韓晶晶，董曉雷，楊方浩，劉國祥，楊麗娜，李冰

[摘要]目的? ? 探討C-藻藍(lán)蛋白（C-PC）對轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞增殖、遷移作用的影響。方法? ? 應(yīng)用CCK-8方法檢測不同濃度（0、50、100、200、400、800、1 600 mg/L）C-PC處理24、48 h對HeLa細(xì)胞增殖的影響;將HeLa細(xì)胞隨機(jī)分為對照組、TGF-β1處理組、TGF-β1與C-PC聯(lián)合處理組、C-PC處理組，分別給予相應(yīng)藥物處理，應(yīng)用細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)和Transwell法檢測HeLa細(xì)胞集落形成及遷移能力，qPCR方法檢測遷移相關(guān)因子mRNA的表達(dá)變化，Western blot方法檢測遷移相關(guān)蛋白Vimentin、E-cadherin、N-cadherin表達(dá)。結(jié)果? ? C-PC對HeLa細(xì)胞的增殖具有抑制作用，且呈濃度依賴性（F=189.300、127.400，P<0.05）;C-PC明顯抑制了TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞集落形成和遷移能力。與對照組相比，TGF-β1處理組HeLa細(xì)胞中[STBX]Slug、Twist、Snail、Zeb1的mRNA表達(dá)水平顯著升高（F=16.115～47.541，P<0.05），E-cadherin蛋白表達(dá)水平顯著降低（F=41.870～470.038，P<0.05），Vimentin、N-cadherin蛋白表達(dá)水平顯著升高（F=5.581～1 071.323，P<0.05），而加入C-PC共處理可逆轉(zhuǎn)上述改變。結(jié)論? ? C-PC能夠明顯抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞增殖和遷移，其作用機(jī)制可能與C-PC降低遷移相關(guān)因子的表達(dá)及調(diào)節(jié)E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的蛋白表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]HeLa細(xì)胞;藻青蛋白;轉(zhuǎn)化生長因子β1;細(xì)胞增殖;細(xì)胞遷移抑制

[中圖分類號]R737.33;R730.59

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號]2096-5532（2022）04-0494-06

doi：10.11712/jms.2096-5532.2022.58.069[HT]

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版]https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20220320.1553.008.html;[JY]2022-03-2210：11：18

EFFECTS OF C-PHYCOCYANIN ON PROLIFERATION AND MIGRATION OF CERVICAL CANCER HELA CELLS

HAN Jingjing， DONG Xiaolei， YANG Fanghao， LIU Guoxiang， YANG Lina， LI Bing

（Department of Biology， Basic Medicine， Qingdao University， Qingdao 266071， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the effects of C-phycocyanin （C-PC） on the proliferation and migration of HeLa cells induced by transforming growth factor-β1 （TGF-β1）.

Methods Cell Counting Kit-8 assay was used to determine the effects on the proliferation of HeLa cells after treatment by C-PC of different concentrations （0，50，100， 200，400，800， and 1 600 mg/L） for 24 and 48 h. The HeLa cells were divided into control group， TGF-β1 treatment group， TGF-β1+C-PC treatment group， and C-PC treatment group; then corresponding agents were administered. Cell clone assay， scratch assay， and Transwell assay were used to determine the colony formation and migration of the HeLa cells， quantitative PCR was used to determine the mRNA expression of migration-related factors， and Western blot was used to determine the expression of migration-related proteins Vimentin， E-cadherin， and N-cadherin.

Results C-PC inhibited the proliferation of the HeLa cells in a concentration-dependent manner （F=189.300，127.400;P<0.05）; C-PC significantly inhibited the TGF-β1-induced colony formation and migration of HeLa cells. Compared with the control group， the TGF-β1 treatment group had significantly increased mRNA expression of [STBX]Slug， Twist， Snail， and Zeb1 in the HeLa cells （F=16.115-47.541，P<0.05）， significantly decreased protein expression of E-cadherin （F=41.870-470.038，P<0.05）， and increased protein expression of Vimentin and N-cadherin （F=5.581-1 071.323，P<0.05）; C-PC co-treatment could reverse the above changes.

Conclusion C-PC can significantly inhibit the TGF-β1-induced proliferation and migration of HeLa cells， which may be attributed to the fact that C-PC can reduce the expression of migration-related factors and regulate the protein expression of E-cadherin， Vimentin， and N-cadherin.

