龍 燕，柯 璇，洪 浩

（中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥理系，江蘇 南京 211198）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）是一種臨床表現(xiàn)為記憶缺失、認(rèn)知能力下降、空間視覺損害、執(zhí)行功能減退和人格改變等多方面神經(jīng)功能障礙的神經(jīng)退行性疾?。?］。AD的主要病理特征為腦內(nèi)神經(jīng)元外β淀粉樣蛋白（amyloid β-protein，Aβ）沉積形成的老年斑和神經(jīng)元內(nèi)高度磷酸化的tau蛋白聚集形成的神經(jīng)元纖維纏結(jié)［2］。AD是由遺傳、環(huán)境、炎癥和年齡等多種因素導(dǎo)致的疾病，目前對于其發(fā)病機(jī)制提出了多種假說，Aβ級聯(lián)假說占據(jù)AD 發(fā)病機(jī)制的主導(dǎo)地位［3］。Aβ 主要有 Aβ1-40和Aβ1-422種，由β淀粉樣前體蛋白切割酶1（β-site of amyloid precursor protein cleaving enzyme 1，BACE1）和γ分泌酶先后剪切淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）產(chǎn)生［4］，兩者在腦內(nèi)濃度比是10∶1，而Aβ1-42疏水性強(qiáng)、毒性大，易聚合成具有生物活性的構(gòu)象類型，形成老年斑沉淀的核心，并可能引發(fā)AD［5］。迄今為止，治療AD的藥物僅能暫時緩解癥狀，均不能阻止AD的發(fā)展進(jìn)程，且不良反應(yīng)較大［6］。目前，抑制腦內(nèi)Aβ聚集、促進(jìn)Aβ清除是研究AD防治藥物的重要策略之一［7］。

半胱氨酰白三烯受體1（cysteinyl leukotriene receptor 1，CysLT1R）是一種G蛋白偶聯(lián)受體，由6個親水環(huán)連接7個跨膜疏水區(qū)組成［8］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在腦缺血、腦外傷和腦脊髓炎等疾病動物模型中，中樞CysLT1R被過度激活，且與神經(jīng)功能受損顯著相關(guān)，而CysLT1R拮抗劑可產(chǎn)生明顯的保護(hù)作用［9-12］。本課題組前期研究結(jié)果顯示，CysLT1R參與多種因素誘導(dǎo)的動物認(rèn)知功能障礙，且CysLT1R拮抗劑普侖司特（pranlukast，Pran）可以顯著改善Aβ誘導(dǎo)的AD模型小鼠的認(rèn)知功能障礙［13-16］。與老齡對照組相比，AD患者前額葉皮質(zhì)CysLT1R水平升高了2倍，并且APPswe/PS1ΔE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠（APP/PS1小鼠）的CysLT1R mRNA和蛋白水平隨著年齡的增長而增加［17］。表明CysLT1R可能在AD的發(fā)病過程中起著重要作用。本研究旨在探究CysLT1R對APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元中Aβ生成的影響及其可能的機(jī)制，為進(jìn)一步闡明CysLT1R在AD發(fā)病過程中的重要作用提供理論依據(jù)，同時也為抗AD藥物靶標(biāo)的發(fā)掘提供實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動物

雌性孕APP/PS1小鼠，約12周齡（孕16～18 d），體重50～60 g，購自南京大學(xué)模式動物研究所，動物許可證號：SCXK（蘇）2015-0001。動物飼養(yǎng)于室溫20～24℃、濕度40%～60%、光照時間8∶00-20∶00的實驗室環(huán)境中，自由飲水?dāng)z食。本研究通過中國藥科大學(xué)倫理委員會審批，編號為SYXK2016-0011。

