劉偉敏

（河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南鄭州 450008）

仔豬斷奶后可能會(huì)發(fā)生明顯的應(yīng)激反應(yīng)，反應(yīng)癥狀為仔豬食欲不振、頻發(fā)腹瀉、生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，甚至死亡，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展（黃登桂等，2019）。目前，一些養(yǎng)殖戶為了追求高效益，在飼料中違規(guī)添加抗生素提高仔豬的抗病力，但濫用抗生素會(huì)造成仔豬藥物殘留，且毒副作用增強(qiáng)，嚴(yán)重威脅仔豬安全（王漢星等，2020）。因此，尋找安全、環(huán)保的綠色添加劑具有重要研究?jī)r(jià)值。

乳酸菌是一種由體內(nèi)乳酸糖類發(fā)酵的綠色益生菌，廣泛存在于動(dòng)物腸道內(nèi)，可保持腸道菌群平衡，從而提高機(jī)體免疫機(jī)能（崔藝燕等，2020）。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌是一種常見的益生菌，安全、穩(wěn)定性強(qiáng)，具有提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，改善腸道內(nèi)部菌群結(jié)構(gòu)，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等作用，顯著改善動(dòng)物免疫機(jī)能（崔藝燕等，2016）。盡管乳酸菌在畜牧中的應(yīng)用比較廣泛，但有關(guān)乳酸菌作為飼料添加劑在仔豬上的研究較少，本文研究飼料中添加乳酸菌對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、免疫功能和腸道菌群的影響，為仔豬飼料中乳酸菌的合適添加量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 乳酸菌、玉米、膨化大豆、花生、礦物質(zhì)預(yù)混料均在安琪酵母飼料有限公司購(gòu)買，仔豬來(lái)自于當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場(chǎng)。血清測(cè)定試劑盒采購(gòu)自武漢賽維爾科技有限公司。

1.2 主要試劑與材料 豆粕、氫氧化鉀（10%，1 mol/L）、醋酸（10%，0.5 mol/L），硝酸鈉溶液，氯化鈉，乙醇。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)仔豬均來(lái)自試驗(yàn)基地養(yǎng)殖廠。將360只30日齡、體重相近（約6.59 kg）的健康無(wú)傷的斷奶仔豬隨機(jī)分成6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭仔豬，對(duì)照組仔豬飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上添加不同添加水平（0.25%、0.5%、0.75%、1%、1.25%）乳酸菌，飼養(yǎng)周期為35 d。

1.4 飼料配方設(shè)計(jì) 以乳酸糖、玉米、膨化大豆、花生為仔豬基礎(chǔ)飼料。試驗(yàn)飼料成分如表1所示，參照《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T65-2004）配制基礎(chǔ)飼料。

表1 基礎(chǔ)飼料成分和水平

1.5 飼養(yǎng)管理 正式養(yǎng)殖試驗(yàn)開始前，對(duì)豬舍環(huán)境進(jìn)行及時(shí)清理，保持內(nèi)外環(huán)境整潔，干凈清爽，對(duì)豬舍進(jìn)行及時(shí)消毒，及時(shí)清理糞便，內(nèi)外通風(fēng)處理。飼養(yǎng)期間，仔豬每天定時(shí)投喂適量餌料，每天3次，根據(jù)仔豬當(dāng)日采食狀況來(lái)調(diào)整餌料，及時(shí)記錄仔豬養(yǎng)殖情況，保持豬舍通風(fēng)良好，定期消毒。

1.6 生長(zhǎng)性能指標(biāo) 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)仔豬斷食24 h，仔豬空腹稱量其初體重和末體重，依據(jù)相應(yīng)公式計(jì)算仔豬生長(zhǎng)發(fā)育的相關(guān)指標(biāo)，計(jì)算公式如下：

料重比=動(dòng)物飼料中總投喂量/動(dòng)物飼養(yǎng)期間增加的體重；

增重率/%=（動(dòng)物生長(zhǎng)后總體重均值－動(dòng)物生長(zhǎng)前的體重均值）/動(dòng)物生長(zhǎng)時(shí)間×100；

日采食量=動(dòng)物采食總量/飼養(yǎng)天數(shù)。

1.7 免疫指標(biāo)測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，將仔豬禁食24 h，對(duì)仔豬靜脈處采血10 mL，分別加入對(duì)應(yīng)熒光標(biāo)記的單克隆抗體，依次加入乙二胺四乙酸抗凝的全血中孵育20 min，再加入紅細(xì)胞裂解液常溫離心后取上清液，及時(shí)放入4℃冰箱保存。采用相關(guān)酶聯(lián)吸附試劑盒測(cè)定免疫球蛋白A，補(bǔ)體C3和M，檢測(cè)方法參照試劑盒說(shuō)明書。

仔豬飼養(yǎng)周期結(jié)束后，選取3只健康的仔豬進(jìn)行靜脈采血10 mL，采用酶聯(lián)免疫吸附法（試劑盒源于武漢博士德生物工程有限公司）檢測(cè)仔豬白細(xì)胞介素-8（Interleukin-8，IL-8），腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）及白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）的含量。

1.8 腸道菌群測(cè)定 收集仔豬糞便，定量稱取1 g，將其放入無(wú)菌操作臺(tái)上進(jìn)行操作，放入培養(yǎng)皿進(jìn)行大量培育，采用微量稀釋法進(jìn)行測(cè)定仔豬糞便細(xì)菌的含量。

