胃癌是全球最常見的癌癥之一，也是全球癌癥死亡的第3大原因，僅次于肺癌和結(jié)腸癌。2020年全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告顯示：2020年全球胃癌新發(fā)病例約108萬，死亡病例約76萬例，分別占發(fā)病和死亡總數(shù)的5.6%和7.7%。其標(biāo)化發(fā)病率和死亡率分別為11.1/10萬和7.7/10萬

。我國是胃癌高發(fā)國家，胃癌發(fā)病率和死亡率在所有惡性腫瘤中均居于第2位

。相比之下，遠(yuǎn)超出世界水平。目前胃癌的臨床治療方案主要是通過手術(shù)治療切除癌變部位以達(dá)到根治的目的，輔以放化療進(jìn)行術(shù)后第二階段的治療。但由于缺乏早期常規(guī)或標(biāo)準(zhǔn)篩查方式，大多數(shù)胃癌患者在早期階段常無明顯癥狀，確診時(shí)已屬中晚期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)，而放化療無法有效遏制胃癌疾病進(jìn)展，因此，胃癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高，總體5年生存率低

。目前臨床所使用的大多數(shù)化療藥物屬于廣譜抗腫瘤藥物，不僅對(duì)癌細(xì)胞，對(duì)于正常細(xì)胞也有非常大的殺傷作用，可發(fā)生肝損傷、腎毒性等毒性作用，對(duì)患者身體機(jī)能影響較大。由于化療藥物療效有限及個(gè)體化差異，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性也較常見，故需要研發(fā)治療胃癌的新型藥物。

第二是要求能夠培養(yǎng)具有精細(xì)化管理理念的管理會(huì)計(jì)人才。在互聯(lián)網(wǎng)+視域大數(shù)據(jù)下的管理人次必須能夠是中高層的管理會(huì)計(jì)人才，其擁有大數(shù)據(jù)理論知識(shí)和應(yīng)用能力，掌握豐富的管理會(huì)計(jì)新理論內(nèi)容。當(dāng)前要能夠通過加強(qiáng)既有管理會(huì)計(jì)人才的社會(huì)培訓(xùn)入手，展開對(duì)其大數(shù)據(jù)應(yīng)用相關(guān)技術(shù)的培訓(xùn)，并且嚴(yán)格考核制度，提升管理人才的大數(shù)據(jù)知識(shí)體系；還可以通過完善高校的大數(shù)據(jù)管理會(huì)計(jì)人才的培育系統(tǒng)，通過對(duì)會(huì)計(jì)專業(yè)設(shè)定大數(shù)據(jù)技術(shù)課程，優(yōu)化管理會(huì)計(jì)課程內(nèi)容，并且提供校企合作制度等方式來實(shí)現(xiàn)對(duì)中高層會(huì)計(jì)人才的培養(yǎng)。

環(huán)吡酮胺(ciclopirox olamine，CPX)是一種廣譜抗真菌藥物

，臨床上主要用于治療局部皮膚及指甲真菌感染

。近年來被確定為潛在的抗腫瘤藥物

。多項(xiàng)體外試驗(yàn)表明，CPX可以抑制橫紋肌肉瘤、結(jié)腸腺癌、食管鱗癌、人膠質(zhì)瘤等腫瘤細(xì)胞的增殖

，可以通過抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)來抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和血管生成

，也可抑制淋巴管的生成

。由于血管和淋巴管的生成在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用

，這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步肯定了CPX在腫瘤預(yù)防和治療中的作用，但CPX對(duì)胃癌的作用卻未見研究和報(bào)道。

本研究選取人胃癌AGS細(xì)胞為研究對(duì)象，使用不同濃度CPX作用于人AGS胃癌細(xì)胞，旨在探討CPX對(duì)人胃癌AGS細(xì)胞生長、遷移、侵襲、凋亡及細(xì)胞周期的影響，以期發(fā)現(xiàn)治療胃癌的新型藥物。

1 材料與方法

CPX購自上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司；胰酶細(xì)胞消化液、RIPA細(xì)胞裂解液、BCA法蛋白定量試劑盒均購自碧云天生物科技有限公司；PBS緩沖液購自美國Hyclone公司；1640培養(yǎng)基、胎牛血清均購自以色列Biological Industries公司；青-鏈霉素混合液購自索萊寶生物科技有限公司；二甲基亞砜DMSO購自美國Sigma公司；CCK-8細(xì)胞增殖試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司；SDS凝膠配制試劑盒購自鼎國昌盛公司；Transwell小室購自Corning Costar公司；Matrigel