1.2 藥品、試劑和儀器

YM17690（批號：108806-41-3），上?？德锟萍加邢薰?；Pran（批號：150821-03-7），美國Sigma-Aldrich公司；慢病毒-綠色熒光蛋白（lentivirusenhanced green fluorescent protein，LV-EGFP）載體（1×1012TU·L-1，批號：00015399）和LV-CysLT1REGFP載體（1×1012TU·L-1，批號：00015399），上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司；脫氧核糖核酸酶Ⅰ和木瓜蛋白酶，白鯊生物科技有限公司；人Aβ1-40（批號：CSB-E06928Eq）和人 Aβ1-42（批號：CSBE10684h）ELISA試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；兔抗小鼠APP，BACE1和NF-κB P65單克隆抗體（批號：2452S，5606S和4764T），美國CST公司；兔抗小鼠PS1和PS2多克隆抗體（批號：sc-7860和sc-1456-R），美國Santa Cruz公司；兔抗小鼠CysLT1R多克隆抗體（批號：120500），美國Cayman Chemical公司；兔抗小鼠β肌動蛋白單克隆抗體（批號：BM3873）和辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體（二抗，批號：BA1039），博士德生物工程有限公司；NP-40蛋白裂解液、苯甲基磺酰氟、多聚賴氨酸和BCA蛋白濃度測定試劑盒（批號：P0012），碧云天生物技術(shù)有限公司；膜蛋白、核蛋白和胞質(zhì)蛋白抽提試劑盒（批號：C510002），上海生工生物工程股份有限公司；胰蛋白酶、兔抗小鼠 Aβ1-40（批號：44-348A）和 Aβ1-42（批號：27250018）多克隆抗體、胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基、B27和Neurobasal培養(yǎng)基，美國Invitrogen公司。兔抗小鼠組蛋白3多克隆抗體（批號：ab1791）、兔抗小鼠Na+-K+-ATP酶單克隆抗體（批號：ab167390），美國Abcam公司。核定位序列多肽（nuclear localization sequence peptides，NLS-pep，序列：RKHSLSSMTYVPKKK）及其陰性對照多肽（none-NLS-pep，NON-pep，序列：SCFNPFLYYFAGENF），由吉爾生化（上海）有限公司合成，NLS-pep和NON-pep分別對應(yīng)于小鼠CysLT1R序列中第311～325個和CysLT2R序列中第282～296個氨基酸，經(jīng)高效液相色譜和質(zhì)譜鑒定純度達(dá)到90%。RT-6000型酶標(biāo)儀，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；轉(zhuǎn)移電泳槽和轉(zhuǎn)移電泳儀，美國Bio-Rad公司；Tanon4200型化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)和Tanon3500型數(shù)碼凝膠成像分析系統(tǒng)，上海天能科技有限公司。

1.3 APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元的提取和培養(yǎng)

將APP/PS1孕鼠處死、消毒后取出胎鼠，在無菌環(huán)境下剪開胎鼠的顱腔，用眼科鑷在冰浴的DMEM培養(yǎng)基中取皮質(zhì)，去除腦膜和血管后剪碎。用脫氧核糖核酸酶Ⅰ和木瓜酶消化皮質(zhì)組織，離心、去上清液，加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，再次離心、去上清液后加入含10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打10次，靜置2 min，取上清液加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，重復(fù)吹打步驟。將收集到的細(xì)胞懸液靜置2 min，細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至1×109L-1，接種于用多聚賴氨酸包被的6孔板中，每孔接種1 mL。接種30 min后換液，每孔加入含雙抗和B27的Neurobasal培養(yǎng)基，置37℃5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.4 APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元轉(zhuǎn)染LV-EGFP或LV-CysLT1R-EGFP

APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元以2.5×108L-1的密度接種于6孔板中，每孔接種2 mL，正常培養(yǎng)1周。吸出舊培養(yǎng)基，加入1×1011TU·L-1的LV-EGFP或LV-CysLT1R-EGFP（分別用促轉(zhuǎn)染溶液稀釋）100 μL和聚凝胺50 mg·L-1（用Neurobasal培養(yǎng)基稀釋）200 μL，并加入Neurobasal培養(yǎng)基至總液體量2 mL。12 h后，更換新鮮的含B27的Neurobasal培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)至120 h用于實驗。

