鄧日輝 劉麗燕 謝偉柯 劉明嶺 張桂榮

鼻咽癌為耳鼻咽喉惡性腫瘤之首，全球約80%的鼻咽癌發(fā)生在中國偏南地區(qū)和東南亞地區(qū)。EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）感染是鼻咽癌發(fā)生的重要致病因素，感染后機(jī)體可產(chǎn)生多種EBV 抗體如NA1-IgA、EA-IgA、VCA-IgA、Rta-IgG 等。由于鼻咽癌病變早期不易診斷，因此提高EBV 抗體診斷效能,對早期發(fā)現(xiàn)診斷鼻咽癌尤為重要。本研究擬檢測鼻咽癌患者及健康人血清EBV 抗體，通過比較抗體單項(xiàng)檢測與聯(lián)合檢測之間的診斷效能，評價(jià)EBV 抗體聯(lián)合檢測對鼻咽癌的篩查價(jià)值。

資料與方法

1 一般資料

選取2020 年3 月1 日～2021 年6 月31 日在我院確診的205 例鼻咽癌患者及同期就診的108 例健康體檢人員血清進(jìn)行EBV 抗體檢測。鼻咽癌組為205 例經(jīng)病理活檢確診的患者，臨床分期根據(jù)鼻咽癌UICC/AJCC 第七版分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，分別代表從早期到晚期的鼻咽癌分期[1]；病理分類依據(jù)2003 年國際病理分型標(biāo)準(zhǔn)[2]。其中臨床Ⅰ期75 例，Ⅱ期52 例，Ⅲ期48 例，Ⅳ期30 例，男性132例，女性73 例，平均年齡為（47±9.1）歲；健康對照組為108 例健康體檢人群，男性72 例，女性36 例，平均年齡為（45±10.5）歲。各組性別與年齡比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），資料具有可比性。同時(shí)排除嚴(yán)重感染、心腎功能障礙者。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 試劑

采用ELISA 試劑：EBV 試劑VCA-IgA（安圖生物公司，貨號：HB02546）、EA-IgA（安圖生物公司，貨號：HB02260）、IgGRta-IgG（同昕生物公司，貨號：AU020752）、NA1-IgA（同昕生物公司，貨號：AU 030308）。

2.2 儀器

實(shí)驗(yàn)所用Elx50 型洗板機(jī)、Elx800 型酶標(biāo)儀均購自美國Biotek 公司。

2.3 檢測方法

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測EBV 抗體VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒的說明書及儀器的操作規(guī)定進(jìn)行操作，結(jié)果判定：檢測樣本吸光度值與校準(zhǔn)品值相比較，比值≥1.1 判斷為陽性[3]。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，兩種并聯(lián)檢測敏感度=敏感度甲+（1-敏感度甲）×敏感度乙，并聯(lián)檢測特異度=特異度甲×特異度乙；兩種串聯(lián)檢測敏感度=敏感度甲×敏感度乙，串聯(lián)檢測特異度=特異度甲+（1-特異度甲）×特異度乙，更多項(xiàng)檢測聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其并聯(lián)檢測、串聯(lián)檢測的敏感度和特異度按同理進(jìn)行計(jì)算[4]。鼻咽癌組和健康對照組EBV 抗體陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；診斷效能比較采用4 種EBV 抗體聯(lián)合檢測分別與其他檢測組合進(jìn)行比較，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 鼻咽癌組血清EBV 抗體VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 陽性 率分別 為70.73%、41.46%、44.39%、58.05%；對照組陽性率分別為12.96%、8.33%、7.41%、10.19%，鼻咽癌組抗體陽性率顯著高于健康對照組（P＜0.01），見表1。其中，EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 在鼻咽癌Ⅲ期和Ⅳ期的陽性率顯著高于鼻咽癌Ⅰ期、Ⅱ期的陽性率（P＜0.01），VCA-IgA在Ⅲ期和Ⅳ期陽性率顯著高于鼻咽癌Ⅰ期的陽性率（P＜0.01）。鼻咽癌Ⅰ期VCA-IgA 陽性率顯著高于EA-IgA、NA1-IgA（P＜0.05）和Rta-IgG（P＜0.01）；鼻咽癌Ⅱ期VCA-IgA 陽性率顯著高于EA-IgA、NA1-IgA 和Rta-IgG（P＜0.01），見表2。

表1 兩組血清EBV 抗體的陽性率比較（例，%)

表2 EBV 抗體陽性率與鼻咽癌臨床分期的相關(guān)性比較（例，%)

2 VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG 和NA1-IgA

四種抗體并聯(lián)檢測的靈敏度最高，顯著高于EBV 抗體單項(xiàng)、任意2 種或3 種抗體并聯(lián)檢測（P＜0.05 或P＜0.01）；特異度顯著低于單項(xiàng)檢測及任意2種抗體（VCA-IgA 和NA1-IgA 聯(lián)合檢測除外）并聯(lián)檢測（P＜0.05 或P＜0.01）；4 種抗體聯(lián)合檢測陰性預(yù)測值顯著高于單項(xiàng)抗體檢測（P＜0.01），見表3。4 種抗體串聯(lián)檢測的特異度（99.99%）高于并聯(lián)檢測的特異度（66.35%）。見表4。

