李 潔，高 博，吳愛睿，鄭愛斌，趙 麗，齊國濤，朱才業(yè)

（1.甘肅省白銀市白銀區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，甘肅 白銀 730900；2.甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅 平?jīng)?744000；3.甘肅省白銀市平川區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心，甘肅 白銀 730913；4.甘肅省白銀市平川區(qū)動物疫病預(yù)防與控制中心，甘肅 白銀 730913；5.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅 蘭州 730070）

小反芻獸疫（PPR）是由小反芻動物麻疹病毒（SRMV）引起的一種傳染性極強(qiáng)的小反芻動物疾病，原稱小反芻獸疫病毒（PPRV）[1]。PPRV（副粘病毒科，麻疹病毒屬）在綿羊和山羊中引起一種急性發(fā)熱性疾病，受感染畜群的發(fā)病率和死亡率均較高。副粘病毒都具有負(fù)性、非節(jié)段的RNA基因組，其宿主范圍和致病決定因素已被利用反向遺傳學(xué)進(jìn)行了廣泛研究[2]。小反芻獸疫（PPR）是山羊和綿羊的一種病毒性疾病，最早于20世紀(jì)40年代在西非發(fā)現(xiàn)，自1993年以來在中東和南亞流行，但印度對該病毒的首次描述是1987年[3]。2007年我國西藏西南部阿里地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)了PPRV，2013年12月新疆維吾爾族自治區(qū)發(fā)現(xiàn)PPRV，2014年4—5月，安徽、貴州、廣西、湖北、湖南、山西、新疆、云南和浙江等地區(qū)暴發(fā)PPRV[4]。目前PPR在接種疫苗后得到了有效控制，但部分養(yǎng)殖場仍受到該病的嚴(yán)重侵害，這可能源于疫苗免疫未成功導(dǎo)致某些個體或畜群未得到免疫保護(hù)。

目前規(guī)?；蝠B(yǎng)殖場都對PPR進(jìn)行了免疫接種，但在抗體檢測時常發(fā)現(xiàn)存在羔羊免疫失敗的現(xiàn)象。因此，研究影響PPR疫苗免疫效果的因素是非常重要的。母源抗體可通過幼齡動物吸吮母乳時獲得，形成免疫保護(hù)機(jī)制，在幼畜母源抗體滴度較高時進(jìn)行免疫接種，會導(dǎo)致免疫效果不佳甚至免疫效價為0，因此對幼畜免疫時要針對母源抗體的干擾作用設(shè)定首免日齡[5]。免疫前應(yīng)調(diào)查待免畜群的生理狀態(tài)，避免在機(jī)體恢復(fù)期或寄生蟲感染的情況下進(jìn)行疫苗接種[6]。機(jī)體免疫功能在應(yīng)激狀態(tài)下會對免疫效果產(chǎn)生抑制作用，待免畜群處于惡劣環(huán)境時不宜接種[7]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 試驗羊只為某養(yǎng)殖場同期分娩的經(jīng)產(chǎn)綿羊20只（于分娩前28 d皮下注射小反芻獸疫活疫苗1 ml）及其所產(chǎn)的20只羔羊。1.1.2 主要試劑與儀器 小反芻獸疫活疫苗，由新疆天康生物股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號2021006-1；小反芻獸疫病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，由青島立見生物科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20 172113；酶標(biāo)分析儀（型號DNM－9606）購自北京普朗新技術(shù)有限公司；智能生化培養(yǎng)箱（型號150A）購自金壇市醫(yī)療儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集、處理方法 將20只母羊分別于免疫后第7 d、第14 d、第21 d、第28 d進(jìn)行頸靜脈采血；20只羔羊分別于出生第0 d、第7 d、第14 d、第28 d、第45 d、第60 d、第90 d進(jìn)行頸靜脈采血。使用真空采血管每管采集3 ml左右全血，4 ℃過夜靜置后分離血清，同時進(jìn)行標(biāo)記，于-20 ℃保存。

1.2.2 抗體水平檢測 用小反芻獸疫病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒檢測待檢血清中PPRV的抗體水平，根據(jù)試劑盒說明書判定結(jié)果，即待檢血清阻斷率PBs＞50，結(jié)果判為陽性；PBs≤50，結(jié)果判為陰性。