1.5 Western印跡法檢測CysLT1R-OE神經(jīng)元CysLT1R表達(dá)水平

以1.4方法轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP，使神經(jīng)元過表達(dá)CysLT1R（CysLT1R-OE）后收集細(xì)胞，加入含苯甲基磺酰氟的NP-40蛋白裂解液充分裂解，以16 770×g，4℃離心5 min，取上清。BCA法檢測蛋白質(zhì)含量。分別經(jīng)電泳和轉(zhuǎn)膜后加入一抗〔CysLT1R（1∶1000），β肌動蛋白（1∶3000）〕4℃孵育過夜；洗去一抗，加入相應(yīng)二抗（1∶5000），室溫孵育2 h。采用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)拍照，Gel-Pro軟件掃描分析蛋白條帶積分吸光度值。以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白條帶積分吸光度值的比值反映目標(biāo)蛋白相對表達(dá)水平，各組數(shù)據(jù)以與對照組相比后的百分?jǐn)?shù)表示。

1.6 ELlSA法檢測CysLT1R-OE神經(jīng)元培養(yǎng)基中A β1-40和 A β1-42含量

CysLT1R-OE轉(zhuǎn)染方法同1.4。將神經(jīng)元分為對照組（轉(zhuǎn)染LV-EGFP后加入溶劑）、CysLT1R-OE組（轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP后加入溶劑）、CysLT1ROE+YM17690組（轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP后加入YM17690 1 μmol·L-1）和 CysLT1R-OE+YM17690+Pran組（轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP后同時加入YM17690和Pran各1 μmol·L-1）。藥物作用12 h后，收集各組細(xì)胞培養(yǎng)基，按照ELISA試劑盒說明書操作，測定Aβ1-40和Aβ1-42含量。

1.7 Western印跡法檢測CysLT1R-OE神經(jīng)元胞質(zhì)中APP，BACE1，PS1和PS2蛋白表達(dá)水平

CysLT1R-OE轉(zhuǎn)染方法同1.4，實驗分組同1.6。藥物干預(yù)12 h后收集細(xì)胞，按照試劑盒說明書步驟分步提取胞質(zhì)蛋白，加入一抗〔APP，BACE1，PS1和PS2（1∶1000）及β肌動蛋白（1∶3000）〕和二抗（1∶5000）。實驗步驟及結(jié)果處理同1.5。

1.8 Western印跡法檢測CysLT1R和NF- κB P65在CysLT1R-OE神經(jīng)元中的分布

1.8.1 CysLT1R在CysLT1R-OE神經(jīng)元中的分布

CysLT1R-OE轉(zhuǎn)染方法同1.4。將神經(jīng)元分為CysLT1R-OE組（轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP后加入溶劑）、CysLT1R-OE+YM17690組（轉(zhuǎn)染LV-CysLT1REGFP 后加入 YM17690 1 μmol·L-1）和 CysLT1ROE+YM17690+Pran組（轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP后同時加入YM17690和Pran各1 μmol·L-1）。藥物干預(yù)2 h后收集細(xì)胞，按照試劑盒說明書步驟分步提取膜蛋白、核蛋白和胞質(zhì)蛋白。加入一抗〔CysLT1R、β肌動蛋白、組蛋白3和Na+-K+-ATP酶（1∶3000）〕和二抗（1∶5000）。其中，β肌動蛋白為胞質(zhì)蛋白內(nèi)參，組蛋白3為核蛋白內(nèi)參，Na+-K+-ATP酶為膜蛋白內(nèi)參。Western印跡法實驗步驟及結(jié)果處理同1.5。各組數(shù)據(jù)以與CysLT1R-OE組相比后的百分?jǐn)?shù)表示。

