徐 廣，譚秋生，楊 丹，傅 滟，郭 瑀，羅 川，羅 敏，鄧才富

(重慶市藥物種植研究所 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量控制研究中心，重慶市道地藥材規(guī)范化生產(chǎn)工程技術(shù)研究中心，重慶 南川 408435)

中藥前胡為傘形科植物白花前胡PeucedanumpraerupterumDunn.的干燥根，具有降氣化痰、疏散風(fēng)熱等功效。臨床多用于外感風(fēng)熱、痰熱喘咳、風(fēng)熱咳嗽等癥[1]?，F(xiàn)代研究表明，其主要藥用活性成分為白花前胡甲素、白花前胡乙素等香豆素化合物，主要的藥理作用為鈣通道阻滯、降血壓、抗心律、平喘、抗癌等[2]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)其藥理活性[3-4]和鑒別研究較多[5-6]，對(duì)不同產(chǎn)地、野生和栽培的白花前胡指標(biāo)成分分析也有報(bào)道[7-8]，但白花前胡提取方式對(duì)其指標(biāo)成分的影響研究較少。筆者在對(duì)不同企業(yè)提供的樣品開(kāi)展質(zhì)量分析的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)不同樣品其內(nèi)在成分的差異極其明顯，因此，利用超聲法和回流法對(duì)白花前胡樣品進(jìn)行不同方式提取，采用HPLC法測(cè)定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量，研究?jī)煞N提取方式對(duì)白花前胡成分的提取效果，探討提取方式對(duì)白花前胡甲素和白花前胡乙素含量的影響，為前胡藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀[包括LCsolution色譜管理處理軟件、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器、日本島津Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)、CBM-20Alite系統(tǒng)控制器]、METTLER AL104型電子天平(感量：0.1 mg)，CPA225D型電子天平(感量：0.01 mg)，Molecular標(biāo)準(zhǔn)智能型純水機(jī)，KQ-1000DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，DHG電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海龍躍儀器有限公司)，HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海汗諾儀器有限公司)。

1.2 材料

白花前胡樣品均采自重慶市石柱縣沙子鎮(zhèn)青園村前胡種植基地，海拔高度1 130 m左右，選取種植基地土壤類型差異較為明顯的沙壤土、棕紫土、灰棕紫泥和紫色夾砂土4種土壤類型所產(chǎn)藥材樣品，經(jīng)重慶市藥物種植研究所鄧才富研究員鑒定為PeucedanumpraerupterumDunn.正品白花前胡。

1.3 試劑

甲醇(色譜純)：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司，批號(hào)：20190901；三氯甲烷：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司，批號(hào)：20190702。水：均為臨用現(xiàn)制的超純水；白花前胡甲素、白花前胡乙素對(duì)照品：中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為111711-201904、111904-201804。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部(以下簡(jiǎn)稱“藥典”)“前胡”標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下【含量測(cè)定】規(guī)定測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6 mm×250 mm 5．0 μm)；以甲醇-水(75∶25)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為321 nm，理論塔板數(shù)按白花前胡甲素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。柱溫：室溫。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取白花前胡甲素、白花前胡乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL各含白花前胡甲素73.0 μg、白花前胡乙素79.8 μg的混合溶液，即得(色譜見(jiàn)圖1)。

圖1 白花前胡甲素(1)、白花前胡乙素(2)混合對(duì)照品色譜

2.3 供試品溶液制備

A：2015年版藥典超聲方法：取前胡樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)15 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液5 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

B：回流法：采用文獻(xiàn)改進(jìn)方法：取前胡樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2.0 g，精密稱定，加100 mL色譜純甲醇回流6 h，過(guò)濾，濾液濃縮，取殘?jiān)?，加甲醇溶解并定容?0 mL，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4 樣品測(cè)定

精密稱定各樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10 μL，各色譜見(jiàn)圖2，對(duì)測(cè)定峰面積進(jìn)行積分，計(jì)算樣品含量，見(jiàn)表2。

注：S1：沙壤土；S2：棕紫色土；S3：灰棕紫泥；S4：紫色夾砂土

表2 不同提取方式各樣品指標(biāo)成分含量 (%)

3 討論

3.1 土壤類型對(duì)藥材質(zhì)量的影響

由表2數(shù)據(jù)可以看出，在同一管理模式下4種不同土壤類型中產(chǎn)出的白花前胡樣品，其甲素和乙素的含量存在較大差異，表明不同土壤類型自身所含礦物質(zhì)的差異對(duì)其所產(chǎn)藥材內(nèi)在質(zhì)量有一定影響。其中，以2015年版藥典超聲法為參照，紫色夾砂土所產(chǎn)藥材樣品的白花前胡甲素含量為0.846%，不滿足藥典不低于0.9%的要求，其他3種土壤類型所產(chǎn)藥材樣品白花前胡甲素含量均能滿足；而4種土壤類型所產(chǎn)藥材樣品的白花前胡乙素含量均低于藥典0.24%的最低要求。表明生產(chǎn)企業(yè)在選擇種植基地時(shí)不能忽略前期選址過(guò)程中對(duì)生態(tài)環(huán)境和具體土壤礦質(zhì)養(yǎng)分的實(shí)際考量。

3.2 提取方式對(duì)藥材指標(biāo)成分檢出量的影響

對(duì)比4組樣品回流制樣和超聲制樣分析結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，藥典超聲法提取制樣較回流法提取制樣處理后白花前胡甲素含量均低，回流法較藥典超聲法使白花前胡甲素提高了8.7%～21.9%，而白花前胡乙素含量則相反，藥典超聲法較回流法使白花前胡乙素提高了10.4%～21.95%。

回流法提取溫度較高，所用溶劑甲醇極性較大；超聲法提取溫度相對(duì)較低，三氯甲烷極性相對(duì)?。粚?duì)比白花前胡甲素和白花前胡乙素的熱穩(wěn)性，乙素須0～10 ℃避光保存表明乙素?zé)岱€(wěn)性相對(duì)較差。4個(gè)樣品白花前胡乙素含量在回流法提取條件下均低于超聲法，可能是回流溫度高，使白花前胡乙素有一定程度的破壞；且由于相似相容原理，通過(guò)對(duì)比白花前胡甲素和白花前胡乙素的HPLC出峰時(shí)間，推測(cè)甲素極性較乙素大，故乙素更易溶于極性較小的三氯甲烷中；反之，甲醇極性相對(duì)較大，甲素含量回流法均高于超聲法。

《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部前胡項(xiàng)下的HPLC測(cè)定方法中供試品溶液的制備采用三氯甲烷為提取溶劑，三氯甲烷屬于二類有毒試劑，對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)人員身體可產(chǎn)生一定程度的危害。而在現(xiàn)實(shí)生活中，中藥的煎煮熬制并無(wú)危害人體健康的有機(jī)溶劑參與，因而應(yīng)積極開(kāi)展更貼近應(yīng)用實(shí)際的檢驗(yàn)檢測(cè)方法研究，形成以生物評(píng)價(jià)為核心，以活性成分與生物活性相結(jié)合的中藥整體質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，從而推動(dòng)中藥種植質(zhì)量提升。