楊 丹，徐 廣，申 杰，鄒 艷，羅 舜，羅 敏，鄧才富*

（1.重慶市藥物種植研究所，重慶 南川 408435；2.重慶市道地藥材規(guī)范化生產工程技術研究中心，重慶 南川 408435；3.重慶市南川區(qū)中醫(yī)藥產業(yè)創(chuàng)新發(fā)展中心，重慶 南川 408400）

桂花［Osmanthus fragrans（Thunb.）Lour.］，為木犀科（Oleaceae）木犀屬（Osmanthus）木犀的俗稱，是我國十大傳統(tǒng)名花之一［1］。桂花果實包括果皮及種子，《本草綱目》記載：桂花籽，味甘、辛，性溫，能暖胃、平肝、益胃、散寒［2］，《植物名實圖考長編》記載桂籽能治心痛，《江蘇藥材志》記載“桂花籽暖胃，平肝，益腎，散寒”，民間用作止痛劑，治肝胃氣痛［3-4］。桂花果中含有環(huán)烯醚萜苷［5］、色素［6］、多羥基酚類、多糖［7］、紅景天苷［8］、齊墩果酸［9］等多種化合物，具有抗氧化［10］、抗血栓［5］等活性。不同品種揮發(fā)油含量不同，且主要以油酸和亞油酸為主［11］，成熟的桂花籽油的碘值（I）為124.38 g/100 g，過氧化值為1.16 mmol/kg，皂化值為190.28 mg/g，酸值為1.24 mg/g［12］，說明桂花籽油可以作為功能性植物油開發(fā)利用，但是桂花種子氨基酸種類及含量、礦物質含量鮮見報道。本文研究分析八月桂桂花籽脂肪酸成分及氨基酸、礦物質含量，可為綜合開發(fā)桂花籽化妝品、飼料添加劑等奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

氣相色譜（7890A）-質譜（5975C）聯(lián)用儀（美國安捷倫），氨基酸自動分析儀（L8900，日本日立），ICP-OES（美國安捷倫5110）、揮發(fā)油提取裝置（DZTW 型，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司），旋轉蒸發(fā)儀（CCA-20 鞏義市予華儀器有限責任公司），電子天平（HZK-FA210S，福州華志科學儀器有限公司），電熱鼓風干燥箱（GZX-9246MBE，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）。

1.2 材料

八月桂桂花種子，采自重慶市南川區(qū)三泉鎮(zhèn)重慶藥物種植研究所藥用植物園，經劉正宇研究員鑒定為八月桂桂花種子；16 種氨基酸標準品（≥98%，上海源葉生物科技有限公司），Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Cu 標準品（國家有色金屬及電子材料分析測試中心），其它試劑均為分析純。

2 方法

2.1 油脂提取

桂花果采收后去皮，至55℃烘箱內烘干，粉碎過篩，準確稱取5 g 樣品，放入500 mL 三角瓶中，加400 mL 石油醚浸泡提取36 h，間斷超聲10 次，每次超聲30 min。提取液抽濾除去殘渣，濾液用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸餾，回收石油醚。反復提取3次，得淺黃色油狀液體即桂花籽油［12］。

2.2 脂肪酸甲酯化

稱取制得桂花籽油約50 mg，放入10 mL 試管中，加入1 mL 石油醚的混合液，使油脂溶解。再加入1 mL 0.5 mol/L 氫氧化鉀甲醇溶液，振蕩1 min，室溫下靜置10 min。加5 mL 蒸餾水，靜置10 min，取上層液無水硫酸鈉干燥，過0.22 μm 濾膜后進行GC-MS分析［1］。

2.3 色譜條件

選用HP-5MS 石英毛細柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm），載氣為He，進樣口溫度240℃，流速1 mL/min，不分流進樣，柱初始溫度50℃，保持1 min，然后以10 ℃/min 速度升升溫至150℃，保持2 min，再以1℃/min 升至153℃，保持2 min，再以15℃/min 升至200℃，最后以5℃/min升至260℃，保持2 min。

2.4 質譜條件

EI 電離，電子能量70 eV，離子源溫度230℃，四級桿溫度150℃，掃描范圍30～500，溶劑延遲6 min。成分分析NIST98質譜數據檢索標準譜庫解析成分，以相似度大于80%作為結構確認依據，小于該值定義為未知，以面積歸一法計算各組分相對含量。

2.5 粗蛋白質含量測定

采用凱氏定氮法測定［13］，蛋白含量（%）= 氮含量×6.25。

2.6 氨基酸酸含量分析

參考文獻［14］，精密稱取樣品0.5 g 于氨基酸水解管內，加入6 mol/L鹽酸10 mL，將水解管抽真空后通入氮氣，插入鹽酸液面下持續(xù)通氣2 min，重復三次，于110℃下水解24 h，取出冷卻。全部轉移并用蒸餾水定容至50 mL 容量瓶內，搖勻，取1 mL 試液于20 mL 試管中，氮氣吹干，加入2 mL 0.02 mol/L 鹽酸定容，過膜，氨基酸自動分析儀分析。熒光檢測器（VIS）；檢測波長：440 nm 和570 nm；色譜柱：離子交換柱，柱溫60℃；進樣體積：20 μL；流動相：檸檬酸緩沖液，流速0.4 mL/min；柱后反應柱的柱溫：135℃。

2.7 16種氨基酸標準品配制

精密稱定組氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、賴氨酸、脯氨酸、丙氨酸、酪氨酸、纈氨酸、谷氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸16 種氨基酸標準品，加入適量6 mol/L 鹽酸溶解，定容至50 mL［14］，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.8 6種礦物質分析