Basement Membrane購自美國BD公司；細(xì)胞周期試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒均購自大連美侖生物技術(shù)有限公司。細(xì)胞計(jì)數(shù)儀購自美國Bio-Rad公司；流式細(xì)胞儀購自美國BD公司；曝光儀購自美國Bio-Rad公司；SDS-PAGE凝膠電泳電轉(zhuǎn)槽購自天能公司。

本研究所用的人胃癌AGS細(xì)胞系購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。采用含有10%的PBS及青霉素/鏈霉素雙抗混合液的1640培養(yǎng)基在37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO

、21%的O

和74%的N

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)人胃癌AGS細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)組用不同濃度CPX(5、10、20 μmol/L)處理AGS細(xì)胞，對(duì)照組加入與最大藥物濃度等量的DMSO。將AGS細(xì)胞接種于24孔板，加入不同濃度的藥物，48 h后，再用胰酶消化收集細(xì)胞至流式管中，使用預(yù)冷的PBS緩沖液洗2遍。加入預(yù)冷的80%乙醇，在4 ℃冰箱固定。第2天，使用預(yù)冷的PBS溶液重懸細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，加入500 μl PBS(含50 μg/ml碘化丙啶PI)和50 μg/ml RNase A，孵育30 min，4 ℃避光。上機(jī)之前，用300目的篩網(wǎng)過濾樣本。流式細(xì)胞儀檢測(cè)，以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

遷移能力：梯度濃度的CPX處理AGS細(xì)胞12 h后穿膜細(xì)胞數(shù)如圖2所示。隨著CPX濃度升高，對(duì)AGS細(xì)胞遷移的抑制作用逐漸增強(qiáng)，AGS細(xì)胞穿膜的能力逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.01)。表明CPX對(duì)AGS細(xì)胞遷移能力的影響呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)。顯微鏡下觀察AGS細(xì)胞遷移情況如圖3所示。以上結(jié)果提示，CPX能夠明顯抑制胃癌AGS細(xì)胞的遷移能力，且呈濃度依賴效應(yīng)。侵襲能力：梯度濃度的CPX處理AGS細(xì)胞12 h后穿膜細(xì)胞數(shù)如表2所示。隨著CPX濃度升高，對(duì)AGS細(xì)胞侵襲的抑制作用逐漸增強(qiáng)，AGS細(xì)胞穿過基質(zhì)膠的能力逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.01)。這表明CPX對(duì)AGS細(xì)胞侵襲能力的影響呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)。顯微鏡下觀察AGS細(xì)胞侵襲情況如圖4所示。無論是AGS細(xì)胞的遷移能力還是侵襲能力，在CPX的作用下均顯著被抑制，且呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)。

將濃度為9.8 mg/ml的基質(zhì)膠用預(yù)冷的F-12培養(yǎng)基按1∶10的比例進(jìn)行稀釋，取40 μl加入到各Transwell的小室中，置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜。再加入50 μl F-12培養(yǎng)基水化基質(zhì)膠30 min。每個(gè)小室接種6×10

個(gè)細(xì)胞于200 μl無血清F-12培養(yǎng)基中, 在下室中加入600 μl含10% FBS的F-12培養(yǎng)基。以下步驟同上述Transwell測(cè)定細(xì)胞遷移能力實(shí)驗(yàn)。

將處于對(duì)數(shù)生長期的AGS細(xì)胞消化及計(jì)數(shù)，后以1×10

ml

的密度接種于96孔板中，每孔接種200 μl，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜。待細(xì)胞貼壁后吸棄原培養(yǎng)基，加入含不同濃度CPX的培養(yǎng)基(2.5、5、10、20、40、80 μmol/L),每種濃度設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔與對(duì)照孔，調(diào)零孔只添加CCK-8以消除溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，對(duì)照孔加入與最大藥物濃度等量的DMSO以排除溶劑對(duì)細(xì)胞的影響，加藥后繼續(xù)培養(yǎng)48 h。棄去原有培養(yǎng)基，每孔加入10 μl CCK8，孵育4 h后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm波長下的吸光度(

