李亞利,王寶群,林莎莎,鄒圣燦

(青島琛藍(lán)海洋生物工程有限公司,青島 266000)

可吸收植物多糖止血微球是以植物淀粉為原料,經(jīng)過(guò)乳化、交聯(lián)等技術(shù)制備的具有空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的球形或橢圓形粉末,交聯(lián)過(guò)程中以環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑,經(jīng)過(guò)一系列清洗工藝后,最終產(chǎn)品中仍有可能會(huì)殘留少量的環(huán)氧氯丙烷。環(huán)氧氯丙烷是一種用途較為廣泛的基本有機(jī)化工原料,根據(jù)歐洲藥品管理局(EMA)頒布的《遺傳毒性雜質(zhì)限度指導(dǎo)原則》,環(huán)氧氯丙烷含有遺傳毒性雜質(zhì)的警示結(jié)構(gòu),會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)品使用者的身體健康,并且很多動(dòng)物試驗(yàn)表明環(huán)氧氯丙烷具有動(dòng)物致癌作用[1-2],因此需要嚴(yán)格控制止血微球中環(huán)氧氯丙烷的殘留量。目前其他領(lǐng)域雖有一些關(guān)于環(huán)氧氯丙烷測(cè)定方法的報(bào)道[3-5],但關(guān)于止血微球中環(huán)氧氯丙烷殘留量測(cè)定的報(bào)道卻甚少,在T/ZZB 1062－2019《可吸收止血微球》中也只是要求對(duì)環(huán)氧氯丙烷殘留量進(jìn)行檢測(cè),卻并未給出具體測(cè)定方法。文獻(xiàn)[6-7]在萃取環(huán)氧氯丙烷后,采用火焰離子化檢測(cè)器(FID),以氣相色譜直接進(jìn)樣法進(jìn)行測(cè)定,該方法操作繁瑣,操作過(guò)程中很容易出現(xiàn)環(huán)氧氯丙烷提取不完全或揮發(fā)損失的問(wèn)題,不能避免產(chǎn)品中其他成分對(duì)色譜系統(tǒng)的污染,同時(shí),因需要使用其他有機(jī)溶劑,會(huì)對(duì)環(huán)境造成二次污染,同時(shí)也會(huì)損害檢測(cè)人員的身體健康。

本工作采用頂空-氣相色譜法對(duì)止血微球中環(huán)氧氯丙烷殘留量進(jìn)行測(cè)定,方法操作簡(jiǎn)單、便捷,更重要的是可以減少環(huán)氧氯丙烷的損失,回收率高。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

GC-2014C型氣相色譜儀,配電子俘獲檢測(cè)器(ECD)和頂空自動(dòng)進(jìn)樣器;Master系列純水/超純水系統(tǒng);AR224 CN 型分析天平。

環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:0.1 g·L－1,將少量水置于100 mL 容量瓶中,再準(zhǔn)確移取環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)品8.5μL于容量瓶中,加水定容,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為0.1 g·L－1的環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,于4 ℃冷藏備用。其他質(zhì)量濃度均由此溶液用水逐級(jí)稀釋制得。

環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)品的純度為99.91%;試驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 頂空條件

頂空平衡溫度80 ℃,平衡時(shí)間30.0 min;循環(huán)時(shí)間8.0 min。

1.2.2 色譜條件

DB-5毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);檢測(cè)器溫度280 ℃;電流1 n A;尾吹氣為高純氮?dú)?尾吹流量30 mL·min－1,結(jié)束時(shí)間5.0 min;氣化室溫度200 ℃;分流進(jìn)樣,分流比為20∶1;載氣為高純氮?dú)?色譜柱流量1.00 mL·min－1,吹掃流量3.0 mL·min－1;柱溫55 ℃(恒定溫度),平衡時(shí)間3.0 min。

1.3 試驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取0.15 g(精確至0.000 1 g)止血微球粉末樣品于20 mL頂空瓶中,準(zhǔn)確移取5.00 mL水置于頂空瓶中,迅速加蓋密封,按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 頂空平衡溫度的選擇

