熊永高 彭麗紅 張勇科 李林株

廣東醫(yī)科大學(xué)附屬佛山高明醫(yī)院，廣東 佛山 528500

研究表明，超過80%的前列腺癌患者伴有轉(zhuǎn)移[1］。前列腺癌患者是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，對治療方案的選擇和患者五年生存率均至關(guān)重要。長期以來，研究者對癌癥轉(zhuǎn)移的預(yù)測因子關(guān)注較多。研究表明，胃癌根治術(shù)后預(yù)后不良組的患者血清膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因1（glioma-associated oncogene 1，Gli1）水平高于預(yù)后良好組，其水平高低對預(yù)測胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移具有重要參考價值[2］；前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）升高，其水平可作為總生存率的獨立預(yù)測因子[3］。研究證實，與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的Hh-Gli1 信號通路中，Gli1 靶基因研究涉及與血管生成相關(guān)的VEGF[4-6］?；谏鲜鲅芯?，本研究通過檢測前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平，分別比較低Gli1 組和高Gli1 組、低VEGF 組和高VEGF 組患者的病理特征分布差異，比較轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移患者兩個指標差異，并探討兩個指標與前列腺癌轉(zhuǎn)移可能存在的相關(guān)性，利用ROC 曲線評估二者對前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價值，為診斷前列腺癌轉(zhuǎn)移提供更多有價值的檢測指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取2015 年1 月至2020 年12 月于我院確診為前列腺癌的患者174 例，年齡55~75 歲，平均（65.21±8.32）歲，Gleason 評分＜8 分100 例，≥8 分74 例；臨床T 分期，T1/T2 期共94 例，T3/T4 期共80 例。按照有無轉(zhuǎn)移分組，轉(zhuǎn)移組70 例，年齡55~75 歲，平均（66.14±8.41）歲；未轉(zhuǎn)移組104 例，年齡55~75 歲，平均（65.01±8.22）歲，兩組年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 入選標準 納入標準：①年齡55~75 歲；②所有患者均經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)下行前列腺穿刺活檢，一部分初次病理診斷為原發(fā)性局限性前列腺癌，另一部分患者初次確診為轉(zhuǎn)移性前列腺癌，可通過全身骨掃描以及X 線、CT 和MRI 檢查明確診斷[7］，且在本次確診前從未采取任何手術(shù)和藥物治療；③所有患者的臨床病理資料完整，包括Gleason 評分、臨床T 分期和轉(zhuǎn)移情況；④依從性較好，患者愿意配合抽血檢測；⑤愿意簽署知情同意書。排除標準：①合并有其他腫瘤病史者；②有前列腺手術(shù)史者；③合并有嚴重心肺腎功能障礙者。

1.3 檢測方法 所有患者抽取空腹肘靜脈血5mL，置于抗凝管中，離心取上清液于-80℃保存，分批檢測。采用ELISA 法，檢測血清Gli1 水平采用雙抗體夾心法，試劑盒購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，檢測血清VEGF 水平采用雙單抗夾心法，試劑盒購自上海瑤韻生物科技有限公司，均嚴格按照操作說明書操作。

1.4 觀察指標 收集所有患者的臨床病理資料，檢測所有患者血清Gli1 和VEGF 水平，分析上述兩個指標與臨床病理特征的相關(guān)性，根據(jù)血清Gli1 水平的中位數(shù)（8.35ng/mL），將前列腺癌組分為低Gli1 組（＜8.35ng/mL）和高Gli1 組（≥8.35ng/mL），根據(jù)血清VEGF 水平的中位數(shù)（159.30ng/mL），將前列腺癌組分為低VEGF 組（＜159.30ng/mL）和高VEGF 組（≥159.30ng/mL）。比較前列腺癌轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移患者血清Gli1 和VEGF 水平差異，分析前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平的相關(guān)性，分析二者是否是前列腺癌轉(zhuǎn)移的危險因素，采用ROC 曲線評估血清Gli1 和VEGF 水平以及聯(lián)合診斷對前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 24.0 進行統(tǒng)計分析。計量資料采用t 檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析，采用二元多因素Logistic 回歸分析血清Gli1 和VEGF 水平是否是前列腺癌轉(zhuǎn)移的獨立危險因素，采用ROC 曲線評估血清Gli1 和VEGF水平以及聯(lián)合檢測對前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價值。

2 結(jié)果

2.1 血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌患者病理特征分布差異 高Gli1 組的Gleason 分級≥8 分、T3/T4 期、前列腺癌已轉(zhuǎn)移的比例顯著高于低Gli1 組，高VEGF 組上述指標比例顯著高于低VEGF 組（均P＜0.05）。見表1。

表1 血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌患者病理特征分布差異（例）

2.2 兩組血清Gli1 和VEGF 水平比較 前列腺癌轉(zhuǎn)移組血清Gli1 和VEGF 水平均高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清Gli1 和VEGF 水平比較（ng/mL，±s）

表2 兩組血清Gli1 和VEGF 水平比較（ng/mL，±s）

組別 例數(shù) Gli1 VEGF未轉(zhuǎn)移組 104 6.41±0.69 135.48±20.03轉(zhuǎn)移組 70 9.26±0.92 188.00±28.26 t-8.085 -7.696 P 0.000 0.000

2.3 前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平的相關(guān)性前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平呈顯著正相關(guān)（r=0.811，P=0.000）。