值)。作圖并計(jì)算

值。

語文課堂注入“人情味”，引導(dǎo)學(xué)生與優(yōu)秀文化接觸，與古今中外的高貴靈魂對(duì)話，充分發(fā)掘課文中的情愫，讓學(xué)生始終涌動(dòng)情感的生命源泉，培育熱愛祖國、關(guān)愛社會(huì)、眷念故土、珍愛青春、感恩親情和悲天憫人的情感，在提高學(xué)生語文素養(yǎng)的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)育人目標(biāo)。例如，教師可以引領(lǐng)學(xué)生從《背影》中感受父子深情，從《我與地壇》中體會(huì)母子情深，從《邊城》中認(rèn)識(shí)祖孫、兄弟之情，從《雨霖鈴》中體悟“執(zhí)手相看淚眼，竟無語凝噎”的離情別緒，從《京口北固亭懷古》中感悟拳拳赤子之情……

收集各組細(xì)胞，提取AGS細(xì)胞總蛋白，參照BCA檢試劑盒測(cè)法測(cè)定總蛋白的濃度和純度。將熱變性后的蛋白樣品按照80 μg/孔上樣至10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠孔中行電泳分離。電泳結(jié)束后，電轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯上。質(zhì)量濃度為50 g/L的脫脂奶粉封膜2 h后，根據(jù)抗體說明書將一抗用BSA封閉液稀釋至適當(dāng)濃度后，加入到盛硝酸纖維素(NC)膜的容器里，4 ℃搖床過夜。一抗分別為β-actin、E-cadherin、CDK2、Bcl-2、Bax。次日取出NC膜，用TBST清洗3次，加入二抗，室溫孵育1 h后，用TBST清洗3次。將ECL發(fā)光液均勻點(diǎn)滴在NC膜上，置于暗室條件下，室溫孵育約2 min，放入曝光盒中曝光顯影。

2 結(jié)果

如圖1所示，隨著濃度的增加，CPX對(duì)AGS細(xì)胞的

值逐漸減小，抑制率逐漸增大，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.01)。描繪CPX濃度-抑制率曲線圖，計(jì)算其

值約為13.6 μmol/L，提示CPX在較小劑量時(shí)對(duì)AGS細(xì)胞即產(chǎn)生毒性作用，且毒性作用的大小與藥物濃度成正比。選取不同濃度CPX(0、5、10、20 μmol/L)分別作用于AGS細(xì)胞，作用時(shí)間分別為24、48、72 h，CCK-8法檢測(cè)450 nm處

值，根據(jù)公式計(jì)算不同濃度、不同作用時(shí)間下CPX對(duì)AGS細(xì)胞抑制率的影響。如表1所示，隨著CPX濃度的上升及作用時(shí)間的延長，CPX對(duì)人胃癌AGS細(xì)胞的抑制率逐漸升高，呈明顯的濃度及時(shí)間依賴性；所得抑制率與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.01)。以上結(jié)果提示，CPX能夠明顯抑制AGS細(xì)胞的增殖活性。

將AGS細(xì)胞接種于24孔板中，待12 h細(xì)胞貼壁后，用含不同濃度(5、10、20 μmol/L)CPX的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，48 h后用2% BSA的胰酶消化收集至流式管中，2 000 r/min離心5 min，使用預(yù)冷的PBS緩沖液4 ℃洗滌細(xì)胞，該過程重復(fù)2遍，并將細(xì)胞過濾成單細(xì)胞懸液。用去離子水將10×Binding Buffer 稀釋至1×Binding Buffer，每管中加入1×Binding Buffer溶液400 μl重懸細(xì)胞，然后加入5 μl FITC和5 μl PI，避光孵育20 min。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

在多媒體教學(xué)實(shí)踐過程中，教師通常需要通過使用U盤、移動(dòng)硬盤等存儲(chǔ)介質(zhì)將課件導(dǎo)入瘦客戶機(jī)，然后才能進(jìn)行PPT講解、視頻播放等一系列教學(xué)內(nèi)容的演示。在經(jīng)過階段性的使用和測(cè)試過程中，我們會(huì)常常遇到瘦客戶機(jī)連接USB設(shè)備無法識(shí)別或者識(shí)別后無法打開文件的現(xiàn)象。而在連接USB外設(shè)實(shí)際應(yīng)用中我們也發(fā)現(xiàn)不同類型、不同品牌、不同傳輸速率的USB外設(shè)在瘦客戶機(jī)上的識(shí)別能力和讀取速度也不盡相同。綜上所述，USB外設(shè)識(shí)別能力較差的問題已嚴(yán)重影響到正常教學(xué)進(jìn)度和質(zhì)量。要想有效解決USB外設(shè)識(shí)別能力問題，我們需要在USB重定向方法和部署上再尋求突破[3-4]。

