肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌病例總數(shù)的80%以上

。早期診斷可顯著改善預(yù)后，但大多數(shù)患者在首次診斷時(shí)已進(jìn)展到中晚期，5年生存率相對(duì)較差

。因此尋找對(duì)NSCLC患者進(jìn)行早期篩查和診斷方法一直是醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)。目前肺癌的早期篩查主要依靠低劑量螺旋CT

，確診的金標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤組織活檢病理組織學(xué)檢查

，但低劑量螺旋CT對(duì)早期肺癌漏診率較高，活檢病理組織學(xué)作為有創(chuàng)檢查不適合早期診斷；近年來(lái)常規(guī)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)一度作為早期肺癌篩查指標(biāo)，但敏感性、特異性不盡如人意。

miRNA是內(nèi)源性非編碼小分子RNA，可用于調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡

。外泌體是納米級(jí)囊泡，直徑為30～100 nm，幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞都可分泌

。外泌體是miRNA運(yùn)輸?shù)闹饕d體之一，可以存在于尿液、唾液、血漿或惡性分泌物中

。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)

miRNA在腫瘤的診斷、預(yù)后和治療中發(fā)揮重要的作用，miRNA可能成為NSCLC的新型腫瘤標(biāo)志物。miR-9-3p是新發(fā)現(xiàn)的miRNA之一，在肝癌、胃癌、膠質(zhì)瘤患者中的表達(dá)明顯下調(diào)

。在本研究中，對(duì)NSCLC患者和肺部良性病變受試者血清外泌體中miR-9-3p的表達(dá)進(jìn)行了比較和分析，并討論了NSCLC 血清外泌體中miR-9-3p聯(lián)合癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)檢測(cè)診斷NSCLC的價(jià)值。

1 臨床材料與方法

1.1 臨 床 材 料 收 集2016 年1 月 至2017 年12 月在青島大學(xué)附屬醫(yī)院經(jīng)組織病理學(xué)確診的80例NSCLC患者為研究對(duì)象。男42例，女38例；年齡39 ～82 歲，平 均 年 齡(52.63±13.18)歲；臨 床 分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期30例、Ⅲ期32例、Ⅳ期8例；組織學(xué)分類(lèi)：肺腺癌44例、肺鱗癌36例。良性對(duì)照組50例包括肺結(jié)核、肺膿腫、良性肺結(jié)節(jié)等，男26 例，女24 例；年 齡38 ～79 歲，平 均 年 齡(53.64±14.32)歲。兩組患者性別、年齡等基線(xiàn)資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

＞0.05)，具有可比性。該研究取得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)(醫(yī)院倫理批準(zhǔn)文號(hào)：Qdlyy201512097)，所有受試者簽署知情同意書(shū)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：所有入選病例均經(jīng)病理組織學(xué)確診為NSCLC；均為原發(fā)性肺癌；血清樣本收集之前，患者沒(méi)有接受過(guò)化療、放療或其他抗腫瘤治療；均有血清外泌體miR-9-3p、CEA、CYFRA21-1檢查資料；研究所需資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除轉(zhuǎn)移性肺癌；排除伴有其他部位惡性腫瘤者；排除嚴(yán)重肝、心、腎功能不全者。

1.3 方法 受試者清晨空腹時(shí)采集外周靜脈血約5 mL，以1 500 g離心10 min，隨后取上清在4 ℃下12 000 g離心10 min。2 h內(nèi)用一份血清樣本檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物CEA、CYFRA21-1水平，第二份置于－80 ℃冰箱保存，直到提取總RNA。

本研究就女性免疫性不孕與慢性生殖道炎癥及微量元素的關(guān)系進(jìn)行探究與分析，結(jié)果顯示，免疫性不孕的女性患者其陰道分泌物炎性因子(IL-6、IL-8及TNF-α)及血清銅均高于健康正常孕婦，血清硒及鋅均低于健康正常孕婦，且不同分類(lèi)與病程免疫性不孕者的陰道分泌物炎性因子及血清微量元素指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Logistic分析顯示，上述檢測(cè)指標(biāo)均與女性免疫性不孕有密切關(guān)系，進(jìn)而肯定了上述指標(biāo)與女性免疫性不孕的關(guān)系。其中慢性生殖道炎癥導(dǎo)致的炎性細(xì)胞因子表達(dá)增強(qiáng)可較大程度反映生殖道的炎性損傷，微量元素對(duì)于子宮內(nèi)膜及生殖系統(tǒng)其他方面的影響也較大程度存在，且對(duì)免疫的失調(diào)影響較大[17-19]。