[KEY WORDS] HeLa cells; phycocyanin; transforming growth factor beta1; cell proliferation; cell migration inhibition

宮頸癌是女性最常見的癌癥[1]。盡管近年來宮頸癌病人早期診出率和治療存活率都明顯增高，但晚期宮頸癌病人的預(yù)后和治療效果仍然不甚理想。確診和死亡病人中超過 85%發(fā)生在包括中國在內(nèi)的發(fā)展中國家，宮頸癌的晚期轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致病人死亡的主要原因。人宮頸癌HeLa細(xì)胞相比于其他癌細(xì)胞，增殖與轉(zhuǎn)移異常迅速[2]。研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）在癌癥晚期可以誘導(dǎo)癌細(xì)胞增殖和遷移等眾多反應(yīng)[3]。C-藻藍(lán)蛋白（C-PC）是從螺旋藻中分離出的天然蛋白[4]，具有抗腫瘤[5]、抗炎癥[6]和增進(jìn)機(jī)體免疫力等作用。WANG等[7]通過構(gòu)建C-PC/CMC-CD59sp 納米顆粒，將C-PC高效轉(zhuǎn)運(yùn)至癌細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮殺傷作用。本研究以TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞作為研究對象，探討C-PC抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖遷移活性的作用機(jī)制，為C-PC在臨床上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

人宮頸癌HeLa細(xì)胞株受贈于青島大學(xué)附屬醫(yī)院。試劑級C-PC粉末購于中國臺州賓美生物技術(shù)有限公司;胎牛血清（FBS）購于以色列BI生物科技公司;DMEM高糖培養(yǎng)液購于美國Hyclone公司;青鏈霉素混合液購于蘇州新賽美生物科技有限公司;PBS購于山東思科捷生物技術(shù)有限公司;重組人TGF-β1購于美國Peprotech有限公司;1 g/L結(jié)晶紫購于索萊寶公司;CCK-8試劑盒、BCA試劑盒及反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Biosharp白鯊生物科技公司;抗人E-cadherin、N-cadherin、Vimentin一抗購自美國Cell Signaling Technology公司;HRP標(biāo)記的二抗購自南京巴傲德生物科技有限公司;ECL試劑盒購自上海雅酶生物科技有限公司;RNA提取試劑盒購自山東思科捷生物技術(shù)有限公司;PCR引物購自上海生工生物工程有限公司;qPCR試劑盒購自賽維爾生物科技有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及分組HeLa細(xì)胞加入含體積分?jǐn)?shù)0.10胎牛血清及體積分?jǐn)?shù)0.01青鏈霉素混合液的DMEM高糖培養(yǎng)液，恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱內(nèi)溫度為37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)0.05 CO2、95%的相對飽和濕度。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至融合度達(dá)到80%～90%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳至2～3代時(shí)，取處于對數(shù)生長期且生長狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為4組，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。以DMEM高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞作為對照組，10 μg/L TGF-β1處理的HeLa細(xì)胞作為TGF-β1處理組，200 mg/L C-PC處理的HeLa細(xì)胞作為C-PC處理組，以10 μg/L TGF-β1和200 mg/L C-PC處理HeLa細(xì)胞作為TGF-β1+C-PC共同處理組。

1.2.2CCK-8法測定C-PC對HeLa細(xì)胞增殖能力的影響取處于對數(shù)生長期的HeLa細(xì)胞，胰蛋白酶消化制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/L，加入96孔板中。在5個(gè)孔中加入無細(xì)胞培養(yǎng)液作為空白組，每孔100 μL，置于培養(yǎng)箱中孵育過夜;應(yīng)用不同濃度的C-PC溶液（終濃度分別為0、50、100、200、400、800、1 600 mg/L）處理細(xì)胞，每個(gè)濃度設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，分別培養(yǎng)24、48 h后，將溶液換為PBS并加CCK-8工作液，置于培養(yǎng)箱中反應(yīng)4 h。用酶標(biāo)儀檢測450 nm波長處光密度（D）值，并計(jì)算每組細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率=（C-PC處理組D值-空白組D值）/（0 mg/L組D值-空白組D值）×100%。計(jì)算半抑制濃度（IC50）值并選取整數(shù)濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。