人胃癌AGS細(xì)胞經(jīng)過饑餓培養(yǎng)24 h后，用無血清培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10

ml

種植于細(xì)胞侵襲小室(Transwell)。實(shí)驗(yàn)組用含有不同濃度CPX的培養(yǎng)基(5、10、20 μmol/L)處理細(xì)胞，對(duì)照組加入與最大藥物濃度等量的DMSO。12 h后用0.1%結(jié)晶紫染液染色，然后置于倒置顯微鏡下隨機(jī)取6～8個(gè)視野觀察穿過小室膜的細(xì)胞，拍照并計(jì)算平均細(xì)胞個(gè)數(shù)。

各組AGS細(xì)胞凋亡率如表3所示，隨著CPX濃度增大，AGS細(xì)胞凋亡率逐漸升高，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05)。以上結(jié)果表明，CPX能夠誘導(dǎo)胃癌AGS細(xì)胞凋亡，且具有濃度依賴性。各組G

/G

期、S期、G

/M期比例如表4所示。流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期如圖5所示，與0 μmol/L組相比，CPX處理后G

/G

期所占比例呈濃度依賴性上升趨勢(shì)，當(dāng)CPX濃度為20 μmol/L時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05)。以上結(jié)果表明，當(dāng)CPX濃度較大時(shí)，可以阻滯AGS細(xì)胞周期于G

期。

以未處理組(0 μmol/L)作為空白對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組采用不同濃度CPX(5、10、20 μmol/L)分別處理AGS細(xì)胞。培養(yǎng)12 h后，使用Western blotting方法檢測(cè)腫瘤遷移相關(guān)蛋白E-cadherin、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和BAX、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶CDK2的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，不同濃度CPX處理AGS細(xì)胞12 h后，腫瘤遷移相關(guān)蛋白E-cadherin表達(dá)水平均較空白對(duì)照組上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05)；抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)水平較空白對(duì)照組逐漸下降，而促凋亡因子Bax表達(dá)水平則較空白對(duì)照組上升，當(dāng)CPX濃度為10 μmol/L時(shí)，Bax表達(dá)水平上升最明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05)；CDK2表達(dá)水平較空白對(duì)照組逐漸下降，20 μmol/L時(shí)下降最明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05，見圖6)。

3 討論

貴州省素有“天無三日晴，地?zé)o三尺平”的說法，從這句俗語中我們就可以看出該地區(qū)雨量充沛，地形地貌復(fù)雜多樣的特點(diǎn)。這也為貴州省優(yōu)美的自然環(huán)境創(chuàng)造了得天獨(dú)厚的自然條件。氣候和地形條件使得貴州省奇峰怪石處處可見，山、水、洞、林、石交相輝映，渾然一體，形成了動(dòng)態(tài)靜態(tài)結(jié)合的自然奇觀，獨(dú)特的自然景觀和豐富的自然資源。[2]貴州省的民族村寨都坐落于這種山水輝映古木參天的自然環(huán)境中，其豐富多彩的民族文化也產(chǎn)生于此。

全國家用電器工業(yè)信息中心（NAIC）是受中國輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)委托、經(jīng)中國輕工業(yè)信息中心批準(zhǔn)設(shè)立的專業(yè)信息機(jī)構(gòu)，主要開展行業(yè)信息收集、調(diào)查、分析研究，并組織編寫國內(nèi)外家用電器行業(yè)經(jīng)濟(jì)、科技的發(fā)展?fàn)顩r、水平、動(dòng)向、差距和發(fā)展趨勢(shì)，促進(jìn)行業(yè)健康、快速發(fā)展。同時(shí)，全國家用電器工業(yè)信息中心還受中國輕工業(yè)信息中心指導(dǎo)，承擔(dān)家用電器行業(yè)科技新成果、新技術(shù)的擇優(yōu)推薦工作。

胃癌治療藥物的開發(fā)主要是通過誘導(dǎo)細(xì)胞壞死、自噬、凋亡等途徑而殺傷腫瘤細(xì)胞；進(jìn)一步通過特異性抑制腫瘤細(xì)胞增長，從而控制實(shí)體腫瘤大?。蛔詈笸ㄟ^某些途徑抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲，達(dá)到控制腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的目的

。本研究選用人胃癌AGS細(xì)胞為研究對(duì)象，應(yīng)用CCK-8檢測(cè)法發(fā)現(xiàn)CPX對(duì)人胃癌AGS細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用，且這種抑制作用具有明顯的時(shí)間和濃度依賴性。

