吳挺明，車憲平，徐 磊，胡鑫明，符仕寶

海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院泌尿外科，海南?？?570311

前列腺癌是中老年男性常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，相關(guān)統(tǒng)計顯示，我國2015年前列腺癌預(yù)期發(fā)病率和病死率分別為6.03/100 000、2.66/100 000[1-2]。前列腺癌早期常無特異性癥狀，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，預(yù)后差[3]。目前，前列腺癌發(fā)生的確切分子機(jī)制尚不清楚。因此，深入研究與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后相關(guān)的分子機(jī)制，對前列腺癌早期診斷和靶向治療具有重要意義。蛋白磷酸酶2A(PP2A)的癌性抑制因子(CIP2A)是一種癌蛋白，可抑制PP2A對癌蛋白c-Myc的水解，上調(diào)c-Myc水平，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[4]。另外，惡性腫瘤發(fā)生時常伴有大量微小RNA(miRNA)異常表達(dá)[5]。既往臨床及基礎(chǔ)研究已證實，前列腺癌患者組織中CIP2A mRNA、miR-802均異常表達(dá)[6-7]，但相關(guān)生物學(xué)影響機(jī)制尚不明確。基于此，本研究探討CIP2A mRNA、miR-802與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系及對患者預(yù)后的預(yù)測價值，旨在為該疾病靶向治療研究提供參考依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年2月至2017年12月本院收治的前列腺癌患者84例作為觀察組，另選取同期收治的46例良性前列腺增生患者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：前列腺癌患者均行前列腺癌根治手術(shù)，經(jīng)病理組織活檢確診為前列腺癌；前列腺增生患者符合文獻(xiàn)[8]中良性前列腺增生診斷標(biāo)準(zhǔn)，行電切手術(shù)；患者臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并冠心病、高血壓或(和)糖尿病等疾??；合并其他惡性腫瘤；合并呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)等感染性疾??；嚴(yán)重心、肝、肺、腎等重要臟器功能不全。觀察組：年齡52～77歲，平均(64.82±4.76)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18～27 kg/m2，平均(22.51±1.76)kg/m2；臨床分期T1～T2期43例，T3～T4期41例；Gleason評分2～7分53例，8～10分31例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例；病理分級G1級25例，G2級32例，G3級27例。對照組：年齡55～79歲，平均(66.03±6.31)歲；BMI 18～28 kg/m2，平均(22.74±1.91)kg/m2。兩組年齡、BMI比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已告知患者及家屬，均知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2方法 (1)治療：前列腺癌患者術(shù)后均根據(jù)病情采用抗雄激素藥物治療。(2)標(biāo)本采集：觀察組取前列腺癌組織，對照組取前列腺增生組織，送常規(guī)病理檢查。(3)CIP2A mRNA、miR-802檢測：Trizol試劑盒(美國Invitrogen)提取組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA，利用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測組織中CIP2A mRNA、miR-802表達(dá)水平，相對表達(dá)量根據(jù)2-ΔΔCt計算，引物由上海生工生物工程公司合成。

1.3觀察指標(biāo) (1)兩組CIP2A mRNA、miR-802水平。(2)癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。(3)術(shù)后隨訪3年，統(tǒng)計生存、死亡病例數(shù)，分析預(yù)后相關(guān)因素及癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平對前列腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值。

2 結(jié) 果

2.1兩組CIP2A mRNA、miR-802水平 觀察組CIP2A mRNA水平高于對照組(P<0.05)，miR-802水平低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組CIP2A mRNA、miR-802水平對比

2.2癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 ≤60歲患者與>60歲患者癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同臨床分期、Gleason評分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理分級、PSA水平的患者間癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3預(yù)后的單因素分析 術(shù)后隨訪3年，失訪病例5例，有效隨訪79例，其中生存56例，死亡23例，總生存率為70.89%。CIP2A mRNA、miR-802以均值為界，≤均值為低水平，>均值為高水平。臨床分期、Gleason評分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級、PSA、CIP2A mRNA、miR-802水平為影響前列腺癌患者術(shù)后3年生存的因素(P<0.05)。見表3。

表3 預(yù)后的單因素分析[ n(%)]

2.4Cox回歸模型分析 以前列腺癌患者術(shù)后3年生存情況為因變量，死亡賦值為1，生存為0，將表3中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量，應(yīng)用Cox回歸模型分析，結(jié)果顯示，將臨床分期、Gleason評分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級、PSA水平控制后，CIP2A mRNA高水平、miR-802低水平仍是術(shù)后3年生存的影響因素(P<0.05)。見表4。

2.5癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平對前列腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值 繪制CIP2A mRNA、miR-802水平預(yù)測前列腺癌患者預(yù)后的ROC曲線，結(jié)果顯示，CIP2A mRNA、miR-802單項檢測預(yù)測預(yù)后的曲線下面積(AUC)分別為0.905、0.912；應(yīng)用SPSS軟件的聯(lián)合應(yīng)用ROC理論模式，構(gòu)建各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測預(yù)后的ROC模型，結(jié)果顯示，聯(lián)合預(yù)測的AUC最大，為0.948。見圖1、表5。