1.2.3細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測HeLa細(xì)胞克隆形成能力將HeLa細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，以每孔1 000個(gè)細(xì)胞接種到6孔板中，按照1.2.1方法分組處理，將培養(yǎng)液補(bǔ)齊至3 mL，晃動培養(yǎng)板，使細(xì)胞均勻分布在孔內(nèi)，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8～16 d，每3 d換液1次;當(dāng)6孔板中出現(xiàn)肉眼可見的克隆斑時(shí)，終止培養(yǎng)。棄培養(yǎng)液，用PBS洗2～3次后，每孔加入40 g/L多聚甲醛1 mL固定細(xì)胞克隆20 min。棄固定液，加入適量結(jié)晶紫染色15 min，流水清洗，室溫下干燥，觀察并拍照，對克隆集落進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.4Transwell實(shí)驗(yàn)檢測HeLa細(xì)胞遷移能力

使用無血清培養(yǎng)液預(yù)處理8.0 μm孔徑的Transwell小室，將饑餓處理12 h的HeLa細(xì)胞消化離心后，用無血清培養(yǎng)液重懸計(jì)數(shù)，取200 μL細(xì)胞懸液（1×108/L）離心后，按1.2.1方法分組并加入相應(yīng)藥物200 μL重懸，接種于上室;下室加入600 μL含體積分?jǐn)?shù)0.20胎牛血清的培養(yǎng)液，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后取出小室，棄上清，PBS洗2次并用棉簽擦拭內(nèi)室，細(xì)胞固定液固定30 min，結(jié)晶紫染色15 min，PBS洗2次，晾干。熒光顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野拍照并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算每孔平均細(xì)胞數(shù)。

1.2.5熒光定量PCR（qPCR）方法檢測遷移相關(guān)因子Slug、Snail、[STBX]Zeb1、Twist mRNA的表達(dá)將HeLa細(xì)胞按照1.2.1方法分組鋪入6孔板，加藥處理48 h后以PBS洗3次，胰蛋白酶消化，收集細(xì)胞，使用RNA提取試劑盒提取細(xì)胞總RNA，用核酸蛋白檢測儀測定濃度并鑒定純度。在以下反應(yīng)條件下將總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA：25 ℃、5 min，42 ℃、30 min，85 ℃、5 min。用熒光定量PCR儀使用三步法行qPCR擴(kuò)增及檢測，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃、15 s，60 ℃、10 s，72 ℃、30 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。采用2-△△CT 法計(jì)算遷移相關(guān)因子mRNA相對表達(dá)水平。qPCR反應(yīng)引物及其序列見表1。

1.2.6Western blot方法檢測HeLa細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白表達(dá)將HeLa細(xì)胞培養(yǎng)液換為無血清培養(yǎng)液饑餓處理12 h后，按照1.2.1方法分組處理48 h后，用PBS沖洗，加入含體積分?jǐn)?shù)0.01蛋白酶抑制劑（PMSF）的RIPA裂解液，將細(xì)胞刮下后轉(zhuǎn)移至EP管中，置于冰上裂解30 min，在預(yù)冷的4 ℃離心機(jī)中12 000 r/min離心15 min，將上清轉(zhuǎn)移至新EP管中，BCA法測定蛋白濃度。取蛋白樣品按1∶4比例加入SDS-PAGE Loading Buffer后恒溫變性10 min，每孔吸取30 μg蛋白上樣，以溴酚藍(lán)作為指示劑，濃縮膠層恒壓80 V電泳，至分離膠層時(shí)電壓調(diào)至120 V繼續(xù)恒壓電泳，待測樣品電泳至分離膠底部時(shí)，停止電泳。恒流300 mA濕轉(zhuǎn)80 min轉(zhuǎn)至PVDF膜上，置于搖床上室溫封閉20 min，TBST洗3次。加入一抗4 ℃孵育過夜，TBST洗3次;加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗室溫孵育2 h，TBST洗3次。在暗室使用凝膠成像儀和ECL試劑盒對膜進(jìn)行發(fā)光成像，應(yīng)用Image J軟件將各條帶灰度值量化，分析HeLa細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白E-cadherin、 N-cadherin和Vimentin表達(dá)。

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。使用Image J、GraphPad Prism 8軟件處理圖像，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料結(jié)果用[AKx-D]±s表示，數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析及析因設(shè)計(jì)的方差分析。

2結(jié)果

2.1C-PC對TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞增殖活力[CM）]的影響

CCK-8檢測顯示，C-PC處理HeLa細(xì)胞24、48 h，細(xì)胞增殖活力均受到明顯抑制，且呈濃度依賴性（F=189.300、127.400，P<0.05），處理24、48 h的IC50值分別為255.4、387.0 mg/L，設(shè)置實(shí)驗(yàn)C-PC的工作濃度為200 mg/L。細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，培養(yǎng)15 d時(shí)，對照組、TGF-β1處理組、C-PC處理組、TGF-β1+C-PC共同處理組HeLa細(xì)胞集落形成數(shù)分別為405.0±14.7、620.0±37.2、364.3±20.3、140.3±13.0，TGF-β1處理組細(xì)胞的集落數(shù)較對照組明顯增多，TGF-β1+C-PC共同處理組細(xì)胞集落數(shù)量則較TGF-β1處理組明顯下降，C-PC單獨(dú)處理組較對照組形成集落數(shù)量明顯減少（FTGF-β1=176.718，P<0.001;FC-PC=248.265，P<0.001;FTGF-β1×C-PC=0.047，P=0.792）。見圖1。