提取外泌體之前需在室溫下將血清樣本進(jìn)行解凍，隨后取上清300 μL，加入外泌體提取試劑60 μL(美國(guó)Invitrogen

總外泌體分離試劑盒，貨號(hào)4480025)，在4 ℃孵育30 min，然后室溫下以12 000 g離心10 min，最后使用100 μL PBS緩沖液重懸沉淀，得到血清外泌體。使用miRcute miRNA提取分離試劑盒(中國(guó)天根科技生化有限公司)從外泌體中提取miRNA。通過(guò)加尾法，使用Mir-X miRNA First-Strand合成試劑盒 (TaKaRa中國(guó)) 將提取的miRNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用TB-Green Premix ExTaq Ⅱ (TaKaRa中國(guó)) 試劑進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。使用U6基因作為內(nèi)參基因，采用2

法計(jì)算miR-9-3p表達(dá)的相對(duì)定量。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。

混合裝配生產(chǎn)線(xiàn)是指在一條生產(chǎn)線(xiàn)上，通過(guò)改變裝配零部件的型號(hào)來(lái)生產(chǎn)不同種類(lèi)的產(chǎn)品[1]。混裝生產(chǎn)線(xiàn)一方面由于每個(gè)工位裝配零部件的不同加大了工人操作的難度與強(qiáng)度；另一方面經(jīng)常在流水線(xiàn)更換產(chǎn)品時(shí)發(fā)生錯(cuò)裝、漏裝等問(wèn)題。而防錯(cuò)系統(tǒng)可以有效地減小上述錯(cuò)誤的發(fā)生，提高產(chǎn)品的合格率[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用Graphpad Prism 8軟件和SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料使用

檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料使用Mann-Whitney

檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)；Spearman相關(guān)分析；通過(guò)繪制ROC曲線(xiàn)求取miR-9-3p診斷NSCLC的最佳臨界值；以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，用四格表法統(tǒng)計(jì)計(jì)算miR-9-3p、CEA、CYFRA21-1單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的價(jià)值。

＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

英文作為通用語(yǔ)言，在翻譯成各國(guó)的文字時(shí)需要遵循每個(gè)國(guó)家的特點(diǎn)進(jìn)行翻譯，翻譯時(shí)需要結(jié)合本國(guó)的文化特色，風(fēng)土人情以及人們的慣用語(yǔ)，這樣翻譯出來(lái)的文章才能夠被廣大讀者理解和接受。下面對(duì)翻譯方法加以詳細(xì)描述。

2.1 兩組受試者血清外泌體miR-9-3p 及CEA、CYFRA21-1表達(dá)水平比較 NSCLC組血清外泌體miR-9-3p及CEA、CYFRA21-1表達(dá)水平明顯高于良性對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

＜0.000 1)，見(jiàn)表1。

2.2 NSCLC 血 清 外 泌 體miR-9-3p 與CEA、CYFRA21-1表達(dá)水平相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析顯示，NSCLC血清外泌體miR-9-3p 表達(dá)水平與CEA、CYFRA21-1 表達(dá)水平具有明顯正相關(guān)(

＝0.936、

＝0.954，

＜0.001、

＜0.001)，

＜0.01。

小流域是河流水系中的基本集水單元，大流域生態(tài)治理的規(guī)劃與實(shí)施，需要以小流域?yàn)榛局卫韱卧?。把大流域分解成不同層次、不同?lèi)型的小流域，這些小流域是一個(gè)個(gè)相對(duì)獨(dú)立的生態(tài)系統(tǒng)，也是生態(tài)環(huán)境受到不同程度人為影響的一個(gè)個(gè)單元。從小流域存在問(wèn)題出發(fā)，遵循正確的生態(tài)治理理念和做法，可以把這些小流域從生態(tài)環(huán)境退化的單元改造成為水—土—?dú)狻魅恿夹匝h(huán)、人類(lèi)與環(huán)境和諧共存的單元。小單元的活動(dòng)可以形成大系統(tǒng)的變化，同樣，一個(gè)個(gè)小流域的生態(tài)修復(fù)將最終達(dá)成大流域整體生態(tài)系統(tǒng)的功能恢復(fù)與提升。

