C), 124.2 (C-7, CH), 120.5 (C-5, CH), 113.4(C-8a, C), 109.0 (C-9a, C), 108.8 (C-4, CH), 108.0(C-2, CH), 21.5 (C-11, CH3)。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)檢索與數(shù)據(jù)比對(duì)發(fā)現(xiàn)化合物4與文獻(xiàn)報(bào)道的已知化合物emodin[18]數(shù)據(jù)基本一致，因此將化合物4鑒定為emodin。

化合物5: C17H14O6，黃色粉末狀固體。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH12.11 (1H, s, OH-8), 12.02 (1H, s, OH-1), 11.39 (1H, s,OH-6), 7.55 (1H, s, H-2), 7.20 (1H, s, H-4), 7.14 (1H,d,J= 2.4 Hz, H-5), 6.61 (1H, d,J= 2.4 Hz, H-7), 4.69(1H, m, H-2’), 3.91 (1H, m, OH-4), 2.73 (2H, m, H-1’),1.11 (3H, d,J= 6.1 Hz, H-3’);13C NMR (DMSO-d6,125 MHz):δC190.3 (C-9, C), 182.0 (C-10, C), 166.0(C-8, C), 164.9 (C-6, C), 161.6 (C-1, C), 150.6 (C-3,C), 135.7 (C-5a, C), 133.0 (C-10a, C), 125.3 (C-2, CH),121.5 (C-4, CH), 114.1 (C-1a, C), 109.5 (C-9a, CH),109.2 (C-5, C), 108.4 (C-7, CH), 67.0 (C-2’, CH), 45.5(C-1’, CH2), 23.9 (C-3’, CH3)。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)，化合物5的核磁數(shù)據(jù)與isorhodoptilometrin[19]基本一致，因此將化合物5鑒定為isorhodoptilometrin。

化合物6: C15H10O5，黃色粉末狀固體。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH11.99 (1H, brs, OH-8), 11.93 (1H, brs, OH-1), 7.84 (1H,t,J =7.7 Hz, H-6), 7.74 (1H, d,J= 7.5 Hz, H-5), 7.72(1H, s, H-4), 7.40 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-7), 7.31 (1H, s,H-2), 4.66 (2H, s, H-11);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC192.2 (C-9, C), 182.0 (C-10, C), 162.1 (C-3,C), 161.8 (C-1, C), 154.2 (C-8, C), 137.8 (C-6, CH),133.9 (C-10a, C), 133.6 (C-4a, C), 124.9 (C-7, CH),121.2 (C-5, CH), 119.8 (C-8a, C), 117.6 (C-4, CH),116.4 (C-9a, C), 115.0 (C-2, CH), 62.5 (C-11, CH2)。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)，化合物6的波譜數(shù)據(jù)與已知化合物aloe-emodin[20]的文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，因此將化合物6鑒定為aloe-emodin。

化合物7: C17H12O6，淡黃色粉末狀固體。核磁數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH11.98 (1H, s, OH-1), 7.53 (1H, s, H-4), 7.10 (1H, s,H-5), 6.56 (1H, s, H-7), 2.55 (3H, s, H-12), 2.31 (3H, s,H-13);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC203.6(C-11, C), 189.4 (C-9, C), 181.6 (C-10, C), 165.1 (C-8,C), 158.2 (C-1, C), 143.7 (C-3, C), 136.5 (C-2, C),135.5 (C-4a, C), 133.1 (C-10a, C), 121.5 (C-4, CH),114.5 (C-9a, C), 110.2 (C-5, CH), 109.0 (C-8a, C),109.0 (C-6, C), 108.5 (C-7, CH), 32.1 (C-12, CH3),19.8 (C-13, CH3)。經(jīng)文獻(xiàn)檢索對(duì)比，該化合物的核磁數(shù)據(jù)與2-acetylemodin[21]一致，因此將化合物7鑒定為2-acetylemodin。

