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巴戟天中有效成分在Caco-2細(xì)胞模型中的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)△

2022-06-22 07:47張超華悅李喆史輯
中國現(xiàn)代中藥 2022年5期
關(guān)鍵詞:乙酰單層水晶

張超,華悅,李喆,史輯

遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,遼寧 大連 116600

巴戟天是茜草科植物巴戟天Morinda officinalisHow.的干燥根,味甘、辛,性微溫,歸腎、肝經(jīng),是我國著名的“四大南藥”之一。其主要作用是補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕,常用于陽痿遺精、宮冷不孕、少腹冷痛、筋骨萎軟等證[1]?!吨腥A人民共和國藥典》2020 年版巴戟天含量測定項(xiàng)選用耐斯糖為定量指標(biāo)成分[1]。巴戟天還含有以水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸為代表的環(huán)烯醚萜類成分,具有抗衰老、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松等多方面的藥理作用[2-6]。

中藥大多經(jīng)口服吸收,小腸為口服給藥的主要吸收部位,吸收效果易受到藥物濃度、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)方式、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等多種因素影響。由于人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2 與人體小腸上皮細(xì)胞有相似的形態(tài)、細(xì)胞極性及連接方式,且擁有小腸上皮細(xì)胞中的堿性磷酸酶、P-糖蛋白(P-gp)、糖類、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、維生素等代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體,因此Caco-2 細(xì)胞單層模型被廣泛應(yīng)用于藥物在腸道中的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝的體外研究[7-10]。因此,本實(shí)驗(yàn)采用Caco-2 細(xì)胞單層模型對巴戟天中水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖3 個特征性成分的腸吸收特性進(jìn)行研究,明確其吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,以期為巴戟天有效成分的進(jìn)一步開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 細(xì)胞

Caco-2細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

1.2 試藥

DMEM 高糖培養(yǎng)基、無酚紅DMEM 高糖培養(yǎng)基、非必需氨基酸、胰蛋白酶、Hank′s 平衡鹽溶液(HBSS)均購自美國Gibco 公司;胎牛血清(FBS,美國PAN 公司);青-鏈霉素雙抗(美國Hyclone 公司);磷酸鹽緩沖液(PBS)、二甲基亞砜(DMSO)、苯酚紅均購自北京索萊寶科技有限公司;CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒、堿性磷酸酶(AKP)試劑盒均購自南京建成生物科技有限公司;水晶蘭苷(批號:O0605AS,純度≥98.0%)、去乙酰車葉草苷酸(批號:J0329AS,純度≥98.0%)、鹽酸普萘洛爾(批號:318-98-9,純度>98%)均購自大連美侖生物技術(shù)有限公司;耐斯糖(批號:292-64121,純度≥99.0%,日本W(wǎng)ako 公司);鹽酸維拉帕米(批號:S420204,純度>99%,美國Selleck Chemicals公司);甲醇、乙腈等試劑均為分析純;水為超純水。

1.3 儀器

H-Class/Xevo TQD 型三重四級桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(配有Masslynx 4.1色譜工作站)、ACQUITY UPLC 型超高效液相色譜儀、Ulyimate UHPLC AQC18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)、ACQUITY UPLC BEH Amide 色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)均購于美國Waters 公司;AE240 型十萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司);XW-80A型渦旋混合器(上海青浦滬西儀器廠);Multiskan MK3 型酶標(biāo)儀(美國賽默飛世爾科技有限公司);YXQ-LS-75S11 型立式壓力蒸汽滅菌器(上海博訊科學(xué)儀器有限公司);DCMC510 型倒置顯微鏡(日本奧林巴斯公司);MCO-15AC 型CO2培養(yǎng)箱(日本三洋公司);DW-86W100 型臥式超低溫保存箱(青島海爾醫(yī)療設(shè)備股份有限公司);Millecell-ERS 型跨膜細(xì)胞電阻儀(美國Millipore 公司);SHA-C 型恒溫振蕩器(常州國華電器有限公司)。

2 方法

2.1 Caco-2細(xì)胞單層模型制備

Caco-2 細(xì)胞接種于25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,采用DMEM 完全培養(yǎng)基(DMEM 高糖培養(yǎng)基41.5 mL 加入青-鏈霉素雙抗0.5 mL、非必需氨基酸0.5 mL、FBS 7.5 mL),于37 ℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取第6~10代Caco-2細(xì)胞制成懸液,控制細(xì)胞密度為5×103個/mL,接種于24 孔Transwell 中,于腸腔(AP)側(cè)加入細(xì)胞懸液0.5 mL,于基底(BL)側(cè)加入完全培養(yǎng)液1.5 mL,在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),前10 d 隔天換液,10 d 后每天換液,培養(yǎng)至21 d待用。