圖1 CIP2A mRNA、miR-802檢測預(yù)測前列腺癌患者預(yù)后的ROC曲線

表4 Cox回歸模型分析

表5 癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平對前列腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值

3 討 論

前列腺癌是來源于上皮細(xì)胞的一種惡性腫瘤[9]。目前根治性手術(shù)是早期前列腺癌主要的治療手段，但晚期轉(zhuǎn)移性前列腺癌或去勢抵抗前列腺癌尚無有效治療手段，故深入探索前列腺癌發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的相關(guān)分子機(jī)制對指導(dǎo)完善治療方案具有重要價值。

CIP2A是腫瘤抑制因子，可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡，且在腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用[10-11]。既往研究證實，CIP2A在前列腺癌、膀胱癌、肺癌均有異常表達(dá)，與癌癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[12]。但前列腺癌中CIP2A生物學(xué)影響機(jī)制尚不明確。本研究數(shù)據(jù)顯示，前列腺癌患者CIP2A mRNA水平高于良性前列腺增生患者，且不同臨床分期、Gleason評分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級、PSA水平的患者間癌組織CIP2A mRNA水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。分析其機(jī)制可能為：(1)癌蛋白c-Myc過表達(dá)會導(dǎo)致正常細(xì)胞無限增殖，誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。PP2A可破壞c-Myc穩(wěn)定性，并經(jīng)泛素化途徑降解c-Myc，以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡。而CIP2A能通過結(jié)合PP2A，抑制PP2A對c-Myc的去磷酸化作用，上調(diào)c-Myc表達(dá)，這可能是CIP2A促進(jìn)前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制[13]。(2)CIP2A結(jié)合PP2A形成的復(fù)合物可增強雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物Ⅰ活性，抑制細(xì)胞自噬[14]。張延輝等[15]研究顯示，小干擾RNA(siRNA)干擾CIP2A表達(dá)后前列腺癌 DU-145細(xì)胞G1期到S期轉(zhuǎn)換受阻，且DU-145細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力降低。孫超等[16]研究表明，經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染的前列腺癌細(xì)胞CIP2A蛋白、mRNA表達(dá)及穿膜細(xì)胞數(shù)、增殖力均降低。這些研究均提示CIP2A可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖，增強其侵襲力，支持本研究結(jié)論。

miR-802屬miRNA家族，定位于人染色體21q22.12，其可參與構(gòu)成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)，而RISC通過不完全堿基配對識別靶mRNA，使其翻譯抑制或去穩(wěn)定化。有研究報道，肝癌、舌鱗癌等惡性腫瘤中miR-802表達(dá)下調(diào)，可引起其靶基因MAP2K4高表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展[17-18]。本研究數(shù)據(jù)顯示，前列腺癌患者miR-802低表達(dá)，且參與前列腺癌惡性進(jìn)展，與高永亮等[19]研究相似。其機(jī)制可能為miR-802抑制靶基因Flotillin-2的作用降低，引起Flotillin-2表達(dá)增加，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。RAB23是miR-802的生物學(xué)靶點，其表達(dá)增加可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞G1期阻滯，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并可促進(jìn)Gli1、Gli2表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖，還可直接促進(jìn)Rac1表達(dá)，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[20]。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-802在轉(zhuǎn)錄后抑制RAB23表達(dá)，參與胃癌進(jìn)展[21]。這也可能是miR-802促進(jìn)前列腺癌發(fā)生及惡性進(jìn)展的機(jī)制之一，但具體通路仍有待進(jìn)一步驗證。

本研究進(jìn)一步分析了癌組織CIP2A mRNA、miR-802水平與前列腺癌預(yù)后的關(guān)系，Cox回歸模型分析顯示，將臨床分期、Gleason評分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級、PSA水平控制后，CIP2A mRNA高水平、miR-802低水平仍是術(shù)后3年生存的影響因素(P<0.05)，提示CIP2A mRNA、miR-802表達(dá)可作為預(yù)測前列腺癌的預(yù)后分子標(biāo)志物?；贚ogistic回歸的ROC曲線可用于聯(lián)合指標(biāo)診斷效能評價。本研究結(jié)果顯示，CIP2A mRNA、miR-802聯(lián)合檢測預(yù)測前列腺癌預(yù)后的AUC為0.948，靈敏度為78.26%，特異度為94.64%。這結(jié)果提示同時檢測癌組織中CIP2A mRNA、miR-802的表達(dá)可為預(yù)測前列腺癌患者的預(yù)后提供有效參考。

綜上所述，CIP2A mRNA高表達(dá)、miR-802低表達(dá)與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展及患者預(yù)后有關(guān)，有望成為前列腺癌治療的新靶點，指導(dǎo)個體化治療，改善患者預(yù)后。