2.4 危險因素分析 以血清Gli1 和VEGF 水平作為自變量，以前列腺癌是否轉(zhuǎn)移作為因變量，進行二元多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示血清Gli1 和VEGF水平是前列腺癌是否轉(zhuǎn)移的獨立危險因素（OR=1.011，P=0.036；OR=1.931，P=0.001）。

2.5 血清Gli1 和VEGF 水平以及聯(lián)合檢測對前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價值 ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清Gli1 和VEGF 水平診斷前列腺癌轉(zhuǎn)移的臨界值（cut-off值）分別為8.26ng/mL 和179.45ng/mL，靈敏度分別為100%和60.0%，特異度分別為61.5%和100%，曲線下面積（AUC）分別為0.898、0.879，二者聯(lián)合檢測的AUC 為0.932，靈敏度和特異度分別為88.6%和84.6%。見圖1。

圖1 血清Gli1 和VEGF 水平對前列腺癌轉(zhuǎn)移的ROC曲線分析

3 討論

近年來，我國前列腺癌發(fā)病率逐年上升，前列腺癌轉(zhuǎn)移患者亦逐年升高[8］。前列腺癌轉(zhuǎn)移包括前列腺癌原發(fā)病灶具有轉(zhuǎn)移特征，突破基底膜內(nèi)滲入血管，經(jīng)過血液轉(zhuǎn)運，再外滲出血管，遠處轉(zhuǎn)移并逐漸生長形成轉(zhuǎn)移瘤[7］。為了適應(yīng)轉(zhuǎn)移過程中不斷變化的周圍環(huán)境，細胞要有較高的可塑性，而細胞去分化過程，如上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化，可以促進腫瘤細胞從原位分離、遷移、重新分化或者進行間質(zhì)-上皮細胞轉(zhuǎn)變，最終定植于轉(zhuǎn)移部位[8］。研究發(fā)現(xiàn)，Hh-Gli1 信號通路以及下游靶基因VEGF 可能參與前列腺癌轉(zhuǎn)移[9］。Gli1 可以促進腫瘤細胞發(fā)生上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移[10］，Gli1 表達上調(diào)可促進前列腺癌細胞的增殖分化以及疾病發(fā)展進程[11］，抑制Gli1 的表達可以降低腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力[5］。VEGF 通過作用相應(yīng)受體來調(diào)節(jié)和促進血管內(nèi)皮細胞增殖、分化和新生血管生成[12］，前列腺腫瘤細胞的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移等生理學(xué)變化均依賴微血管為其供血[7］。研究表明，高表達的Gli1 與晚期原發(fā)腫瘤分期、陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、晚期臨床分期顯著相關(guān)，Gli1 陽性組微血管密度明顯高于陰性組[13］。前列腺癌組織中VEGF 高表達，微血管密度顯著增高，密度水平和血清VEGF 水平與腫瘤分級和病理分期密切相關(guān)[3，8］。

本研究結(jié)果顯示，高Gli1 組的Gleason 分級≥8 分、T3/T4 期、前列腺癌已轉(zhuǎn)移的比例顯著高于低Gli1 組，高VEGF 組上述指標比例顯著高于低VEGF 組，提示前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平越高，Gleason評分越高，T 分期越大，轉(zhuǎn)移發(fā)生率越高。施雪松等[2］研究發(fā)現(xiàn)胃癌根治術(shù)后7 天，預(yù)后不良組的血清Gli1水平顯著高于預(yù)后良好組，其水平高低是影響術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要因素。Duque JL 等[3］研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清VEGF 濃度顯著高于局限性前列腺癌患者和健康者，VEGF 濃度的高低可用于區(qū)分轉(zhuǎn)移性和局限性前列腺癌。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清Gli1 和VEGF 水平顯著高于未轉(zhuǎn)移者，與上述研究結(jié)論一致。

研究發(fā)現(xiàn)，Glil 可以促進VEGF 的表達從而提升腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力[5］，阻斷Hh 通路后，Gli1和VEGF 基因mRNA 和蛋白水平顯著下降[4］，可抑制血管生成和腫瘤細胞侵襲。本研究結(jié)果顯示，前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平呈顯著正相關(guān)，二者水平的高低是前列腺癌是否轉(zhuǎn)移的危險因素，說明VEGF很大可能是Gli1 的下游靶基因，通過激活Hh-Gli1 信號通路，增強Gli1 基因表達從而上調(diào)VEGF 的表達以促進血管生成和前列腺癌轉(zhuǎn)移，二者是靶基因調(diào)節(jié)關(guān)系，亦提示血清Gli1 和VEGF 的高水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移存在顯著相關(guān)性。謝喜等[14］研究結(jié)果亦顯示前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清VEGF 水平與骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生具有一定相關(guān)性。本研究進一步進行ROC 曲線分析，結(jié)果顯示血清Gli1 和VEGF 聯(lián)合檢測診斷前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷性能優(yōu)于單獨指標檢測，提示聯(lián)合檢測血清Glil 和VEGF 水平對前列腺癌轉(zhuǎn)移具有較好的診斷價值。

綜上所述，血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，二者聯(lián)合檢測對前列腺癌轉(zhuǎn)移具有一定的診斷價值。目前國內(nèi)有關(guān)血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究報道較少，本研究樣本量較少，需進行臨床多中心大樣本研究進一步驗證。