2.2 Caco-2細(xì)胞單層模型驗(yàn)證

2.2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)驗(yàn)證 將細(xì)胞以2.1 項(xiàng)下相同密度接種于24 孔板中,培養(yǎng)21 d,于光學(xué)顯微鏡下拍照,觀察細(xì)胞形態(tài)[11]。

2.2.2 跨膜電阻(TEER)考察 細(xì)胞接種于Transwell小室中后,于第0、3、6、9、12、15、18、21 天分別測定TEER,待TEER>300 Ω·cm–2時,說明此單層細(xì)胞模型已致密、完整[12-13]。

2.2.3 酚紅透過率考察 酚紅是一種水溶性小分子物質(zhì),不易被Caco-2 細(xì)胞代謝及過膜轉(zhuǎn)運(yùn),因此選取酚紅作為泄露標(biāo)志物進(jìn)行考察。于接種后第3、6、9、12、15、18、21 天分別測定細(xì)胞中酚紅透過率。棄去細(xì)胞原有培養(yǎng)基,加入預(yù)熱至37 ℃的無酚紅完全培養(yǎng)基,放置于CO2培養(yǎng)箱中平衡30 min,棄去培 養(yǎng)基,于AP 側(cè)加入含酚 紅5 μg·mL–1的HBSS 0.5 mL,BL 側(cè)加入HBSS 1.5 mL,培養(yǎng)3 h。3 h后于BL側(cè)取培養(yǎng)基0.3 mL,在波長為560 nm 處測定吸光度(A),按照公式(1)計(jì)算BL 側(cè)酚紅透過量,并按照公式(2)計(jì)算表觀滲透系數(shù)(Papp)[14]。

(1)式中Q為透過藥物的總質(zhì)量(μg);VBL為BL 側(cè)培養(yǎng)基總體積(1.5 mL);ABL為BL 側(cè)培養(yǎng)基吸光度;A空白組為空白HBSS 的吸光度;A0為酚紅初始濃度吸光度;C0為藥物初始質(zhì)量濃度(μg·mL–1)。

(2)式中dQ/dt為dt時間段中透過的藥物質(zhì)量(μg·s–1);S為單層細(xì)胞表面積(cm2),本實(shí)驗(yàn)中為0.3 cm2。

2.2.4 AKP 活性考察 AKP 是小腸進(jìn)行消化活動時的必需酶,其主要集中于Transwell AP 側(cè),且其含量隨細(xì)胞的分化而增加。分別取Transwell 中培養(yǎng)了7、14、21 d的細(xì)胞,吸棄舊培養(yǎng)基,用已預(yù)熱至37 ℃的HBSS 沖洗2~3 次,在AP 側(cè)加入HBSS 0.5 mL,BL側(cè)加入HBSS 1.5 mL,置于培養(yǎng)箱中孵育20 min,取AP 側(cè)和BL 側(cè)培養(yǎng)基,離心(70×g,5 min),取上清液用試劑盒測定AKP 活性,操作參照說明書。

2.3 化合物給藥質(zhì)量濃度篩選

精密稱取水晶蘭苷5.062 mg、去乙酰車葉草苷酸20.003 mg、耐斯糖100.225 mg,分別用HBSS溶解并進(jìn)行稀釋,配制成含水晶蘭苷5.062、2.531、1.266、0.633、0.316、0.158 mg·mL–1,去乙酰車葉草苷酸20.003、10.001、5.000、2.500、1.250、0.625 mg·mL–1,耐斯糖100.225、50.113、25.056、12.528、6.264、3.132 mg·mL–1的溶液。

將消化后的Caco-2細(xì)胞以1×105個/cm2接種于96孔板中,每孔100 μL,培養(yǎng)24 h。棄去上清液,各加入完全培養(yǎng)基90 μL 和各質(zhì)量濃度的藥物10 μL,每個質(zhì)量濃度設(shè)3個復(fù)孔,同時設(shè)立3個對照孔(不加藥)和3 個空白孔(無細(xì)胞)。培養(yǎng)24 h 后,各孔加入CCK-8溶液10 μL,培養(yǎng)1 h,在450 nm 下用酶標(biāo)儀測定A,按照公式(3)計(jì)算細(xì)胞存活率。