1.8.2 NF- κB P65在CysLT1R-OE神經(jīng)元中的分布

CysLT1R-OE轉(zhuǎn)染方法同1.4，實驗分組同1.6。抗NF-κB P65抗體（稀釋倍數(shù)1：1000），Western印跡法實驗步驟及結(jié)果處理同1.8.1。

1.9 Western印跡法檢測CysLT1R-OE神經(jīng)元導(dǎo)入多肽后培養(yǎng)基內(nèi)A β1-40和 A β1-42、胞質(zhì)內(nèi) APP 和BACE1蛋白表達(dá)水平及CysLT1R和NF- κB P65亞基在細(xì)胞的分布

1.9.1 滲透差法將NLS-pep或NON-pep導(dǎo)入CysLT1R-OE神經(jīng)元

CysLT1R-OE轉(zhuǎn)染方法同1.4。將CysLT1R-OE神經(jīng)元分為：CysLT1R-OE組（加入溶劑），CysLT1ROE+YM17690 組（加入 YM17690 1 μmol·L-1），CysLT1R-OE+NON-pep+YM17690（導(dǎo)入NON-pep后隨即加入 YM17690 1 μmol·L-1），CysLT1R-OE+NLS-pep+YM17690（導(dǎo)入NLS-pep后隨即加入YM17690 1 μmol·L-1）。實驗前取 100 mg NLS-pep或NON-pep溶于10 mL高滲導(dǎo)入液（含蔗糖171.15 g·L-1、10%聚乙二醇和10%胎牛血清的DMEM溶液）中，制成高滲多肽導(dǎo)入液，每孔2 mL加入6孔板中，室溫孵育10 min，而后迅速更換為低滲液（3.5 mL DMEM用6.5 mL滅菌雙蒸水稀釋），室溫孵育2 min。重復(fù)上述操作2次。

1.9.2 導(dǎo)入多肽后CysLT1R在CysLT1R-OE神經(jīng)元的分布

CysLT1R-OE神經(jīng)元導(dǎo)入多肽后隨即加入YM17690 1 μmol·L-1孵育2 h，收集細(xì)胞，按照試劑盒說明書步驟分步提取膜蛋白、核蛋白和胞質(zhì)蛋白。加入一抗〔CysLT1R（1∶1000），β肌動蛋白、組蛋白3和Na+-K+-ATP酶（1∶3000）〕和二抗（1∶5000）。Western印跡法實驗步驟及結(jié)果處理同1.5。各組數(shù)據(jù)以與CysLT1R-OE組相比后的百分?jǐn)?shù)表示。

1.9.3 導(dǎo)入多肽后NF- κB P65亞基在CysLT1R-OE神經(jīng)元的分布

CysLT1R-OE神經(jīng)元分組同1.9.1。加入YM17690孵育2 h后收集細(xì)胞，按照試劑盒說明書分步提取細(xì)胞的核蛋白和胞質(zhì)蛋白。加入一抗〔NF-κB P65（1∶1000），β肌動蛋白和組蛋白3（1∶3000）〕和二抗（1∶5000）。Western印跡法實驗步驟及結(jié)果處理同1.9.2。

1.9.4 導(dǎo)入多肽后CysLT1R-OE神經(jīng)元培養(yǎng)基A β1-40和 A β1-42水平及胞質(zhì)中APP和 BACE1蛋白表達(dá)水平

CysLT1R-OE神經(jīng)元分組同1.9.1。加入YM17690孵育12 h后分別收集培養(yǎng)基和神經(jīng)元。以1.5方法提取神經(jīng)元的胞質(zhì)蛋白。加入一抗〔Aβ1-40，Aβ1-42，APP和BACE1（1∶1000）；β肌動蛋白（1∶3000）〕和二抗（1∶5000）。通過Western蛋白印跡法檢測培養(yǎng)基中Aβ1-40和Aβ1-42水平及胞質(zhì)中APP和BACE1蛋白表達(dá)水平。Western印跡法實驗步驟及結(jié)果處理同1.9.2。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元轉(zhuǎn)染LV-CysLT1REGFP后過表達(dá)CysLT1R

