趙志平,王向宇,賈斌,許應(yīng)星,王昌耀,王英振

[摘要]目的? ? 研究表觀遺傳信號(hào)分子-溴結(jié)構(gòu)域蛋白4（BRD4）在鈦（Ti）顆粒體外誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成和骨吸收功能中的作用。方法? ? 小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞隨機(jī)分為3組，對(duì)照組應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)液+100 μg/L核因子κB受體活化因子配體（RANKL）+50 μg/L巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）培養(yǎng)，Ti組應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)液+0.1 g/L Ti+100 μg/L RANKL+50 μg/L M-CSF培養(yǎng)，Ti+JQ1組應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)液+0.1 g/L Ti+100 μg/L RANKL+50 μg/L M-CSF+200 nmol/L JQ1培養(yǎng)。各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，應(yīng)用CCK8檢測(cè)細(xì)胞活性，熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)[STBX]BRD4基因和破骨細(xì)胞相關(guān)基因組織蛋白酶K（CK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（[STBX]TRAF6）、活化T細(xì)胞核因子1（[STBX]NFATc1）等mRNA表達(dá);培養(yǎng)5 d至破骨細(xì)胞形成，用TRAP染色法檢測(cè)各組成熟破骨細(xì)胞數(shù)量，骨吸收培養(yǎng)板（OAP）檢測(cè)各組破骨細(xì)胞骨吸收功能。結(jié)果? ? 各組細(xì)胞活性差異無(wú)顯著性（F=1.629，P>0.05）;Ti組[STBX]BRD4基因和破骨細(xì)胞相關(guān)基因mRNA表達(dá)均較對(duì)照組顯著升高，Ti+JQ1組[STBX]BRD4基因和破骨細(xì)胞相關(guān)基因mRNA表達(dá)均較Ti組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.575～336.704，P<0.05）;Ti組TRAP染色陽(yáng)性的破骨細(xì)胞數(shù)目較其他兩組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=165.941，P<0.05）;Ti組骨吸收面積較對(duì)照組增加，Ti+JQ1組骨吸收面積與Ti組相比明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=49.879，P<0.05）。結(jié)論? ? Ti顆粒通過(guò)上調(diào)RAW264.7巨噬細(xì)胞中BRD4蛋白的表達(dá)，促進(jìn)破骨細(xì)胞形成和骨吸收功能。

[關(guān)鍵詞]溴結(jié)構(gòu)域蛋白4;鈦顆粒;JQ1;破骨細(xì)胞;骨吸收;基因檢測(cè)

[中圖分類號(hào)]R687.4;R318

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]2096-5532（2022）04-0489-05

doi：10.11712/jms.2096-5532.2022.58.108

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版]https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20220622.1629.013.html;[JY]2022-06-2414：58：40

ROLE OF BROMODOMAIN-CONTAINING PROTEIN 4 IN TITANIUM PARTICLE-INDUCED OSTEOCLASTOGENESIS AND BONE RESORPTION

ZHAO Zhiping， WANG Xiangyu， JIA Bin， XU Yingxing， WANG Changyao， WANG Yingzhen

（Department of Medicine， Qingdao University， Qingdao 266071， China）

[ABSTRACT]Objective[WTBZ] To investigate the role of the epigenetic signaling molecule bromodomain-containing protein 4 （BRD4） in titanium （Ti） particle-induced osteoclastogenesis and bone resorption in vitro.

Methods Mouse RAW264. 7 macrophages were randomly divided into control group， Ti group， and Ti+JQ1 group.? The macrophages in the control group were cultured with cell culture medium+100 μg/L receptor activator of nuclear factor-κB ligand （RANKL）+50 μg/L macrophage colony-stimulating factor （M-CSF）， those in the Ti group were cultured with cell culture medium+0.1 g/L Ti+100 μg/L RANKL+50 μg/L M-CSF， and those in the Ti+JQ1 group were cultured with cell culture medium+0.1 g/L Ti+100 μg/L RANKL+50 μg/L M-CSF+200 nmol/L JQ1.? After culture for 48 h， CCK8 assay was used to measure cell viability， and quantitative real-time PCR was used to measure the mRNA expression of [STBX]BRD4 gene and osteoclast-related genes such as cathepsin K （CK）， tartrate-resistant acid phosphatase （TRAP）， TNF receptor-associated factor 6 （[STBX]TRAF6）， and nuclear factor of activated T-cells 1 （[STBX]NFATc1）; after culture for 5 d till the formation of osteoclasts， TRAP staining was used to measure the number of mature os-teoclasts in each group， and osteo assay plate （OAP） was used to evaluate osteoclast-mediated bone resorption in each group.