CPX是一種非專利性的廣譜抗真菌藥物，用于治療皮膚、指甲的真菌感染，但近年來被確定具有抗腫瘤作用而引起腫瘤治療學(xué)研究者的廣泛關(guān)注

。國內(nèi)外的研究表明，CPX可以誘導(dǎo)多種類型的腫瘤細(xì)胞死亡，包括急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)、乳腺癌、結(jié)直腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤，并抑制原代AML細(xì)胞異種移植瘤及人乳腺癌MDA-MB-231移植瘤的生長，并且無嚴(yán)重器官毒性或體質(zhì)量減輕。值得注意的是，先前進(jìn)行的口服CPX的人體I期研究已經(jīng)評(píng)估了其在難治性血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者中的安全性、劑量耐受性、藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)，證明了CPX吸收迅速并顯示出良好的治療指數(shù)

。然而，CPX介導(dǎo)的腫瘤生長抑制的詳細(xì)分子機(jī)制仍有待進(jìn)一步闡明。CPX治療晚期實(shí)體瘤的一期臨床試驗(yàn)也在進(jìn)行當(dāng)中(NCT03348514)，然而其抑癌的具體機(jī)制尚未完全闡明，進(jìn)一步深入研究CPX的抗腫瘤機(jī)制將有利于提高其抗腫瘤的療效，為其在作為臨床抗腫瘤藥物提供新思路。但有關(guān)CPX對(duì)胃癌細(xì)胞的作用尚未見研究和報(bào)道。

細(xì)胞凋亡可通過內(nèi)源性凋亡和外源性凋亡兩個(gè)主要途徑發(fā)生。兩種凋亡途徑最終均通過激活半胱氨酸蛋白酶(caspase)，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡

。Bcl-2家族在內(nèi)源性凋亡途徑中發(fā)揮主要作用，抑制其表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖

。Bcl-2蛋白家族通常可以分為兩大類。一種為抗凋亡蛋白，包括Bcl-2、Bcl-XL、MCL1等；另一種為促凋亡蛋白，其中Bax、Bak、Bok等蛋白，而另一類促凋亡蛋白亞家族只含有BH3結(jié)構(gòu)域，主要包括Bid、Bim、Noxa、Puma等。在健康細(xì)胞中，促凋亡蛋白如Bax處于非激活狀態(tài)，當(dāng)促凋亡蛋白Bax和Bak使線粒體外膜通透化時(shí)，線粒體通透性增加，線粒體膜間隙蛋白如細(xì)胞色素C、線粒體促凋亡蛋白SMAC等釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，促進(jìn)凋亡酶激活因子(Apaf-1)寡聚化，后寡集并活化caspase9，SMAC使得caspase從抑制蛋白脫離，導(dǎo)致下游的caspase-3及核酸酶等被活化，維持細(xì)胞生存的核酸和蛋白質(zhì)被降解，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生

?？沟蛲龅鞍譈cl-2的下游產(chǎn)物為膜蛋白，構(gòu)成線粒體內(nèi)膜，產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)活性氧，過度氧化可誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，而Bcl-2可通過抗氧化作用對(duì)抗細(xì)胞凋亡。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著CPX濃度的增加，凋亡細(xì)胞的比例逐漸增加，呈現(xiàn)出濃度依賴性。這說明CPX能夠誘導(dǎo)人胃癌AGS細(xì)胞凋亡。Western blotting實(shí)驗(yàn)中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)水平顯示，抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)水平較空白對(duì)照組逐漸下降，而促凋亡因子BAX表達(dá)水平則較空白對(duì)照組上升，這一結(jié)果也驗(yàn)證了上述凋亡控制基因參與了CPX誘導(dǎo)人胃癌AGS細(xì)胞凋亡的過程。

很多瑞士表廠以這些機(jī)心為基礎(chǔ)機(jī)心，增添一些復(fù)雜功能來個(gè)人化。過去的10年里，在首席執(zhí)行官兼所有者M(jìn)iguel Garcia的激勵(lì)和引導(dǎo)下，Sellita樹立了良好口碑，在質(zhì)量和數(shù)量方面都已成長為ETA可靠的替代者和強(qiáng)勁對(duì)手。但是，這家公司是否能通過自產(chǎn)擒縱機(jī)構(gòu)來保持價(jià)格上的競(jìng)爭(zhēng)力還有待觀察。