2.3 血清外泌體miR-9-3p聯(lián)合CEA、CYFRA21-1診斷NSCLC 的價(jià)值比較 繪制血清外泌體miR-9-3p 診 斷NSCLC 的ROC 曲 線(xiàn)， 見(jiàn) 圖1，miR-9-3p 診斷NSCLC曲線(xiàn)下面積 (ROC-AUC)為0.738，選取最大約登指數(shù) (0.702) 對(duì)應(yīng)的miR-9-3p 值作為診斷NSCLC 最佳臨界值，為1.827。血清外泌體miR-9-3p、CEA、CYFRA21-1在NSCLC和對(duì)照組診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果對(duì)照，見(jiàn)表2。以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，血清外泌體miR-9-3p 聯(lián) 合CEA、CYFRA21-1 診 斷NSCLC的 價(jià)值比較，見(jiàn)表3。三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的敏感性、準(zhǔn)確性、陰性預(yù)測(cè)值與各單項(xiàng)檢測(cè)比較明顯提高，

＜0.01。

3 討論

腫瘤細(xì)胞釋放的外泌體經(jīng)常攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸，在局部和遠(yuǎn)處的受體細(xì)胞之間交換必要的信息

。由于外泌體可以在體液中很容易被獲得，可以作為腫瘤“液體活檢”潛在的生物標(biāo)志物

。外泌體攜帶血液循環(huán)中的miRNA，其磷脂膜可以保護(hù)最上層的核糖核酸，不被核糖核酸酶降解，miRNA在外泌體中非常穩(wěn)定

。miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性、短單鏈非編碼的RNA分子，與腫瘤進(jìn)展、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡或細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)密切相關(guān)，對(duì)真核生物基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控具有重要作用

。miRNA表達(dá)譜已被用于腫瘤診斷、分期和預(yù)測(cè)預(yù)后

。

許多研究表明，miR-9 在腫瘤中表達(dá)異常。miR-9在胰腺癌、肝癌以及鼻咽癌中抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲

。在膠質(zhì)瘤患者中，miR-9-3p通過(guò)靶向FOXG1抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡

。從骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提取的外泌體miR-9通過(guò)下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1的表達(dá)抑制膀胱癌的進(jìn)展

。miR-9在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)可以降低E- 鈣粘蛋白的表達(dá)從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移

。在本研究中，我們重點(diǎn)研究了miR-9-3p在NSCLC中的表達(dá)，結(jié)果表明與對(duì)照組相比，NSCLC患者中miR-9-3p的表達(dá)顯著上調(diào)，表明miR-9-3p可能是NSCLC診斷的潛在生物標(biāo)志物。本研究還做了NSCLC患者中miR-9-3p與常規(guī)標(biāo)志物CEA、CYFRA21-1血清水平相關(guān)性分析，結(jié)果顯示miR-9-3p表達(dá)水平與CEA、CYFRA21-1表達(dá)水平具有明顯正相關(guān)性；血清miR-9-3p、CEA、CYFRA21-1三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的敏感性、準(zhǔn)確性、陰性預(yù)測(cè)值與各單項(xiàng)檢測(cè)比較明顯提高，有利于臨床早期診斷，減少誤漏診。

外泌體作為新一代診斷標(biāo)志物，具有諸多優(yōu)點(diǎn)，為多種疾病的診斷開(kāi)辟了新的思路。本研究筆者只探討了外泌體miR-9-3p在NSCLC血清中的表達(dá)水平，及聯(lián)合常規(guī)標(biāo)志物診斷NSCLC的價(jià)值，在后續(xù)工作中還要進(jìn)一步深入研究血清miR-9-3p與不同臨床病理因素(腫瘤大小、組織類(lèi)型、臨床分期、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后)相關(guān)性，為NSCLC的診療提供依據(jù)。

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