Results There was no significant difference in cell viability between groups （F=1.629，P>0.05）.? Compared with the control group， the Ti group had significantly higher mRNA expression levels of [STBX]BRD4 gene and osteoclast-related genes， and compared with the Ti group， the Ti+JQ1 group had significantly lower mRNA expression levels （F=24.575-336.704，P<0.05）.? The Ti group had a significantly higher number of TRAP-positive osteoclasts than the other two groups （F=165.941，P<0.05）.? The Ti group had a significantly larger area of bone resorption than the control group， and the Ti+JQ1 group had a significantly smaller area of bone resorption than the Ti group （F=49.879，P<0.05）.

Conclusion[WTBZ] Ti particles promote osteoclast formation and bone resorption by upregulating the expression of BRD4 in RAW264. 7 macrophages.

[KEY WORDS]bromodomain-containing protein 4; titanium particles; JQ1; osteoclasts; bone resorption; genetic testing

人工關(guān)節(jié)置換術(shù)（TJA）被廣泛用于治療晚期關(guān)節(jié)疾病，可顯著緩解病人的疼痛并改善關(guān)節(jié)功能[1]。然而，磨損顆粒引起的假體周圍骨溶解引發(fā)的無(wú)菌性松動(dòng)是導(dǎo)致假體失敗的主要原因[2]。盡管假體周圍骨溶解的病理生理機(jī)制仍不清楚，但越來(lái)越多的證據(jù)表明，從假體表面釋放的聚乙烯和鈦（Ti）等磨損顆粒能誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成和過(guò)度活化，并增強(qiáng)假體周圍的破骨細(xì)胞骨吸收功能，從而導(dǎo)致假體周圍骨溶解和隨后的無(wú)菌性松動(dòng)[3-4]。大量的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳信號(hào)分子-溴結(jié)構(gòu)域蛋白4（BRD4）通過(guò)調(diào)控破骨細(xì)胞的形成，參與破骨細(xì)胞相關(guān)的溶骨性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨肉瘤和骨質(zhì)疏松等發(fā)生和發(fā)展[5-7]。有研究結(jié)果表明，BRD4抑制劑JQ1對(duì)破骨細(xì)胞分化有抑制作用，可防止卵巢切除小鼠骨質(zhì)疏松[8]。我們先前的研究結(jié)果顯示，假體周圍骨溶解病人的界膜組織中BRD4蛋白的表達(dá)明顯增加，Ti顆粒處理小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞通過(guò)上調(diào)BRD4表達(dá)誘導(dǎo)溶骨性炎性因子的產(chǎn)生[9]。但是，關(guān)于BRD4蛋白參與調(diào)控磨損顆粒誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成、活化和骨吸收功能的確切機(jī)制不明。本文對(duì)BRD4在磨損顆粒誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成和骨吸收功能中的作用進(jìn)行研究。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院（上海）細(xì)胞庫(kù);DMEM高糖培養(yǎng)液和青霉素/鏈霉素混合液購(gòu)自以色列BI公司;胎牛血清購(gòu)自武漢普諾賽生命科學(xué)有限公司;Ti顆粒（平均直徑為4 μm）購(gòu)自美國(guó)Alfa Aesa;CCK8試劑盒和TRAP染色試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;Trizol試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Green試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa公司;PCR引物購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司;核因子κB受體活化因子配體（RANKL）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）購(gòu)自美國(guó)R&D Systems;JQ1購(gòu)自北京愛必信生物科技有限公司;骨吸收培養(yǎng)板購(gòu)自美國(guó)康寧公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1Ti顆粒的準(zhǔn)備Ti顆粒在180 ℃下烘烤6 h后，在體積分?jǐn)?shù)0.75乙醇中洗滌48 h以去除內(nèi)毒素，然后懸浮在無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（PBS）中，使用高壓滅菌器對(duì)Ti顆粒懸液進(jìn)行滅菌，制成0.1 g/L的Ti顆粒懸液4 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)和誘導(dǎo)小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞以每孔1×104的密度接種于96孔板中，隨機(jī)分為3組培養(yǎng)：對(duì)照組中加入破骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液（含有體積分?jǐn)?shù)0.10胎牛血清和體積分?jǐn)?shù)0.01青霉素/鏈霉素混合液DMEM高糖培養(yǎng)液+100 μg/L RANKL+50 μg/L的M-CSF），Ti組中加入破骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液+0.1 g/L Ti顆粒，Ti+JQ1組中加入破骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液+0.1 g/L Ti顆粒+200 nmol/L JQ1。3組細(xì)胞均培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)0.05 CO2、95%濕度和37 ℃的環(huán)境中，每2 d更新1次培養(yǎng)液。