化合物8: C17H12O6，黃色粉末狀固體。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(CDCl3, 500 MHz):δH12.08 (1H, s, OH-8), 12.05 (1H, s, OH-1), 7.80 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-5), 7.77 (1H, brs, H-4), 7.68 (1H, t,J=7.7 Hz, H-6), 7.29 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-7), 7.24 (1H, s,H-2), 5.14 (2H, s, H-11), 2.18 (3H, s, CH3CO);13C NMR (CDCl3, 125 MHz):δC192.3 (C-9, C), 181.1(C-10, C), 170.2 (C-2’, C=O), 162.4 (C-1, C), 162.1(C-8, C), 146.4 (C-3, CH), 136.9 (C-6, C), 133.7(C-10a, C), 133.4 (C-4a, C), 124.6 (C-7, CH), 122.3(C-2, CH), 120.1 (C-5, CH), 118.4 (C-4, CH), 115.8(C-8a, C), 115.2 (C-9a, C), 64.7 (C-11, CH2), 20.7(C-1’, CH3)。經(jīng)文獻(xiàn)對(duì)比，化合物8的核磁數(shù)據(jù)與11-O-acetylaloeemodin[22]基本一致，因此將該化合物鑒定為11-O-acetylaloeemodin。

化合物9: C17H12O7，淡黃色粉末狀固體。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH12.13 (1H, brs, OH-1), 12.13 (1H, brs, OH-9), 7.62(1H, s, H-4), 7.30 (1H, s, H-2), 7.08 (1H, s, H-6), 6.51(1H, s, H-8), 5.18 (2H, s, H-11), 2.15 (3H, s, CH3CO);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC189.4 (C-10, C),181.7 (C-5, C), 170.6 (C-12, C), 167.6 (C-7, C), 165.2(C-9, C), 161.8 (C-1, C), 145.9 (C-3, C), 135.5 (C-5a,C), 133.8 (C-4a, C), 122.7 (C-2, CH), 118.2 (C-4, CH),115.6 (C-10a, C), 110.3 (C-6, CH), 108.9 (C-9a, C),108.4 (C-8, CH), 64.7 (C-11, CH2), 21.1 (C-13, CH3)。經(jīng)文獻(xiàn)對(duì)比，化合物9的核磁數(shù)據(jù)與phaseolorin I[23]基本一致，因此將該化合物鑒定為phaseolorin I。

化合物10: C19H26O5，無(wú)色晶體; 核磁數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(CD3OD, 500 MHz):δH5.65 (1H, brs,H-14), 5.07 (1H, brs, H-17a), 4.72 (1H, brs, H-17b),3.74 (1H, ddd,J= 10.7, 10.5, 5.5 Hz, H-5), 2.77 (1H,dd,J= 12.5, 5.5 Hz, H-7a), 2.63 (1H, d,J= 16.8 Hz,H-1a), 2.59 (1H, dq,J= 10.7, 1.9 Hz, H-5), 2.36 (1H, d,J= 16.8 Hz, H-1b), 2.35 (1H, m, H-12a), 2.31 (1H, dd,J= 12.5, 5.5 Hz, H-7b), 2.15 (3H, d,J= 1.2 Hz, H-16),2.10 (3H, d,J= 1.9 Hz, H-18), 2.09 (1H, m, H-12b),2.05 (1H, brd,J= 10.8 Hz, H-9), 1.62 (1H, m, H-11),0.71 (3H, s, H-19);13C NMR (CD3OD, 125 MHz):δC194.5 (C-2, C), 170.2 (C-15, C), 161.2 (C-13, C), 146.4(C-3, C), 145.0 (C-8, C), 134.7 (C-4, C), 117.1 (C-15,CH), 110.0 (C-17, CH2), 70.2 (C-6, CH), 55.0 (C-5,CH), 53.0 (C-9, CH), 51.5 (C-1a, CH2), 48.8 (C-7,CH2), 45.0 (C-10, C), 40.3 (C-12, CH2), 23.0 (C-11,CH2), 18.8 (C-16, CH3), 15.3 (C-18, CH3), 14.0 (C-19,CH3)。13C NMR和DEPT譜(CD3OD)顯示該化合物共19個(gè)碳原子，包括3個(gè)甲基信號(hào)，5個(gè)亞甲基信號(hào)，4個(gè)次甲基和7個(gè)季碳信號(hào)，結(jié)合1H NMR譜(CD3OD)信息，推斷該化合物應(yīng)為降二萜類化合物，其絕對(duì)構(gòu)型通過(guò)單晶數(shù)據(jù)(CCDC 2024004)確定:M= 334.40,a= 16.035 7 (3) ?,b= 16.035 7 (3) ?,c= 24.684 1 (5)?,α= 90°,β= 90°,γ= 120°,V= 5497.0 (2) ?3,T=100.(2) K, 該單晶屬于P63空間群,Z= 12,μ(Cu Kα)= 0.708 mm–1, 測(cè)試衍射點(diǎn)數(shù): 74578，其中不相關(guān)衍射點(diǎn)數(shù): 7259 (Rint= 0.0552)。最終得到R1: 0.0302 (I>2σ(I)),wR(F2): 0.0842 (I> 2σ(I)),R1: 0.0303 (all data),wR(F2): 0.0844 (all data),F2的GOF值: 1.061, Flack常數(shù): 0.02 (4)，單晶衍射圖如下(圖3)。經(jīng)文獻(xiàn)對(duì)比，化合物10與化合物penitholabene[24]結(jié)構(gòu)一致，因此將其鑒定為penitholabene。