2.4 化合物給藥pH篩選

經(jīng)2.3項(xiàng)下質(zhì)量濃度篩選,采用HBSS分別配制水晶蘭苷(0.127 2 mg·mL–1)、去乙酰車葉草苷酸(0.064 8 mg·mL–1)、耐斯糖(1.250 2 mg·mL–1)溶液,均采用HCl 和NaOH 調(diào)節(jié)pH 為5.8、6.8、7.4,按2.3項(xiàng)下方法測定A,計(jì)算細(xì)胞存活率。

2.5 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)

2.5.1 化合物不同質(zhì)量濃度對轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 用HBSS 稀釋各化合物達(dá)到所需質(zhì)量濃度,與完全培養(yǎng)基1∶9 混合得樣品溶液,終質(zhì)量濃度分別為水晶蘭苷0.127 2、0.063 6、0.031 8 mg·mL–1,去乙酰車葉草苷酸0.064 8、0.032 4、0.016 2 mg·mL–1,耐斯糖1.250 2、0.625 1、0.312 5 mg·mL–1;取符合轉(zhuǎn)運(yùn)條件的Caco-2 細(xì)胞單層模型,用HBSS 清洗3 次,于AP 側(cè)加入HBSS 0.5 mL,BL 側(cè)加入HBSS 1.5 mL,于CO2培養(yǎng)箱中平衡30 min,棄去HBSS進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。AP-BL 實(shí)驗(yàn)時,于AP 側(cè)加入樣品溶液0.5 mL,于BL 側(cè)加入HBSS 1.5 mL。BL-AP 實(shí)驗(yàn)時,向AP 側(cè)加入HBSS 0.5 mL,向BL 側(cè)加入樣品溶液1.5 mL。將小室置于37 ℃恒溫水浴振蕩器中,于90 min 吸取接受端樣品,AP 側(cè)取0.3 mL,BL 側(cè)取0.6 mL,備用,每個樣品設(shè)置3個復(fù)孔。

同時設(shè)立P-gp 抑制劑鹽酸維拉帕米對照組,兩側(cè)的轉(zhuǎn)運(yùn)溶媒都加入鹽酸維拉帕米,使其終濃度為1×10–4mol·L–1,計(jì)算90 min后藥物的累積透過量和Papp,操作同上。

2.5.2 化合物不同作用時間對轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 用HBSS 稀釋各化合物,加入Caco-2 細(xì)胞單層模型,操作同2.5.1 項(xiàng)下。將小室置于37 ℃恒溫水浴振蕩器中,分別于30、60、90、120、150、180 min吸取接受端樣品,AP 側(cè)取0.3 mL,BL 側(cè)取0.6 mL,備用,每個樣品設(shè)置3個平行復(fù)孔。

2.6 含量測定

2.6.1 供試品溶液制備 精密吸取跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)液,于4 ℃離心(10 142×g,10 min),取上清液過0.22 μm微孔濾膜,即得。

2.6.2 對照品溶液制備 用HBSS 配制含水晶蘭苷5.090 mg·mL–1、去乙酰車葉草苷酸6.475 mg·mL–1、耐斯糖3.170 mg·mL–1的對照品溶液,備用。

2.6.3 色譜與質(zhì)譜條件 水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸色譜條件:Ulyimate UHPLC AQ-C18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.8 μm);流動相為甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脫(0~8 min,2%~15%A);檢測波長為235 nm;流速為0.3 mL·min–1;進(jìn)樣體積為2μL;柱溫為25 ℃。

耐斯糖色譜及質(zhì)譜條件:ACQUITY UPLC BEH Amide 色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流動相為0.1%甲酸乙腈溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脫(0~13 min,35%~45%A);流速為0.3 mL·min–1;進(jìn)樣體積為1μL。采用電噴霧離子源(ESI),負(fù)離子模式掃描;離子掃描范圍為m/z50~1000;毛細(xì)管電離電壓為3.0 kV;源溫度為150 ℃;脫溶劑溫度為500 ℃;脫溶劑氣流速為1000 L·h–1;錐孔氣流速為50 L·h–1;多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM);錐孔電壓為100 V;碰撞能量為42 eV,母離子與子離子分別為m/z665.095 8、89.025 1。

2.6.4 線性范圍考察 用HBSS 稀釋各對照品溶液,得到水晶蘭苷質(zhì)量濃度為0.127、0.636、1.273、3.818、5.090 mg·mL–1,去乙酰車葉草苷酸質(zhì)量濃度為0.064 8、0.324 0、0.648 0、1.295 0、3.238 0、6.475 0 mg·mL–1,耐斯糖質(zhì)量濃度為0.159、0.793、1.585、2.378、3.170 mg·mL–1的系列對照品溶液,按2.6.3 項(xiàng)下色譜、質(zhì)譜條件測定,以各成分質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸,計(jì)算各成分的回歸方程和線性范圍。