轉(zhuǎn)染LV-CysLT1R-EGFP 120 h后，與對照組相比，CysLT1R-OE組APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元中CysLT1R蛋白表達(dá)水平顯著增加（P＜0.01）（圖1）。

2.2 激活或競爭性抑制CysLT1R對CysLT1R-OE神經(jīng)元培養(yǎng)基內(nèi)A β及胞質(zhì)內(nèi)APP，BACE1，PS1和PS2表達(dá)水平的影響

ELISA結(jié)果（圖2）顯示，與CysLT1R-OE組相比，CysLT1R-OE+YM17690組神經(jīng)元分泌Aβ1-40和Aβ1-42顯著增加（P＜0.05）；而CysLT1R-OE+YM17690+Pran組神經(jīng)元分泌Aβ1-40和Aβ1-42無明顯變化。Western印跡法結(jié)果（圖3）顯示，與CysLT1R-OE組相比，CysLT1R-OE+YM17690組神經(jīng)元中APP，PS1和PS2表達(dá)水平無顯著變化，但BACE1表達(dá)水平顯著增加（P＜0.05）；而CysLT1R-OE+YM17690+Pran組中BACE1的表達(dá)無明顯變化。

2.3 激動CysLT1R對該受體和NF- κB P65亞基核轉(zhuǎn)位的影響

Western印跡結(jié)果顯示，與CysLT1R-OE組相比，CysLT1R-OE+YM17690組CysLT1R在神經(jīng)元細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中蛋白表達(dá)水平顯著下降（P＜0.05），而在細(xì)胞核中表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）（圖4）；NF-κB P65亞基在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)水平顯著下降（P＜0.05），而在細(xì)胞核中表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）（圖5）。

2.4 YM17690對導(dǎo)入NLS-pep的CysLT1R-OE神經(jīng)元內(nèi)CysLT1R和NF- κB P65亞基分布的影響

Western印跡結(jié)果（圖6）顯示，與CysLT1ROE+YM17690組相比，CysLT1R-OE+NLS-pep+YM17690組神經(jīng)元CysLT1R和NF-κB P65亞基在細(xì)胞核中表達(dá)水平顯著下降（P＜0.05），CysLT1R和NF-κB P65亞基在胞質(zhì)中表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），CysLT1R在細(xì)胞膜上表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）；而CysLT1R-OE+NON-pep+YM17690組神經(jīng)元CysLT1R和NF-κB P65亞基在細(xì)胞核、胞質(zhì)中和細(xì)胞膜上的表達(dá)水平均未見上述改變。

2.5 YM17690對導(dǎo)入NLS-pep的CysLT1R-OE神經(jīng)元培養(yǎng)基中 A β1-40和 A β1-42及胞質(zhì)中 APP 和BACE1蛋白表達(dá)水平的影響

Western印跡結(jié)果（圖7）顯示，與CysLT1ROE+YM17690組相比，CysLT1R-OE+NLS-pep+YM17690組神經(jīng)元培養(yǎng)基中Aβ1-40和Aβ1-42表達(dá)水平明顯下降（P＜0.05），胞質(zhì)中BACE1表達(dá)水平明顯下降（P＜0.05），胞質(zhì)中APP表達(dá)水平無明顯變化；而CysLT1R-OE+NON-pep+YM17690組神經(jīng)元培養(yǎng)基中Aβ1-40和Aβ1-42及胞質(zhì)中BACE1和APP表達(dá)水平均未見明顯變化。

