姜建輝，夏 清，湯丹丹，張志強

（四川中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，四川 綿陽 621000）

何首烏為蓼科植物何首烏（polygonum multiflorum thunb）的干燥塊根，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便的功效[1]?，F(xiàn)代研究表明，何首烏有增強免疫能力、抗腫瘤和抗衰老等多種藥理作用，主要與其中含有的二苯乙烯苷、大黃素以及大黃素甲醚等多種活性成分有關(guān)，是中醫(yī)臨床常用的藥材之一[2-4]。四川作為何首烏的主要產(chǎn)區(qū)之一，最早記載于清·雍正《敘州府志》：“藥材有何首烏”[5]。何首烏在川內(nèi)各個地區(qū)均有分布，其中成都金堂、雅安、瀘州、樂山、涼山州和遂寧等地是四川何首烏的主要產(chǎn)區(qū)[6]。然而，對四川何首烏的品質(zhì)比較研究鮮有報道。本研究主要以四川五個產(chǎn)地不同產(chǎn)地何首烏中二苯乙烯苷和游離蒽醌的含量為指標(biāo)，初步評價四川5 個產(chǎn)地何首烏的質(zhì)量，以期對何首烏的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

1260 液相色譜儀系統(tǒng)，安捷倫科技（中國）有限公司；SENCOR-201 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海申順生物科技有限公司；DV215CD 電子天平，美國奧豪斯有限公司；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵，上海亞榮生化儀器廠。

1.2 試劑與藥材

二苯乙烯苷對照品，批號：110844，純度≥98.0%；大黃素對照品，批號：110756，純度≥98.0%；大黃素甲醚對照品，批號：110758，純度≥98.0%；色譜甲醇，飛世耳股份有限公司，美國；水為超純水。其他試劑均為分析純。

何首烏來源見表1。經(jīng)鑒定為何首烏的干根，是由四川中醫(yī)學(xué)院藥用植物教研室王華東主任主持鑒定。

表1 藥材來源

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ZPRBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B），為流動相梯度洗脫，見第7 頁表2，檢測波長：254 nm；流速：1 mL/min-1；柱溫：25 ℃。進(jìn)樣量：20 μL。二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的HPLC 圖見第7 頁圖1。

圖1 混合對照品（A）和樣品（B）HPLC 圖

表2 梯度洗脫條件表

2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取二苯乙烯苷對照品10.75 mg、大黃素對照品4.68 mg、大黃素甲醚對照品4.08 mg，共同置于50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度線，制成質(zhì)量濃度分別為43 μg·L-1、93.6 μg·L-1和91.6 μg·L-1的儲備液備用。

2.3 樣品溶液的制備

取本品粉末（過4 號篩）約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，冷卻，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系

將儲備液加甲醇稀釋，制得二苯乙烯苷的質(zhì)量濃度分別為8.6、17.2、43、107.5、215 μg·L-1；制得大黃素的質(zhì)量濃度分別為9.36、18.72、37.44、46.8、93.6 μg·L-1；制得大黃素甲醚的質(zhì)量濃度分別為4.08、8.16、16.32、40.8 μg·L-1、81.6 μg·L-1。分別進(jìn)樣后，以二苯乙烯苷、大黃素和大黃素甲醚的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以各自的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二苯乙烯苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=3.2287X-5.8358，r=0.9998；大黃素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=19.259X-20.515，r=0.9999；大黃素甲醚的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=6.9715X-2.0021，r=0.9997。結(jié)果表明，二苯乙烯苷在8.6μg·L-1～215 μg·L-1的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；大黃素在9.36 μg·L-1～93.6 μg·L-1的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；大黃素甲醚在4.08 μg·L-1～81.6μg·L-1的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實驗

取適量三者混合對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)測定6 次，計算得二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚峰面積的RSD 分別為4.63%、1.06%和1.34%，表明該儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性實驗

取成都金堂產(chǎn)何首烏樣品，按供試品溶液制備方法，制備6 份樣品，按上述色譜條件測定6 份樣品的峰面積，計算得二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚含量的RSD 分別為3.96%、0.92%和1.31%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

取成都金堂產(chǎn)何首烏樣品，按供試品溶液制備方法，分別于1、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算得二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚峰面積的RSD 分別為4.27%、1.00%和1.59%，表明樣品在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加標(biāo)回收實驗

精密稱取已知含量的成都金堂產(chǎn)何首烏樣品1.0 g，平行6 份，加入為已知含量樣品中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚含量80%、100%、120%的對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算加標(biāo)回收率。結(jié)果表明，二苯乙烯苷的平均回收率為101.75%，大黃素的平均回收率為102.38%，大黃素甲醚的平均回收率為102.45%，RSD 分別為2.54%、2.19%、2.47%。

2.9 樣品測定

取不同產(chǎn)地何首烏樣品，按“2.3”項下樣品制備方法制備后進(jìn)行含量測定，分別計算3 種成分的含量，其結(jié)果見表3。并用t 檢驗分別比較各產(chǎn)地的二苯乙烯苷、大黃素和大黃素甲醚含量的差異，結(jié)果見第8 頁表4。

表3 何首烏不同產(chǎn)地含量測定結(jié)果（x±SD，n=3）

3 結(jié)果討論

3.1 不同產(chǎn)地何首烏中二苯乙烯苷含量的比較

由表4 可知，何首烏中二苯乙烯苷含量，成都金堂顯著高于遂寧和樂山，與雅安和西昌的沒有顯著差異；西昌和雅安、樂山的沒有顯著性差異；雅安顯著高于樂山?？芍啥冀鹛?、雅安和西昌三地產(chǎn)的何首烏中二苯乙烯苷含量較高。

表4 各產(chǎn)地二苯乙烯苷、游離蒽醌（大黃素和大黃素甲醚含量之和）的t 檢驗結(jié)果

3.2 不同產(chǎn)地何首烏中游離蒽醌含量的比較

何首烏中游離蒽醌含量，成都金堂顯著高于西昌、樂山和雅安，和遂寧沒有顯著性差異。遂寧含量顯著性高于西昌、樂山和雅安；西昌、樂山和雅安沒有顯著的差異?？芍?，成都金堂和遂寧產(chǎn)的何首烏中游離蒽醌含量較高。