表3 四種EBV 抗體聯(lián)合檢測與EB 抗體單項(xiàng)、任意2 種或3 種抗體聯(lián)合檢測對鼻咽癌的診斷效能比較（例，%）

表4 四種EBV 抗體的并聯(lián)檢測與串聯(lián)檢測的靈敏度和特異度（例，%）

討論

鼻咽癌為耳鼻喉科最常見的惡性腫瘤，約占上呼吸道癌的93%[5]，鼻咽癌原發(fā)部位較為隱蔽，早期無明顯臨床癥狀、惡性程度較高、嚴(yán)重威脅患者的生活質(zhì)量[6]。大部分成年人感染過EBV，鼻咽部上皮細(xì)胞是EBV 長期潛伏增殖場所，機(jī)體免疫功能紊亂或下降時(shí)，潛伏在上皮組織細(xì)胞的EBV 會(huì)活化，激活免疫系統(tǒng)產(chǎn)生EBV 抗體VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 等抗體[7-9]。

潛伏在細(xì)胞核內(nèi)的EBV 一旦激活可導(dǎo)致相關(guān)疾病如鼻咽癌的發(fā)生[10，11]。篩查鼻咽癌的有血清學(xué)方法、病理檢查、CT 掃描及鼻咽鏡檢查，目前最常用、便捷的篩查方法為EBV 抗體血清學(xué)檢測。本研究采用ELISA 方法檢測鼻咽癌患者血清EBV 抗體VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 的陽性率分別為70.73%、41.46%、44.39%、58.05%，健康人陽性率僅為12.96%、8.33%、7.41%、10.19%，鼻咽癌患者4 種EBV 抗體陽性率均顯著高于健康人群（P＜0.01），表明這4 種抗體是鼻咽癌篩查的有效指標(biāo)。在比較鼻咽癌不同臨床分期的抗體陽性率時(shí)，EAIgA、Rta-IgG、NA1-IgA 在鼻咽癌Ⅲ期和Ⅳ期的陽性率顯著高于鼻咽癌Ⅰ期、Ⅱ期的陽性率（P＜0.01），VCA-IgA 在鼻咽癌Ⅲ期和Ⅳ期陽性率顯著高于鼻咽癌Ⅰ期的陽性率（P＜0.01）。表明中晚期鼻咽癌患者血清EBV 抗體的陽性率更高。鼻咽癌Ⅰ期和Ⅱ期患者中，VCA-IgA 的陽性率顯著高于EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA（P＜0.05 或P＜0.01）。說明VCA-IgA 可作為鼻咽癌早期篩查的靈敏指標(biāo)；EA-IgA 和Rta-IgG 對鼻咽癌的靈敏度較低，可能與EA-IgA 抗體在患者血清含量少及放射治療導(dǎo)致Rta-IgG 水平下降有關(guān)[12，13]。

診斷疾病時(shí)常采用多項(xiàng)診斷試驗(yàn)檢查同一對象，以提升診斷的靈敏度或特異度，這種方式稱為聯(lián)合試驗(yàn)。根據(jù)聯(lián)合的形式，分為串聯(lián)與并聯(lián)。并聯(lián)試驗(yàn)指患者同時(shí)接受多項(xiàng)檢查時(shí)，有陽性結(jié)果就會(huì)進(jìn)行后續(xù)的診斷。這種方法提高了檢測靈敏度，使漏診率下降，但導(dǎo)致特異度降低。串聯(lián)試驗(yàn)指做幾項(xiàng)試驗(yàn)，全部試驗(yàn)結(jié)果均為陽性者才定為陽性。這樣提高了檢測特異度，卻降低了靈敏度[1]。實(shí)際工作中我們需權(quán)衡診斷試驗(yàn)的目的、費(fèi)用、復(fù)雜程度等多個(gè)因素選擇適合的試驗(yàn)方式。有研究表明EBV 抗體VCA-IgA 聯(lián)合NA1-IgA 或EA-IgA 聯(lián)合檢測能提高鼻咽癌的檢測效能，是目前常見的聯(lián)合檢測方式，有利于鼻咽癌的早期篩查[12，13]。VCA-IgA、EAIgA、Rta-IgG、NA1-IgA 聯(lián)合檢測的陰性預(yù)測值顯著高于EBV 抗體單項(xiàng)檢測（P＜0.01）。這4 種抗體并聯(lián)檢測時(shí)，靈敏度高達(dá)96.00%，顯著高于單項(xiàng)抗體、任意2 種或3 種EBV 抗體并聯(lián)檢測（P＜0.05 或P＜0.01）；4 種抗體并聯(lián)檢測特異度較差，顯著低于單項(xiàng)檢測及任意2 種抗體（VCA-IgA 和NA1-IgA 聯(lián)合檢測除外）并聯(lián)檢測（P＜0.05 或P＜0.01），當(dāng)者4種抗體串聯(lián)檢測時(shí)，可提高聯(lián)合檢測的特異度特異度達(dá)99.99%。因此，在進(jìn)行鼻咽癌篩查時(shí)，可采用4種抗體并聯(lián)檢測來提高檢測靈敏度，降低漏診率，同時(shí)采用4 種抗體串聯(lián)檢測來提高檢測特異度，兩種聯(lián)合方式相互補(bǔ)充，提高鼻咽癌的篩查效能。

綜上所述，VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 聯(lián)合檢測做到了EBV 抗體全覆蓋，篩查更全面，彌補(bǔ)了單一指標(biāo)檢測的不足。鼻咽癌篩查時(shí)，可采用4 種抗體并聯(lián)檢測來提高鼻咽癌篩查的靈敏度，降低漏診率；采用串聯(lián)檢測來提高特異性，為鼻咽癌的篩查提供更高可靠性。