劉繼威（湖北省羅田縣人民醫(yī)院,湖北 黃岡 438600）

結(jié)核性腦膜炎（TBM）是由結(jié)核桿菌入血或直接侵入蛛網(wǎng)膜造成的一系列腦部神經(jīng)損傷，主要表現(xiàn)為頭痛、盜汗、低熱、食欲不振等，病死率極高，因此需及時確診行針對性治療[1]。臨床常以傳統(tǒng)腦脊液檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，但此方案檢測時間較長，而TBM發(fā)病速度快，極易延誤病情。聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）檢測是現(xiàn)今較為常見的檢測方案，通過擴增腦脊液樣本行循環(huán)閾值比對，但PCR檢測需加熱，在高溫下行循環(huán)測定，若溫度不達(dá)標(biāo)，極易影響檢測靈敏度[2]。恒溫擴增熒光檢測（SAT）是將核糖體RNA的擴增引物與探針技術(shù)實現(xiàn)恒溫擴展檢測，對檢測溫度不作要求，具有方便快捷的特點，但將其用于疑似TBM患者的檢測對提高靈敏度的效果并未明確，基于此，本研究將探討SAT快速診斷結(jié)核性腦膜炎的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經(jīng)患者、家屬同意及醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)納入我院2020年1月-2021年5月期間142例疑似TBM患者，均采用SAT檢測及聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）檢測，以傳統(tǒng)腦脊液檢查作為金標(biāo)準(zhǔn)。男患者78例，女患者64例；年齡27-45歲，平均年齡（37.51±6.32）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①疑似TBM患者；②能耐受腦脊液穿刺。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已確診為其他的腦膜炎患者；②有嚴(yán)重腦部外傷；③已參與其他相關(guān)實驗者。

1.2 方法 142例疑似TBM患者，均采用SAT檢測及聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）檢測，以傳統(tǒng)腦脊液檢查作為金標(biāo)準(zhǔn)。

SAT檢測：抽取患者1.5毫升腦脊液樣本，將其加入1.5毫升離心管內(nèi)離心5分鐘，將上層清液棄去，并將50微升MTB-RNA稀釋液置入樣本內(nèi)，充分震蕩，將其懸浮，以此制作為待測樣本，在核酸提純儀（廠家：北京萊普特）內(nèi)將50微升陰性對照及待測樣本置入，保證液體進(jìn)入水面下，使用超聲處理，15分鐘后將其取出，再次離心5分鐘后出現(xiàn)上層清液，即為提取的RNA，此時在潔凈的微量反應(yīng)管中（含有30微升擴增檢測液）加入提取好的2微升RNA，并在60℃的K30干式恒溫器內(nèi)放置5分鐘，后于42℃的溫度內(nèi)放置5分鐘，并保持此溫度，加入10微升SAT酶，采用熒光定量PCR儀（廠家：上海實維實驗儀器技術(shù)有限公司；型號：7500fast）進(jìn)行擴增，主要擴增溫度為42℃，時間為1分鐘，循環(huán)40次，在FAM通道下保證每分鐘采1次熒光。結(jié)果判斷：當(dāng)Ct值＜40時，MTB-RNA陽性；當(dāng)Ct值≥40時，MTBRNA陰性。采用試劑盒附帶陰、陽性對照作為對比。

PCR檢測：采集患者2毫升腦脊液樣本行PCR檢測，主要根據(jù)工作手冊[3]方案檢測。當(dāng)Ct值＜36時，且樣本的MTB擴增曲線呈現(xiàn)S型，表示MTB-DNA陽性；當(dāng)Ct值＜40時，且樣本的NTM擴增曲線呈現(xiàn)S型，表示NTM-DNA陽性；若NTM-DNA、MTB-DNA均呈現(xiàn)陽性時，表示MTB-DNA陽性；若NTM-DNA、MTB-DNA均呈現(xiàn)陰性時，表示正常。主要以試劑盒附帶的陰、陽性對照作為對比。