2.6.5 專屬性考察 比較各成分及HBSS 色譜圖,確認(rèn)各成分之間是否存在干擾、HBSS 有無雜質(zhì)干擾、HBSS對各成分是否存在干擾。

2.6.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取各對照品溶液,按2.6.3項(xiàng)下色譜條件,于1 d 內(nèi)分別進(jìn)樣5 次,再將其于5 d 中每日進(jìn)樣1 次,計(jì)算水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖峰面積的RSD。

2.6.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液,照2.6.3項(xiàng)下方法,于0、2、4、6、8、10、12 h 進(jìn)樣,計(jì)算水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖峰面積的RSD。

2.6.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取同一小室BL 側(cè)溶液6次,每次100 μL,按2.6.1項(xiàng)下方法制成供試品溶液,進(jìn)樣,計(jì)算水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖含量的RSD。

2.6.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取同一小室BL 側(cè)溶液6 次,每次0.1 mL,按照比例(對照品加入量-樣品中含量1∶1)加入混合對照品溶液,照2.6.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別測定。計(jì)算水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖的平均加樣回收率及RSD。

2.6.10 透過量測定 采用Papp作為評價指標(biāo),測定各化合物透過量。

3 結(jié)果

3.1 Caco-2細(xì)胞單層模型驗(yàn)證

3.1.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)考察 于倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)了21 d 的Caco-2 細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞整體呈鋪路石樣形態(tài),細(xì)胞之間緊密連接(圖1)。

圖1 培養(yǎng)21 d后Transwell中Caco-2細(xì)胞形態(tài)

3.1.2 TEER 考察 在培養(yǎng)21 d 內(nèi),Caco-2 細(xì)胞TEER 變化趨勢為先上升然后小幅度下降,最后保持平穩(wěn),第21 天,Caco-2 細(xì)胞TEER 為(418.8±10.1)Ω·cm–2,說明單層細(xì)胞模型制備成功(圖2)。

圖2 Transwell中Caco-2細(xì)胞TEER變化(,n=3)

3.1.3 酚紅透過率考察 結(jié)果見表1,發(fā)現(xiàn)第18 天開始,Caco-2細(xì)胞中酚紅的Papp低于轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)規(guī)定的1×10–6cm·s–1,說明單細(xì)胞層完整性符合轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)要求[15]。

表1 Caco-2細(xì)胞單層模型的酚紅Papp(n=3)

3.1.4 堿性磷酸酶活性考察 培養(yǎng)7、14、21 d Transwell 兩側(cè)培養(yǎng)基中AKP 活性見表2。第14、21 天,AP 側(cè)AKP 活性分別是BL 側(cè)的3.4、6.4 倍,表明在AP 側(cè)已發(fā)生了明顯、穩(wěn)定的極化現(xiàn)象,Caco-2細(xì)胞單層模型制備成功[16]。

表2 Caco-2細(xì)胞單層模型AKP活性(,n=3)

表2 Caco-2細(xì)胞單層模型AKP活性(,n=3)

注:與BL側(cè)比較,**P<0.01;1金氏單位=7.14 U·L–1。

3.2 不同質(zhì)量濃度化合物對Caco-2細(xì)胞活性的影響

結(jié)果表明,水晶蘭苷質(zhì)量濃度≤0.126 6 mg·mL–1、去乙酰車葉草苷酸質(zhì)量濃度≤0.062 5 mg·mL–1時,Caco-2 細(xì)胞存活率>98%,可在此質(zhì)量濃度范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn);在各質(zhì)量濃度耐斯糖作用下,Caco-2 細(xì)胞存活率均大于98%,且質(zhì)量濃度越小細(xì)胞存活率越高(表3),故選取0.312 5 mg·mL–1作為其最小質(zhì)量濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

表3 不同質(zhì)量濃度化合物作用下Caco-2細(xì)胞存活率(n=3)

3.3 不同pH化合物對Caco-2細(xì)胞活性的影響

在pH為7.4時,3種成分對Caco-2 細(xì)胞活性影響均最?。ū?),因此選擇pH 7.4進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表4 不同pH化合物作用下Caco-2細(xì)胞存活率(n=3)

3.4 方法學(xué)考察結(jié)果

巴戟天中3 個化合物的回歸方程及線性范圍見表5。比較HBSS,水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖對照品溶液和經(jīng)細(xì)胞膜透過后各化合物色譜圖。結(jié)果表明,HBSS 無雜質(zhì)干擾,HBSS 對各成分無干擾(圖3~4)。