1.2.3CCK8方法檢測(cè)細(xì)胞活力小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞以每孔1×104的密度接種到96孔板中過(guò)夜，根據(jù)分組加入相應(yīng)試劑后培養(yǎng)48 h。然后按照CCK8試劑盒說(shuō)明書將CCK8添加到96孔板中，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)2 h，酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度。

1.2.4熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Q-PCR）方法檢測(cè)基因表達(dá)Trizol試劑盒提取各組細(xì)胞總RNA，參照說(shuō)明書進(jìn)行操作。反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)為cDNA，將獲得的cDNA稀釋并用作PCR模板，使用SYBR Green PCR預(yù)混液配制反應(yīng)體系，反應(yīng)條件為：預(yù)變性95 ℃、10 min，變性95 ℃、10 s，退火60 ℃、10 s，延伸72 ℃、15 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參照基因，采用2-ΔΔCt法分別計(jì)算[STBX]BRD4、組織蛋白酶K（CK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、活化T細(xì)胞核因子1（[STBX]NFATc1）、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（[STBX]TRAF6）等目的基因的mRNA表達(dá)。上述每個(gè)樣本均設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5TRAP染色法檢測(cè)破骨細(xì)胞形成將小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞以每孔1×104的密度接種到96孔板中過(guò)夜，根據(jù)分組加入相應(yīng)試劑。每2 d更換1次培養(yǎng)液，直到第5天觀察到成熟的破骨細(xì)胞。然后將各組細(xì)胞用PBS洗滌3次，用40 g/L多聚甲醛固定20 min，并根據(jù)TRAP試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行TRAP染色。具有≥3個(gè)核TRAP染色陽(yáng)性的細(xì)胞為破骨細(xì)胞，并使用Image Pro-Plus 6.0軟件進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.6骨吸收培養(yǎng)板（OAP）檢測(cè)破骨細(xì)胞骨吸收功能將小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞以每孔1×105的密度接種到24孔OAP中，根據(jù)分組加入相應(yīng)試劑。每2 d更換1次培養(yǎng)液培養(yǎng)5 d，然后超聲處理直至細(xì)胞完全從OAP中移出。使用倒置顯微鏡拍攝骨吸收凹坑的圖像，并使用Image Pro-Plus 6.0軟件量化骨吸收的面積。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

[CM（20]使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料[CM）]

以[AKx-D]±s形式表示，多組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組細(xì)胞存活率比較

對(duì)照組、Ti組和Ti+JQ1組的細(xì)胞存活率分別為1.01±0.02、1.04±0.04、0.99±0.05，3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.629，P>0.05）。表明加入Ti顆粒、RANKL和M-CSF以及JQ1對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活性無(wú)影響。

2.2各組[STBX]BRD4基因和破骨細(xì)胞相關(guān)基因mRNA表達(dá)比較

Ti組[STBX]BRD4 mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而Ti+JQ1組[STBX]BRD4 mRNA表達(dá)與Ti組相比顯著降低（F=128.241，P<0.05）。與對(duì)照組相比較，Ti組破骨細(xì)胞相關(guān)基因[STBX]CK、TRAP、TRAF6、NFATc1、c-Fos的mRNA