細(xì)胞周期調(diào)控異常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制，細(xì)胞周期進(jìn)程受到嚴(yán)格控制，調(diào)控因素包括細(xì)胞周期蛋白(Cyclins)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(Cyclin dependent kinases，CDKs)和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(Cyclin dependent kinases inhibitors，CDKIs)

。上述三類物質(zhì)在G

/S期、G

/M期兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行調(diào)控，前兩項(xiàng)屬于細(xì)胞周期正調(diào)控蛋白，而后者屬于細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控蛋白。CDKs與Cyclin結(jié)合后進(jìn)入細(xì)胞周期關(guān)鍵點(diǎn)，細(xì)胞周期得以順利進(jìn)行，在細(xì)胞周期G

/G

期，細(xì)胞主要產(chǎn)生CDK2及Cyclin D，三者能夠產(chǎn)生絡(luò)合物從而使細(xì)胞通過S期檢驗(yàn)點(diǎn)，進(jìn)入S期(DNA和蛋白質(zhì)合成期)，而此時(shí)CDKIs能夠與上述絡(luò)合物結(jié)合，從而抑制其活性，使得進(jìn)入S期進(jìn)程受阻，細(xì)胞周期阻滯在G

/G

期。若CDK2表達(dá)下調(diào)時(shí)，可以引起G

/G

期的延長，延緩G1期向S期轉(zhuǎn)換的進(jìn)程，更多細(xì)胞停滯在G

/G

期。在本研究中流式細(xì)胞術(shù)表明，隨著CPX濃度升高，G

/G

期細(xì)胞比例逐漸上升，S期細(xì)胞比例逐漸降低。Western blotting結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比，CDK2表達(dá)水平逐漸下降，CPX濃度為20 μmol/L時(shí)下降最明顯。這些結(jié)果表明，CPX能增加G

/G

期細(xì)胞比例，降低S期細(xì)胞比例。而S期細(xì)胞染色體成倍增加，是惡性腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)鍵時(shí)期。CPX能夠抑制人胃癌AGS細(xì)胞DNA復(fù)制，干擾AGS細(xì)胞的增殖。

侵襲和遷移是惡性腫瘤的基本特征之一，其中涉及到多種基因和信號(hào)通路的異常，是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多步驟的過程，侵襲和遷移會(huì)影響惡性腫瘤的治療效果，也會(huì)導(dǎo)致90%以上的患者死亡

。腫瘤在發(fā)生轉(zhuǎn)移前，原發(fā)灶的腫瘤細(xì)胞受到微環(huán)境影響會(huì)產(chǎn)生一種改變稱為上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)。EMT是指生理或病理?xiàng)l件下上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)換為間質(zhì)細(xì)胞的情況，這一轉(zhuǎn)換使得細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)。EMT是影響惡性腫瘤侵襲、遷移能力的重要機(jī)制。上皮細(xì)胞標(biāo)志物的丟失是EMT發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，包括E-cadherin、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)及細(xì)胞角蛋白(cytokeratin)等。上皮細(xì)胞的粘附蛋白E-cadherin，在細(xì)胞之間起黏附作用，發(fā)生EMT時(shí)，腫瘤組織E-cadherin表達(dá)呈現(xiàn)出不同程度下降，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞之間粘附力降低，易脫離原發(fā)病灶，最終導(dǎo)致腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移

。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著CPX濃度升高，人胃癌AGS細(xì)胞遷移、侵襲能力逐漸降低，表明CPX能夠抑制胃癌AGS細(xì)胞遷移。Western blotting結(jié)果顯示，隨著CPX濃度升高，E-cadherin表達(dá)上調(diào)，表明E-cadherin在CPX抑制胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮重要作用。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CPX能夠顯著影響人胃癌AGS細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡和細(xì)胞周期，初步探討了其分子機(jī)制，尚未能深入了解CPX對(duì)胃癌細(xì)胞抗腫瘤作用的分子機(jī)制，需要我們?cè)诮窈蟮难芯恐羞M(jìn)一步探討。我們計(jì)劃在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中使用裸鼠的胃癌移植瘤模型來檢測(cè)CPX的體內(nèi)抗腫瘤效果及探討其分子機(jī)制。

綜上所述，CPX具有一定的抑制人胃癌AGS細(xì)胞增殖和遷移的能力，低劑量的CPX即能夠顯著抑制人胃癌AGS細(xì)胞的增殖和遷移，CPX有望成為治療胃癌的新型藥物。隨著研究的日趨深入，CPX的抗腫瘤作用及機(jī)制將會(huì)進(jìn)一步細(xì)致深入，為CPX在胃癌治療中的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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