水的沸點(diǎn)為100℃,當(dāng)以水為溶劑時(shí),頂空平衡溫度接近100℃時(shí)存在因內(nèi)部氣體壓力過(guò)大而發(fā)生爆炸的危險(xiǎn);頂空平衡溫度過(guò)低,則不能使環(huán)氧氯丙烷充分汽化,會(huì)降低檢測(cè)方法的靈敏度。因此,選擇60,70,80 ℃為頂空平衡溫度進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明,在其他測(cè)定條件相同的情況下,隨著頂空平衡溫度的升高,環(huán)氧氯丙烷的峰面積增大,即在可選的溫度范圍內(nèi),頂空平衡溫度為80 ℃時(shí),對(duì)應(yīng)的環(huán)氧氯丙烷峰面積最大,靈敏度最高。因此,試驗(yàn)選擇頂空平衡溫度為80 ℃。

2.2 頂空平衡時(shí)間的選擇

在20 mL 頂空瓶中加入5 mL 質(zhì)量濃度為2.0 mg·L－1的環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液,于80 ℃分別平衡10,20,30,40 min,所得環(huán)氧氯丙烷的峰面積如圖1所示。

圖1 頂空平衡時(shí)間對(duì)環(huán)氧氯丙烷峰面積的影響Fig.1 Effect of headspace equilibrium time on peak area of epichlorohydrin

由圖1可知:隨著頂空平衡時(shí)間的延長(zhǎng),環(huán)氧氯丙烷的峰面積不斷增大;但30 min后峰面積變化不明顯,說(shuō)明平衡時(shí)間達(dá)到30 min時(shí),頂空瓶里氣液平衡已基本實(shí)現(xiàn)。為了提高工作效率,試驗(yàn)選擇頂空平衡時(shí)間為30 min。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定下限

取5支100 mL容量瓶,先加入少量水,移取適量的環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,加水逐級(jí)稀釋,配制成質(zhì)量濃度為0.02,0.10,0.20,0.50,2.0 mg·L－1的環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。分別準(zhǔn)確移取5 mL上述環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液系列于20 mL頂空瓶中,迅速壓蓋密封,進(jìn)氣相色譜頂空裝置進(jìn)行測(cè)定。以環(huán)氧氯丙烷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明:環(huán)氧氯丙烷的質(zhì)量濃度在0.02～2.0 mg·L－1內(nèi)與其對(duì)應(yīng)的峰面積成線性關(guān)系,線性回歸方程為y＝1.010×105x＋2.085×102,相關(guān)系數(shù)為0.999 6。

按10倍信噪比(S/N)計(jì)算測(cè)定下限(10S/N),結(jié)果為0.005 mg·L－1。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

分別配制6份質(zhì)量濃度為1.7 mg·L－1的環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液,按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定,記錄環(huán)氧氯丙烷色譜峰的峰面積,計(jì)算其峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果顯示,峰面積的RSD 為0.55%,表明方法的重復(fù)性較高。

2.5 精密度和回收試驗(yàn)

按照試驗(yàn)方法對(duì)空白樣品進(jìn)行3 個(gè)濃度水平(0.05,0.35,2.0 mg·L－1)的加標(biāo)回收試驗(yàn),計(jì)算回收率及測(cè)定值的RSD,結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab.1 Results of tests for precision and recovery(n=6)

由表1可知,回收率為95.3%～101%,RSD 均小于7.0%,說(shuō)明方法的精密度和準(zhǔn)確度較好。

2.6 樣品分析

按照試驗(yàn)方法測(cè)定3 批(批號(hào)Z20180130,Z20180226,Z20180319)止血微球粉末樣品中環(huán)氧氯丙烷殘留量,測(cè)定結(jié)果分別為19.95,21.17,21.09μg·g－1。

頂空進(jìn)樣不需要對(duì)待測(cè)物進(jìn)行萃取或浸提,不僅減少了待測(cè)物的損失,同時(shí)也減少了試劑對(duì)色譜系統(tǒng)帶來(lái)的干擾和污染,縮短了分析時(shí)間,延長(zhǎng)了色譜柱壽命,而且提高了方法的重現(xiàn)性[8-9]。本工作采用ECD,以頂空-氣相色譜法對(duì)止血微球中環(huán)氧氯丙烷殘留量進(jìn)行測(cè)定,操作便捷,減少了環(huán)氧氯丙烷的損失,是一種簡(jiǎn)單可行的方法。