圖3 HBSS、水晶蘭苷與去乙酰車葉草苷酸對照品溶液及經(jīng)細(xì)胞單層模型透過后各化合物HPLC圖

表5 巴戟天中3個化合物的回歸方程及線性范圍

精密度試驗(yàn)結(jié)果表明,水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖日內(nèi)精密度的RSD 分別為1.71%、1.88%、1.97%,日間精密度RSD 分別為1.74%、1.70%、1.91%,表明方法精密度良好。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明,水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖含量RSD 的分別為1.12%、1.60%、1.05%,表明該方法重復(fù)性較好。穩(wěn)定性結(jié)果表明,水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、耐斯糖峰面積RSD分別為1.80%、1.90%、1.78%,說明儀器在此實(shí)驗(yàn)條件下12 h內(nèi)穩(wěn)定。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表明,水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖的平均加樣回收率分別為98.09%、101.14%、100.49%,RSD 分別為0.97%、1.54%、1.59%,見表6。

表6 巴戟天中3個化合物的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

圖4 HBSS、耐斯糖對照品溶液及經(jīng)細(xì)胞單層模型透過后耐斯糖HPLC圖

3.5 跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)

3.5.1 化合物不同質(zhì)量濃度對轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 90 min內(nèi),3 個質(zhì)量濃度水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖的Papp均大于1×10–5cm·s–1,說明三者體內(nèi)吸收均良好。相比于高滲透性對照藥鹽酸普萘洛爾[Papp為(0.423 0±0.056 9)×10–4cm·s–1)],三者均為高滲透性化合物。在90 min 時間內(nèi),PappAP-BL與PappBL-AP 的比值均接近1,說明這3 個成分在轉(zhuǎn)運(yùn)此過程中無方向性。加入P-gp 抑制劑維拉帕米后Papp變化不大,說明水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖的小腸吸收不需要載體,其吸收機(jī)制可能是被動吸收(表7)。

表7 水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖在Caco-2細(xì)胞單層模型中的Papp(,n=6)

表7 水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖在Caco-2細(xì)胞單層模型中的Papp(,n=6)

注:PappV為加入維拉帕米后的Papp。

3.5.2 化合物作用不同時間對轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 如圖5所示,隨著時間的延長,3 個化合物雙側(cè)Papp均呈增加趨勢,且低質(zhì)量濃度組雙側(cè)Papp明顯大于中、高質(zhì)量濃度組,說明三者的小腸吸收可能存在自身質(zhì)量濃度抑制現(xiàn)象。

圖5 不同質(zhì)量濃度水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖的Papp隨時間變化情況(,n=6)

4 討論

本實(shí)驗(yàn)中篩選化合物質(zhì)量濃度時發(fā)現(xiàn),即使最大質(zhì)量濃度的耐斯糖也未對Caco-2 細(xì)胞活性造成影響,這可能是由于此細(xì)胞營養(yǎng)液中需要大量糖分供給,耐斯糖作為營養(yǎng)物質(zhì)不會對細(xì)胞活性產(chǎn)生影響。在水晶蘭苷的液相色譜圖中無其他物質(zhì)的明顯色譜峰出現(xiàn),而在去乙酰車葉草苷酸的液相色譜圖中可見少量水晶蘭苷的色譜峰,可見在跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程中可能有少量的去乙酰車葉草苷酸轉(zhuǎn)化成水晶蘭苷,推測去乙酰車葉草苷酸可能存在首過代謝。

在Caco-2 細(xì)胞單層模型中,通常認(rèn)為吸收完全的藥物Papp高(>1×10–6cm·s–1),吸收不完全的藥物Papp低(0.1×10–6~1.0×10–6cm·s–1)[17]。本實(shí)驗(yàn)中水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖3 個成分的Papp均大于10–5cm·s–1,說明這3 個成分在小腸內(nèi)的吸收均良好??梢酝ㄟ^計(jì)算藥物在小室雙側(cè)Papp的比值判斷藥物的吸收機(jī)制[18-19],在加入維拉帕米后,若得到幾乎不變的Papp,則說明藥物為被動吸收機(jī)制。本研究考察了水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖質(zhì)量濃度、時間、pH與P-gp抑制劑維拉帕米在水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸和耐斯糖吸收轉(zhuǎn)運(yùn)況的影響,在90 min內(nèi),不同質(zhì)量濃度的化合物雙側(cè)Papp比值均接近1,且加入維拉帕米后不同質(zhì)量濃度藥液Papp差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,進(jìn)一步證實(shí)這3 個成分在小腸內(nèi)主要以被動轉(zhuǎn)運(yùn)為主。

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