2.2C-PC對TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞遷移影響

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對照組、TGF-β1處理組、C-PC處理組、TGF-β1+C-PC共同處理組細(xì)胞遷移數(shù)分別為94.2±9.1、129.4±14.8、57.8±7.5、89.2±6.4，TGF-β1處理組細(xì)胞遷移能力較對照組顯著增強(qiáng)，TGF-β1+C-PC共同處理組細(xì)胞遷移能力較TGF-β1處理組明顯減弱，C-PC單獨(dú)處理組與對照組相比細(xì)胞遷移能力明顯受抑制（FTGF-β1=44.543，F(xiàn)C-PC=58.923，P<0.001;FTGF-β1×C-PC=0.145，P=0.708）。見圖2。

2.3各組HeLa細(xì)胞中遷移相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄因子的mRNA表達(dá)比較

qPCR檢測結(jié)果顯示，加藥處理48 h后，TGF-β1處理組HeLa細(xì)胞內(nèi)遷移相關(guān)因子[STBX]Slug、Snail、Zeb1、Twist的mRNA表達(dá)顯著高于對照組，TGF-β1+C-PC共同處理組相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)較TGF-β1處理組明顯下降，而C-PC單獨(dú)處理組與對照組相比相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)水平顯著降低（[STBX]Zeb1：FTGF-β1=34.906，F(xiàn)C-PC=20.194，P<0.01;FTGF-β1×C-PC=4.301，P=0.077。[STBX]Slug：FTGF-β1=47.541，F(xiàn)C-PC=47.504，P<0.01;FTGF-β1×C-PC=3.682，P=0.091。Snail：FTGF-β1=25.335，F(xiàn)C-PC=16.115，P<0.01;FTGF-β1×C-PC=1.849，P=0.223。Twist：FTGF-β1=21.407，F(xiàn)C-PC=36.926，P<0.01;FTGF-β1×C-PC=3.062，P=0.118）。見表2。

2.4各組HeLa細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白表達(dá)比較

Western blot結(jié)果顯示，TGF-β1處理組HeLa細(xì)胞內(nèi)Vimentin、N-cadherin蛋白表達(dá)水平顯著高于對照組，TGF-β1+C-PC共同處理組較TGF-β1處理組明顯降低，而C-PC單獨(dú)處理組則顯著低于對照組，差異均具有顯著意義（Vimentin：FTGF-β1=75.186，F(xiàn)C-PC=94.592，

FTGF-β1×C-PC=5.581，P<0.05;N-cadherin：FTGF-β1=570.129，F(xiàn)C-PC=1 071.323，F(xiàn)TGF-β1×C-PC=87.994，P<0.01）。TGF-β1處理組細(xì)胞內(nèi)E-cadherin的表達(dá)水平較對照組顯著降低，TGF-β1+C-PC共同處理組較TGF-β1處理組明顯升高，而C-PC單獨(dú)處理組與對照組相比顯著升高，差異有顯著性（FTGF-β1=470.038，F(xiàn)C-PC=286.287，F(xiàn)TGF-β1×C-PC=41.870，P<0.01）。見圖3、表3。

3討論

宮頸癌是女性中第四大常見癌癥，并且是世界上一些貧窮國家癌癥死亡的主要原因[8]。大多數(shù)宮頸癌病人被診斷時(shí)已經(jīng)是晚期且已發(fā)生轉(zhuǎn)移，治愈難度高。因此，一直以來，尋找特異性高、副作用小的天然抗癌藥物是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

癌癥晚期病人癌細(xì)胞易發(fā)生浸潤遷移，轉(zhuǎn)移癌比原發(fā)癌的治愈難度更大，病死率更高。TGF-β在人類癌癥發(fā)展過程中的作用具有二重性，在癌前細(xì)胞中，TGF-β主要起抑癌作用;而在癌癥晚期，TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)揮促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移的作用[9]。因此，抑制TGF-β的促細(xì)胞遷移作用能夠有效抑制晚期腫瘤的發(fā)展。