表達(dá)均明顯升高;與Ti組相比，Ti+JQ1組破骨細(xì)胞相關(guān)基因[STBX]CK、NFATc1、TRAF6、TRAP和c-Fos的mRNA表達(dá)均明顯下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.575～336.704，P<0.05）。見表1。

2.3各組破骨細(xì)胞形成比較

小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞可以分化為特征性TRAP陽(yáng)性多核破骨細(xì)胞，與對(duì)照組相比，Ti組破骨細(xì)胞數(shù)增多;與Ti組相比，Ti+JQ1組TRAP陽(yáng)性破骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=165.941，P<0.05）。見圖1A～C和表2。

2.4各組破骨細(xì)胞骨吸收功能比較

在RANKL和M-CSF誘導(dǎo)下，3組均可觀察到骨吸收凹坑。與對(duì)照組相比，Ti組的骨吸收面積顯著增加;與Ti組相比，Ti+JQ1組的骨吸收面積顯著減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=49.879，P<0.05）。見圖1D～F和表2。

3討論

TJA可以明顯緩解晚期關(guān)節(jié)疾病病人的疼痛、改善關(guān)節(jié)功能、提高生活質(zhì)量，曾被評(píng)為“世紀(jì)性的手術(shù)”[1]。但是隨著TJA手術(shù)的廣泛開展以及假體使用年限的延長(zhǎng)，越來(lái)越多的病人需要進(jìn)行關(guān)節(jié)翻修手術(shù)，這給病人造成了極大的心理壓力和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。DOBZYNIAK等[10]對(duì)關(guān)節(jié)翻修手術(shù)的原因分析發(fā)現(xiàn)，75%的翻修手術(shù)是由假體的無(wú)菌性松動(dòng)引起。而磨損顆粒誘導(dǎo)的假體周圍骨溶解是假體無(wú)菌性松動(dòng)的病理基礎(chǔ)[11]。因此，預(yù)防和治療假體無(wú)菌性松動(dòng)的關(guān)鍵在于對(duì)磨損顆粒誘導(dǎo)的假體周圍骨溶解進(jìn)行防治。這就要求我們了解磨損顆粒誘導(dǎo)假體周圍骨溶解的發(fā)病機(jī)制。

隨著表觀遺傳學(xué)的興起，BRD4作為表觀遺傳信號(hào)分子逐漸被人們所熟知。BRD4蛋白主要與乙酰化的組蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合，然后募集其他轉(zhuǎn)錄因子，繼而形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，促進(jìn)下游基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，進(jìn)而參與細(xì)胞周期、細(xì)胞生長(zhǎng)、炎癥和癌癥等調(diào)節(jié)[12-13]。有研究結(jié)果表明，磨損顆粒主要通過(guò)激活破骨細(xì)胞形成和骨吸收功能誘導(dǎo)假體周圍骨溶解[14-17]。大量研究顯示，表觀遺傳信號(hào)分子BRD4與破骨細(xì)胞相關(guān)的溶骨性疾病有關(guān)[7，18-19]，而抑制BRD4可以顯著抑制破骨細(xì)胞的形成以及破骨細(xì)胞的骨吸收功能[20]。BRD4選擇性抑制劑JQ1可通過(guò)阻斷BRD4蛋白與乙酰化組蛋白之間的相互作用，競(jìng)爭(zhēng)性地占據(jù)溴結(jié)構(gòu)域的識(shí)別口袋，并取代染色質(zhì)的BRD4蛋白，發(fā)揮針對(duì)靶基因治療劑的作用。LAMOUREUX等[7]的研究顯示，JQ1可抑制成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化，延緩骨腫瘤的發(fā)展。KLEIN等[21]研究表明，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜組織中可檢測(cè)到BRD4蛋白，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中均有BRD4表達(dá)，抑制BRD4可抑制破骨細(xì)胞的形成和活化而緩解類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病理過(guò)程。我們之前的研究結(jié)果也表明，BRD4在假體周圍骨溶解病人界膜組織中的表達(dá)上調(diào);當(dāng)用Ti顆粒處理小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞時(shí)，BRD4表達(dá)上調(diào)并且促進(jìn)溶骨性炎癥因子的產(chǎn)生;在JQ1存在時(shí)，BRD4和溶骨性炎癥因子產(chǎn)生顯著減少，表明BRD4可能在Ti顆粒誘導(dǎo)溶骨性炎癥因子產(chǎn)生的機(jī)制中起作用[9]。本研究旨在進(jìn)一步探討B(tài)RD4在Ti顆粒體外誘導(dǎo)破骨細(xì)胞生成和破骨細(xì)胞骨吸收功能中的作用。