精密稱取研磨均勻的樣品約0.3 g，置于消解罐中，加濃硝酸8 mL，置于微波消解儀中消解［15］。消解功率1800 W，第一步：溫度為140℃，爬升時間15 min，保持時間5 min；第二步：升溫至180℃，爬升時間10 min，保持時間20 min；第三步：冷卻至室溫，冷卻時間20 min。消解完成后趕酸至0.5 mL 左右，冷卻至室溫，超純水定容至25 mL 容量瓶中，搖勻，即得。標準曲線繪制：根據梯度稀釋法，用微量移液槍精確吸取100 μg/mL 的多元素混合標準溶液10 mL，定容于100 mL 容量瓶，制成10 μg/mL 的標準溶液母液，再從母液中分別吸取標準溶液各0.0、0.5、2.5、5.0、12.5、25.0 mL，用2%HNO3進行稀釋，定容于50 mL容 量瓶中，配制成0.00、0.10、0.50、1.00、2.50、5.00 mg/L 的多元素混合標準溶液，待測。儀器條件：高頻發(fā)射器功率為1200 W；氬氣壓力為0.65 MPa；冷卻氣流量12 L/min；輔助氣流量0.5 L/min；霧化氣流量0.5 L/min；蠕動泵正常流速1.00 mL/min；正常進樣時間15 s；快泵流速4.0 mL/min；清洗時間5 s；積分時間1 s；測量次數3次。

3 結果與分析

3.1 脂肪酸成分分析

通過GC-MS分析桂花籽油化學成分分析，總離子流圖見圖1，棕櫚酸20.47%，油酸5.91%，亞油酸29.3%，桂花籽其他脂肪酸化合物見表1。

表1 桂花籽脂肪酸成分Table 1 Chemical composition of O.fragrans seed oil

圖1 桂花籽揮發(fā)油GC-MS總離子流圖Fig. 1 GC-MS total ion flow diagram of O.fragrans seed volatile oil

3.2 蛋白含量

以全自動凱氏定氮儀測定桂花籽蛋白質含量，得到粗蛋白的含量為22.9%。

3.3 氨基酸含量

通過水解桂花籽共分析出16種氨基酸，氨基酸總量6.49 g/100 g，必需氨基酸含量2.63 g/100 g，非必需氨基酸3.86 g/100 g，其中谷氨酸含量相對較高。甲硫氨酸在體內能代謝轉化為胱氨酸，后者在細胞內合成谷胱氨肽，適當提高蛋氨酸攝入量，可增加機體Se-Met 的生物活性，表現(xiàn)為組織儲量硒增加，谷胱氨肽過氧化物酶的活性升高。氨基酸作為蛋白質的分解產物，是評價食品質量及營養(yǎng)價值的重要指標［16］。

3.4 礦物質含量

通過表3 可以看出，桂花籽中微量元素含量非常高，其中Ca的含量最高1.29×103mg/kg，Mg的含量808 mg/kg，Zn的含量20.3 mg/kg，這三種元素含量相對較高。桂花籽6 種微量元素含量比較：Ca＞Mg＞Zn＞Cu＞Mn＞Fe，與日常生活中堅果比較，桂花籽中的微量元素含量相對較高［17］。

表3 桂花籽中6種微量元素含量Table 3 Contents of six trace elements in O.fragrans seeds

4 討論與結論

通過GC-MS 分析八月桂桂花籽中脂肪酸組成分析，共鑒定出15 種脂肪酸類化合物，其中棕櫚酸20.47%，油酸5.91%，亞油酸29.3%。說明桂花籽具有很高的營養(yǎng)價值。亞油酸是人體必需的脂肪酸，可以改善人體膽固醇的分布［18-19］，能有效預防動脈硬化、高膽固醇血癥和高脂血癥，治療心血管系統(tǒng)疾病、降低血脂作用，同時修復受損組織促進體內新組織的生長［20］，不飽和脂肪酸具有抗癌、抗炎［21］等功效，因此廣泛應用于醫(yī)療保健等領域。同時，脂肪酸作為安全高效的添加劑已經畜牧生產中得到廣泛的應用［22］，在有機復合肥的研制和植物性蛋白飼料開發(fā)領域，將進一步探索其更廣闊的應用空間。通過分析桂花籽粗蛋白和16種氨基酸含量，粗蛋白含量為22.9%，氨基酸總量6.49 g/100 g，其中必需氨基酸含量2.63 g/100 g，非必需氨基酸3.86 g/100 g，桂花籽中谷氨酸含量相對較高，谷氨酸可以參與肝臟、肌肉及大腦等組織中的解毒活動，并參與腦組織代謝，天冬氨酸對于骨骼有一定的保護作用，且兩種氨基酸在提升大腦記憶力方面有一定作用。桂花籽中6 種礦物質含量比較Ca＞Mg＞Zn＞Cu＞Mn＞Fe，其中Ca含量最高，礦物質元素中Fe、Zn、Cu、Mn 是微量元素，Ca、Mg 是常量元素，礦物質元素不僅影響人的生長發(fā)育、新陳代謝，還促進動物、植物生長。桂花籽中含有較高的脂肪酸和氨基酸、礦物質等營養(yǎng)成分，在今后研發(fā)中，可以將其應用于食品、飼料添加劑、化妝品、抗氧化劑、醫(yī)藥等方面。通過桂花籽營養(yǎng)成分基礎研究，能夠合理的開發(fā)利用，開發(fā)有機復合肥、飼料添加劑、化妝品等產品，并投入生產中，不僅解決資源浪費，同時解決城市環(huán)境污染問題。從科技扶貧的思路分析，農戶通過種植桂花樹，打造桂花風景園林發(fā)展旅游業(yè)，同時還可以通過采摘桂花果，增加額外的收入，實現(xiàn)科技扶貧目的。

表2 桂花籽中氨基酸含量Table 2 Amino acid content of O.fragrans seed