C-PC能夠抑制多種癌細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)其凋亡。JIANG等[10]研究發(fā)現(xiàn)，C-PC能夠抑制三陰性乳癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖、遷移，同時(shí)能夠激活p38 MAPK和JNK信號通路，抑制ERK通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。LIU等[11]研究發(fā)現(xiàn)，C-PC抗肝癌的作用機(jī)制包括腫瘤發(fā)生早期的血細(xì)胞損傷、線粒體介導(dǎo)的凋亡及自噬抑制，為腫瘤的治療提供了相對安全的途徑。JI等[12]研究表明，C-PC可逆轉(zhuǎn)TGF-β1誘導(dǎo)的宮頸癌細(xì)胞上皮向間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，下調(diào)TGF-β/samd信號通路誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞周期G0/G1阻滯。HAO等[13]首次提出C-PC通過下調(diào)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的RIPK1/NF-κB活性發(fā)揮抗增殖和抗遷移功能。LIU等[14]構(gòu)建能夠靶向作用于HeLa細(xì)胞C-PC/CMC-CD55sp納米微球，提高了C-PC抑制癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的效率。但有關(guān)C-PC對于轉(zhuǎn)移性宮頸癌的作用及機(jī)制研究的報(bào)道較少。本文研究通過TGF-β1誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)移，探討C-PC對宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制。研究結(jié)果顯示，C-PC能夠明顯抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞增殖和遷移。

大部分癌細(xì)胞的增殖遷移能力較強(qiáng)，癌變細(xì)胞鈣黏蛋白表達(dá)的變化表現(xiàn)為E-cadherin表達(dá)減少和N-cadherin表達(dá)增加。已有研究發(fā)現(xiàn)，E-cadhe-rin蛋白表達(dá)的喪失與晚期腫瘤細(xì)胞運(yùn)動性增加、轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)密切相關(guān)[15]。NAVARRO等[16]研究結(jié)果表明，誘導(dǎo)增加缺乏E-cadherin的癌細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá)量可以阻止腫瘤的進(jìn)展和侵襲，因此E-cadherin成為經(jīng)典的腫瘤抑制因子。與E-cadherin對腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展和侵襲抑制作用相反，N-cadherin賦予腫瘤細(xì)胞更強(qiáng)的遷移和侵襲能力，該作用與E-cadherin的表達(dá)無關(guān)[17-18]。研究顯示，N-cadherin的異常表達(dá)與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)化、黏附、凋亡、血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移等多方面密切相關(guān)，N-cadherin可能成為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的治療靶點(diǎn)[19]。Vimentin是中間絲蛋白質(zhì)的一種，對細(xì)胞的活動性有重要的作用，Vimentin能夠促進(jìn)癌細(xì)胞遷移，在運(yùn)動細(xì)胞和侵襲細(xì)胞中的表達(dá)水平較高[20]。本研究結(jié)果顯示，TGF-β1誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞內(nèi)N-cadherin、Vimentin高表達(dá)，E-cadherin低表達(dá)，C-PC則能逆轉(zhuǎn)HeLa細(xì)胞內(nèi)的這種變化。本實(shí)驗(yàn)還檢測了TGF-β1和C-PC對遷移相關(guān)標(biāo)志性因子[STBX]Twist、Zeb1、Slug、Snail表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，TGF-β1誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞內(nèi)[STBX]Twist、Zeb1、Slug、Snail表達(dá)水平升高，C-PC與TGF-β1共處理則降低了這些因子的表達(dá)水平。Twist表達(dá)的增加與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移直接相關(guān)，并介導(dǎo)E-cadherin的丟失，Slug是Twist誘發(fā)的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要遞質(zhì)[21]，Snail在E-cadherin啟動子上發(fā)揮阻遏活性[22]，Snail和Twist協(xié)同作用控制Zeb1的表達(dá)量[23]。

綜上所述，TGF-β1可以誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖、遷移，而C-PC能夠明顯逆轉(zhuǎn)TGF-β1誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞增殖和遷移，其機(jī)制主要與C-PC降低遷移相關(guān)因子的表達(dá)及調(diào)節(jié)E-cadherin、Vimen-tin和N-cadherin的蛋白表達(dá)水平有關(guān)。而C-PC是如何作用于癌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)這一功能的是我們接下來研究的重點(diǎn)。本文研究結(jié)果為宮頸癌的晚期臨床治療提供了新思路。

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（本文編輯黃建鄉(xiāng)）