本文研究Q-PCR結(jié)果顯示，在Ti顆粒誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞中[STBX]BRD4表達(dá)上調(diào)，與相關(guān)研究結(jié)果一致[9];并且伴隨著破骨細(xì)胞相關(guān)基因CK、TRAP、[STBX]TRAF6、NFATc1以及c-Fos mRNA表達(dá)升高，而BRD4抑制劑JQ1可以顯著降低Ti顆粒誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞中破骨細(xì)胞相關(guān)基因CK、TRAP、[STBX]TRAF6、NFATc1和c-Fos mRNA的表達(dá)，說(shuō)明[STBX]BRD4參與了Ti顆粒誘導(dǎo)破骨細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。本文進(jìn)一步探討了BRD4對(duì)Ti顆粒誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成和骨吸收功能的影響，TRAP染色結(jié)果顯示，Ti顆?？纱龠M(jìn)破骨細(xì)胞生成和分化，而抑制BRD4則減弱了Ti顆粒誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成和分化;此外，OAP結(jié)果表明，Ti顆?？纱龠M(jìn)破骨細(xì)胞骨吸收功能，而JQ1能顯著抑制Ti顆粒體外誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞骨吸收功能。

綜上所述，Ti顆粒處理RAW264.7巨噬細(xì)胞可通過(guò)上調(diào)BRD4的表達(dá)，促進(jìn)破骨細(xì)胞生成和破骨細(xì)胞骨吸收功能，抑制BRD4表達(dá)可抑制Ti顆粒誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞的形成和破骨細(xì)胞骨吸收的功能，但其具體分子調(diào)控機(jī)制仍有待研究。應(yīng)用動(dòng)物模型進(jìn)一步研究BRD4在Ti顆粒誘導(dǎo)骨溶解中的作用，從表觀遺傳學(xué)的角度對(duì)磨損顆粒誘導(dǎo)假體周圍骨溶解的發(fā)病機(jī)制提供了新的補(bǔ)充，同時(shí)也為預(yù)防和治療磨損顆粒誘導(dǎo)假體周圍骨溶解和假體無(wú)菌性松動(dòng)找到了新的治療靶點(diǎn)和理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]LEARMONTH I D， YOUNG C， RORABECK C.? The operation of the century： total hip replacement[J].? ?Lancet （London， England）， 2007，370（9597）：1508-1519.

[2]WANG Q， GE G R， LIANG X L， et al.? Punicalagin ameliorates wear-particle-induced inflammatory bone destruction by bi-directional regulation of osteoblastic formation and os-teoclastic resorption[J].? ?Biomaterials Science， 2020，8（18）：5157-5171.

[3]LIAO S J， FENG W， LIU Y， et al.? Inhibitory effects of biochanin A on titanium particle-induced osteoclast activation and inflammatory bone resorption via NF-κB and MAPK pathways[J].? ?Journal of Cellular Physiology， 2021，236（2）：1432-1444.

[4]HU X Y， PING Z C， GAN M F， et al.? Theaflavin-3，3-digallate represses osteoclastogenesis and prevents wear debris-in-duced osteolysis via suppression of ERK pathway[J].? Acta Biomaterialia， 2017，48：479-488.