1.3 觀察指標(biāo)和評價標(biāo)準(zhǔn) 觀察兩組檢測方法檢驗效能，主要包括檢測靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值、漏診率及誤診率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)錄入SPSS22.0軟件中分析，計數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗；計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢查結(jié)果對比 142例疑似TBM患者，以傳統(tǒng)腦脊液檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，確診TBM為陽性，未確診為陰性，現(xiàn)確診138陽性，4例陰性，經(jīng)SAT檢測發(fā)現(xiàn)136例陽性，6例陰性；經(jīng)PCR檢測發(fā)現(xiàn)130例陽性，12例陰性。見表1。

2.2 兩種方式檢驗效能對比 結(jié)果表明，SAT檢測方法的靈敏度（97.83%）、準(zhǔn)確度（97.18%）均高于PCR檢測組（91.30%、91.55%），漏診率（2.17%）低于PCR檢測組（7.25%）（P＜0.05），特異度（75.00%）、陰性預(yù)測值（50.00%）、陽性預(yù)測值（99.26%）及誤診率（0.72%）與PCR檢測組（50.00%、16.67%、98.46%、1.45%）對比，差異不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義（P

表2 兩種方式檢驗效能對比(n,%)

3 討論

TBM常出現(xiàn)腦膜非化膿性炎癥，近年來，由于抗結(jié)核治療的不規(guī)范性，導(dǎo)致結(jié)核桿菌的多重耐藥性，且臨床癥狀多不典型，因此尋求快速及有效的診斷方式是治療的關(guān)鍵[4-6]。傳統(tǒng)腦脊液檢查作為金標(biāo)準(zhǔn)，檢測時間相對較長，不利于及時做出診斷給予針對性治療。PCR是通過DNA耐高溫的聚合酶在高溫下循環(huán)，以促使雙鏈DNA的分離，從而將引物粘連到模版上的互補區(qū)間，但此技術(shù)對溫度要求較高，因此對檢驗準(zhǔn)確度的效果不佳[7]。SAT檢測方案是在恒溫箱內(nèi)利用DNA與各種酶間的反應(yīng)，促使核酸在同一溫度下得到擴增[8-10]，若將其用于TBM的檢測或許對提高檢驗準(zhǔn)確度的效果更顯著。

本研究顯示，以傳統(tǒng)腦脊液檢查為標(biāo)準(zhǔn)，SAT檢測方法靈敏度（97.83%）、準(zhǔn)確度（97.18%）均高于PCR檢測組（91.30%、91.55%），漏診率（2.17%）低于PCR檢測組（7.25%）（P＜0.05），特異度（75.00%）、陰性預(yù)測值（50.00%）、陽性預(yù)測值（99.26%）及誤診率（0.72%）與PCR檢測組（50.00%、16.67%、98.46%、1.45%）對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明SAT快速診斷結(jié)核性腦膜炎可顯著提高檢測靈敏度、準(zhǔn)確度，降低漏診率，且不影響其余檢測效能。在王紫荊[11]等學(xué)者的研究中表明SAT檢測技術(shù)是新型分子檢測方案，檢測時間短，能有效提高診斷特異度及靈敏度而不存在交叉污染。這可能是因為SAT檢測方案主要是利用具有特異性的核糖體RNA擴增引物優(yōu)化探針技術(shù)，并根據(jù)具有極高反轉(zhuǎn)錄活性及反轉(zhuǎn)錄酶同時實現(xiàn)恒溫擴增及熒光檢測，其操作較為簡便，對儀器要求較低，此種技術(shù)下的靶標(biāo)RNA極易降解，從而減少污染。探針具有同步擴增檢測信號的特征，因此能有效提高檢測靈敏度及準(zhǔn)確度，降低漏診率[12]。

綜上所述，SAT快速診斷結(jié)核性腦膜炎可顯著提高檢測靈敏度、準(zhǔn)確度，降低漏診率，且不影響其余檢測效能。