3 討論

有研究表明，CysLT1R在APP/PS1小鼠腦內(nèi)的表達(dá)隨年齡的增長而增加，并與Aβ沉積的增加量和行為缺陷的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［18］。CysLT1R是一種G蛋白偶聯(lián)受體（G protein coupled receptors，GPCR），其內(nèi)源性配體是CysLT類物質(zhì)，包括LTC4，LTD4和LTE4等［19］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，伴隨著CysLT1R的激活，NF-κB通路隨后被激活，且CysLT1R介導(dǎo)的NF-κB激活參與了LTD4誘導(dǎo)的Aβ表達(dá)上調(diào)及BACE1和γ分泌酶活性增強(qiáng)［13-15］。長久以來，GPCR都被視為一類細(xì)胞表面受體，但CysLT1R的配體LTD4可誘導(dǎo)CysLT1R從質(zhì)膜轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，產(chǎn)生核轉(zhuǎn)位［20］。YM17690是一種選擇性CysLT1R激動劑，穩(wěn)定性良好［14］。本研究采用YM17690激活CysLT1R后，該受體發(fā)生核轉(zhuǎn)位，且CysLT1R核轉(zhuǎn)位與調(diào)節(jié)Aβ生成有關(guān)。親核蛋白的核輸入通常依賴于核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對的識別，已有證據(jù)顯示，CysLT1R氨基酸序列中包含一段經(jīng)典NLS，而NLS的突變可抑制CysLT1R的核轉(zhuǎn)位［21］。NLS-pep的氨基酸序列與CysLT1R的NLS相同，向神經(jīng)元中導(dǎo)入NLS-pep可使核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對CysLT1R的識別和轉(zhuǎn)運(yùn)趨于飽和，從而競爭性地抑制受體本身的核輸入。本研究結(jié)果顯示，NLS-pep特異性抑制APP/PS1小鼠皮質(zhì)原代神經(jīng)元中CysLT1R的核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而抑制了CysLT1R對Aβ1-40和Aβ1-42生成的調(diào)節(jié)作用。本研究通過檢測NF-κB的細(xì)胞內(nèi)分布驗證CysLT1R核轉(zhuǎn)位與NF-κB通路激活之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CysLT1R發(fā)生核轉(zhuǎn)位的同時NF-κB P65亞基也發(fā)生核轉(zhuǎn)位，且該現(xiàn)象可被CysLT1R受體拮抗劑Pran和NLS-pep抑制。此外，本課題組在APP-HEK293細(xì)胞中通過免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)，CysLT1R與NF-κB P65亞基在細(xì)胞核內(nèi)存在相互結(jié)合（結(jié)果待發(fā)表），推測CysLT1R核轉(zhuǎn)位是激活NF-κB信號通路的重要事件。

有研究證明，在人BACE1啟動子中有4個NF-κB結(jié)合元件，其中2個與NF-κB P65亞基相互作用。NF-κB P65亞基通過結(jié)合BACE1啟動子上的NF-κB結(jié)合元件，顯著增強(qiáng)BACE1啟動子活性［22］，BACE1對APP的切割是Aβ生成的限速步驟［23］。本研究發(fā)現(xiàn)，激活CysLT1R可上調(diào)BACE1的表達(dá)，并促進(jìn)Aβ1-40和Aβ1-42的生成。提示，激活CysLT1R可引起其內(nèi)化與核轉(zhuǎn)位，從而引起NF-κB P65亞基的核轉(zhuǎn)位而激活NF-κB信號通路，后者可能通過上調(diào)BACE1表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)APP/PS1皮質(zhì)原代神經(jīng)元生成Aβ。有文獻(xiàn)報道，Aβ1-42可促進(jìn)NF-κB報告基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而引起 NF-κB P65 亞基核轉(zhuǎn)位［24］；NF-κB通路激活可引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷或Aβ生成，從而導(dǎo)致AD［25］。

綜上所述，CysLT1R被激活后發(fā)生核轉(zhuǎn)位，受體核轉(zhuǎn)位參與激活NF-κB信號通路并上調(diào)BACE1表達(dá)，這可能是CysLT1R調(diào)節(jié)Aβ生成增加的主要原因。