[5]XIAO Y J， LIANG L Q， HUANG M C， et al.? Bromodomain and extra-terminaldomainbromodomaininhibitionprevents synovial inflammation via blocking IκB kinase-dependent NF-κB activation in rheumatoid fibroblast-like synoviocytes[J].? ?Rheumatology （Oxford， England）， 2016，55（1）：173-184.

[6]JACQUES C， LAVAUD M， GEORGES S， et al.? BET bromodomains functions in bone-related pathologies[J].? ?Epi-genomics， 2020，12（2）：127-144.

[7]LAMOUREUX F， BAUDHUIN M， RODRIGUEZ CALLEJA L， et al.? Selective inhibition of BET bromodomain epigenetic signalling interferes with the bone-associated tumour vicious cycle[J].? ?Nature Communications， 2014，5：3511.

[8]BAUDHUIN M， LAMOUREUX F， JACQUES C， et al.? Inhibition of BET proteins and epigenetic signaling as a potential treatment for osteoporosis[J].? ?Bone， 2017，94：10-21.

[9]REN Y Z， ZHANG Y T， WANG Z， et al.? Role of Brd4 in the production of inflammatory cytokines in mouse macrophages treated with titanium particles[J].? ?Canadian Journal of Phy-siology and Pharmacology， 2019，97（11）：1028-1034.

[10]DOBZYNIAK M， FEHRING T K， ODUM S.? Early failure in total hip arthroplasty[J].? ?Clinical Orthopaedics and Related Research， 2006，447：76-78.

[11]KANDAHARI A M， YANG X L， LAROCHE K A， et al.? A review of UHMWPE wear-induced osteolysis： the role for early detection of the immune response[J].? ?Bone Research， 2016，4：16014.

[12]TANIGUCHI Y.? The bromodomain and extra-terminal domain （BET） family： functional anatomy of BET paralogous proteins[J].? ?International Journal of Molecular Sciences， 2016，17（11）： E1849.

[13]FILIPPAKOPOULOS P， QI J， PICAUD S， et al.? Selective inhibition of BET bromodomains[J].? ?Nature， 2010，468（7327）：1067-1073.

[14]JIANG Y P， JIA T H， WOOLEY P H， et al.? Current research in the pathogenesis of aseptic implant loosening asso-ciated with particulate wear debris[J].? ?Acta Orthopaedica Belgica， 2013，79（1）：1-9.

[15]GALLO J， GOODMAN S B， KONTTINEN Y T， et al.? Os-teolysis around total knee arthroplasty： a review of pathogenetic mechanisms[J].? ?Acta Biomaterialia， 2013，9（9）：8046-8058.

[16]JIANG Y P， JIA T H， GONG W M， et al.? Titanium particle-challenged osteoblasts promote osteoclastogenesis and osteolysis in a murine model of periprosthestic osteolysis[J].? ?Acta Biomaterialia， 2013，9（7）：7564-7572.

[17]LONGHOFER L K， CHONG A， STRONG N M， et al.? Specific material effects of wear-particle-induced inflammation and osteolysis at the bone-implant interface： a rat model[J].? ?Journal of Orthopaedic Translation， 2017，8：5-11.

[18]ZHANG Q G， QIAN J， ZHU Y C.? Targeting bromodomain-containing protein 4 （BRD4） benefits rheumatoid arthritis[J].? ?Immunology Letters， 2015，166（2）：103-108.

[19]MENG S， ZHANG L， TANG Y， et al.? BET inhibitor JQ1 blocks inflammation and bone destruction[J].? ?Journal of Den-tal Research， 2014，93（7）：657-662.

[20]GUO N H， ZHENG J F， ZI F M， et al.? I-BET151 suppresses osteoclast formation and inflammatory cytokines secretion by targetting BRD4 in multiple myeloma[J].? ?Bioscience Reports， 2019，39（5）： BSR20181245.

[21]KLEIN K， KABALA P A， GRABIEC A M， et al.? The bromodomain protein inhibitor I-BET151 suppresses expression of inflammatory genes and matrix degrading enzymes in rheumatoid arthritis synovial fibroblasts[J].? ?Annals of the Rheumatic Diseases， 2016，75（2）：422-429.

（本文編輯黃建鄉(xiāng)）