圖3 化合物10的單晶結(jié)構(gòu)圖Fig. 3 X-ray crystallographic structure of compound 10

化合物11: C18H24O6，白色粉末狀固體。核磁波譜數(shù)據(jù)如下:1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6, 500 MHz):δH5.57 (1H, s, H-13), 5.19 (1H, s, H-16a), 4.84 (1H, s,H-16b), 4.38 (1H, m, H-8), 2.89 (1H, m, H-7a), 2.77(1H, m, H-3), 2.48 (1H, d,J= 14.2, H-18a), 2.41 (1H,dd,J= 11.5, 7.2 Hz, H-9), 2.35 (1H, d,J= 14.2 Hz,H-18b), 2.18 (1H, m, H-11a), 2.16 (1H, m, H-7b), 2.09(3H, d,J= 1.2 Hz, H-15), 2.01 (1H, m, H-5), 1.89 (1H,m, H-11b), 1.71 (1H, m, H-10a), 1.51 (1H, m, H-10b),1.18 (3H, d,J =7.7 Hz, H-17), 0.78 (3H, s, H-20);13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz):δC179.3 (C-2, C), 172.9(C-19, C), 167.9 (C-14, C), 159.4 (C-12, C), 142.6(C-6, C), 116.4 (C-13, CH), 113.9 (C-16, CH2), 76.9(C-8, CH), 52.8 (C-9, CH), 50.8 (C-5, CH), 42.6 (C-7,CH2), 42.4 (C-18, CH2), 40.1 (C-4, C), 39.6 (C-11,CH2), 38.7 (C-3, CH), 22.7 (C-10, CH2), 18.9 (C-15,CH3), 17.8 (C-20, CH3), 12.2 (C-17, CH3)。經(jīng)與文獻(xiàn)對(duì)比，化合物11與化合物paecilomycine A[25]核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此將其鑒定為paecilomycine A。

2.2 活性結(jié)果

新化合物(100 μg/mL)對(duì)鹵蟲的致死率為11.9%，對(duì)東海原甲藻和海洋卡盾藻的抑制率分別為85.3%和43.2%，該濃度下對(duì)赤潮異彎藻無(wú)明顯的活性。新化合物(20 μg/片)對(duì)副溶血弧菌的紙片抑菌圈直徑為9.3 mm，該濃度下對(duì)其他測(cè)試細(xì)菌、真菌無(wú)明顯活性。

3 結(jié)論

本文從深海冷泉采集的沉積物樣品中分離得到一株海洋真菌草酸青霉，對(duì)其進(jìn)行批量發(fā)酵培養(yǎng)，所得粗提物利用硅膠柱層析、Sephadex LH-20 凝膠柱層析、反相硅膠柱層析、制備薄層層析和半制備高效液相色譜等分離手段得到1個(gè)新的單體化合物seco-blennolide B (1)，其他化合物通過(guò)1H NMR、13C NMR等方式鑒定為blennolide B (2)、citreorosein (3)、emodine (4)、aloe-emodin (5)、isorhodoptilometrin (6)、11-O-acetylaloeemodin (8)、phaseolorin I(9)、2-acetylemodin (7)、 penitholabene (10)和paecilomycine A (11)。化合物1為新的xanthone酮類開(kāi)環(huán)衍生物，化合物10和11為首次從深海冷泉草酸青霉中分離到的已知萜類化合物。此外，本文首次獲取化合物10的單晶結(jié)構(gòu)，并對(duì)其單晶數(shù)據(jù)進(jìn)行報(bào)道?；钚詼y(cè)試結(jié)果表明，化合物1對(duì)海洋卡盾藻、東海原甲藻的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，對(duì)鹵蟲表現(xiàn)出微弱的毒性，對(duì)副溶血弧菌表現(xiàn)出弱的抑制作用，對(duì)其他測(cè)試細(xì)菌和真菌、微藻無(wú)明顯活性。