待檢血清阻斷率PBs=100-ODs/ODcm*100。

2 試驗結(jié)果

2.1 母羊抗體檢測結(jié)果

由表1可知，母羊接種疫苗后第14 d的抗體陽性率為80%，符合國家制定的合格率標(biāo)準(zhǔn)（合格率≥70%）。接種后第21 d抗體陽性率達(dá)到90%，具有較高的保護(hù)率。接種后第28 d抗體陽性率達(dá)100%，全部免疫合格。

表1 母羊抗體檢測結(jié)果

2.2 羔羊抗體檢測結(jié)果

由表2可知，羔羊剛出生時由于未吸吮母乳，體內(nèi)未產(chǎn)生母源抗體；出生第7 d、第14 d的母源抗體陽性率達(dá)100%；出生第28 d、第45 d的母源抗體陽性率分別為95%、85%，說明羔羊在45日齡以前均可得到母源抗體較好的保護(hù)，可防止PPRV早期侵入；出生第60 d母源抗體陽性率下降到70%，剛達(dá)到國家規(guī)定的免疫合格率；出生第90 d母源抗體陽性率降為45%，說明隨著羔羊日齡的增加母源抗體水平呈明顯下降趨勢。建議在羔羊60日齡左右免疫接種PPR疫苗。

表2 羔羊母源抗體檢測結(jié)果

3 討論

3.1 PPR活疫苗的免疫效果

PPR嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展，我國將其列為一類動物疫病，嚴(yán)格落實免疫程序是提高免疫效率及防控PPR的重要途徑[8]。對白銀市白銀區(qū)小反芻獸疫疫苗臨床免疫效果的調(diào)查顯示，沒有出現(xiàn)不良反應(yīng)，懷孕母羊未因免疫而出現(xiàn)流產(chǎn)現(xiàn)象。白銀區(qū)進(jìn)行疫苗免疫后，沒有發(fā)生小反芻獸疫疫情，可見該疫苗的安全性較高[9]。本試驗對懷孕母羊進(jìn)行PPR免疫，分別于不同時期進(jìn)行抗體檢測，結(jié)果表明，在免疫后第14 d抗體合格率達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)，免疫后第21 d抗體陽性率達(dá)90%，免疫后第28 d全部呈陽性，這與任楊等[10]的研究結(jié)果一致。

3.2 母源抗體的消長規(guī)律

母源抗體的衰減會抑制疫苗接種，如麻疹疫苗接種后血清轉(zhuǎn)化的抑制。這一現(xiàn)象在人類醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)中都有描述，與所使用的疫苗類型無關(guān)，與母源抗體的數(shù)量有關(guān)，母源抗體滴度越高，持續(xù)時間越長[11]。母源抗體是影響疫苗免疫效果的因素之一，在羔羊PPRV母源抗體滴度相對較高時免疫，會抑制機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)抗體，從而造成免疫效果不佳或失敗[12]。本試驗對綿羊羔羊進(jìn)行母源抗體水平檢測，結(jié)果表明羔羊出生后第7 d、第14 d母源抗體陽性率均為100%，第60 d母源抗體陽性率為70%，第90 d母源抗體陽性率降至45%。李芳等[13]研究表明大部分羔羊在60日齡后，母源抗體水平顯著下降，因此建議羔羊的首免時間為60日齡前后。田凱鴿[14]研究表明不同養(yǎng)殖模式下羔羊PPRV母源抗體在放養(yǎng)時比圈養(yǎng)的持續(xù)時間長，這與放養(yǎng)羔羊一直可以吸吮母乳有關(guān)。

4 結(jié)論

PPR活疫苗接種后第28 d抗體檢測合格率可達(dá)100%，在實際生產(chǎn)過程中可根據(jù)此日齡進(jìn)行采血送檢。綿羊羔羊PPR活疫苗接種建議在60日齡前后。由于影響羔羊母源抗體的因素較多，母源抗體消長水平會有所不同，需根據(jù)檢測結(jié)果制定較完善的免疫程序。