1.9 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析 本研究所有的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用excel表格記錄，采用SPSS 22.0版本軟件進(jìn)行分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 乳酸菌對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，0.75%組仔豬的末重和平均日增重量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而1%、0.5%和0.25%組仔豬的末重顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；隨著飼料中乳酸菌添加水平的升高，仔豬平均日增量、日均采食量先上升后下降，0.75%組仔豬的平均日增量和日均采食量達(dá)到最大水平，分別為478.2 g/d和791.47 g/d，顯著高于其他各組和對(duì)照組（P＜0.05），0.5%和1%組仔豬的平均日增量和日均采食量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；飼料中添加不同水平的乳酸菌對(duì)仔豬料重比無(wú)顯著影響（P＞0.05）；在各飼料添加組中，0.75%組中仔豬的腹瀉率最低，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），而1%組仔豬的腹瀉率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表2 飼料中添加乳酸菌對(duì)仔豬的生長(zhǎng)性能的影響

2.2 乳酸菌對(duì)仔豬免疫指標(biāo)的影響 由表3可知，在所有試驗(yàn)組中，0.75%組仔豬的免疫球蛋白A和M含量達(dá)到最大水平，為497.25 mg/mL和0.68 mg/mL，顯著高于其他試驗(yàn)組和對(duì)照組（P＜0.05），0.5%和1%組仔豬的免疫球蛋白A和M含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；在所有試驗(yàn)組中，0.75%組仔豬補(bǔ)體C3含量迅速上升，達(dá)到最大水平，為9.94 mg/mL，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），0.5%和1.25%組仔豬補(bǔ)體C3含量明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。

表3 飼料添加乳酸菌對(duì)仔豬免疫指標(biāo)的影響 mg/ mL

由圖1～3可知，隨著飼料乳酸菌含量不斷增加，仔豬IL-6含量先下降后恢復(fù)正常水平，0.75%組仔豬的IL-6含量最低，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；而仔豬IL-8含量先下降后上升，1%組仔豬的IL-8含量最低，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；仔豬TNF-α含量一直處于下降水平，1.25%組仔豬的TNF-α含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

圖1 不同添加水平的乳酸菌飼料組中仔豬IL-6含量

2.3 飼料中添加乳酸菌對(duì)仔豬腸道菌群的影響由表4可知，隨著飼料中乳酸菌添加水平的不斷增高，試驗(yàn)組仔豬大腸桿菌和雙歧桿菌的含量與對(duì)照無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表4 飼料中添加乳酸菌對(duì)仔豬的腸道菌群測(cè)定的影響

3 討論

圖2 不同添加水平的乳酸菌飼料組中仔豬IL-8含量

圖3 不同添加水平的乳酸菌飼料組中仔豬TNF-α含量

3.1 乳酸菌對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響 乳酸菌是一種益生菌，能有效抑制有害菌群，增強(qiáng)有益菌活性，從而增強(qiáng)消化功能（李蕎蕎等，2019）。在本研究中，0.75%組仔豬末重和平均日增重量顯著高于對(duì)照組，提示飼料中添加合適水平的乳酸菌將會(huì)顯著提高仔豬生長(zhǎng)性能，從而促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育。李杰欣等（2020）試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼料中添加適量的乳酸菌將會(huì)顯著提高肉雞生長(zhǎng)性能，其日增重和采食量顯著提高；王蔚等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加適宜水平乳酸桿菌能顯著提高仔豬末重和日增重，促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育，顯著提高飼料利用率，有效降低腹瀉率。在本研究中，隨著飼料乳酸菌添加水平的不斷上升，0.75%組仔豬平均日增重和平均日采食量顯著上升，達(dá)到最大水平，顯著高于對(duì)照組，提示飼料添加適宜水平乳酸菌（0.75%）會(huì)促進(jìn)仔豬增重，促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育。

本研究評(píng)估不同水平乳酸菌對(duì)仔豬料重比無(wú)顯著影響，在各飼料添加組中，0.75%組仔豬腹瀉率最低，顯著低于對(duì)照組，提示飼料中添加合適水平乳酸菌將會(huì)有效降低仔豬腹瀉率，從而提高仔豬免疫機(jī)能。其降低仔豬腹瀉率的主要原因是乳酸菌的穩(wěn)定強(qiáng)，適應(yīng)腸道內(nèi)部環(huán)境，提高腸道內(nèi)消化酶的活性，促進(jìn)腸道消化吸收和有益菌的增殖，從而有效降低有害菌群含量，維持腸道菌群健康，從而有效減少腹瀉的發(fā)生。

3.2 乳酸菌對(duì)仔豬免疫指標(biāo)的影響 免疫球蛋白A和免疫球蛋白M是動(dòng)物血清中抗體的有效成分，是反應(yīng)機(jī)體免疫反應(yīng)情況的重要指標(biāo)（林裕龍等，2020）。補(bǔ)體C3參與機(jī)體內(nèi)的免疫應(yīng)答反應(yīng)和炎癥反應(yīng)。本研究所有試驗(yàn)組中，0.75%組仔豬的免疫球蛋白A，M和補(bǔ)體C3的含量達(dá)到最大水平，顯著高于對(duì)照組，提示飼料中添加適量乳酸菌可顯著增加仔豬免疫球蛋白A，M和補(bǔ)體C3的含量，從而顯著提高仔豬免疫力。

IL-6、IL-8和TNF-a是一種常見的炎癥因子，反應(yīng)機(jī)體內(nèi)炎癥因子的重要指標(biāo)（陳國(guó)陽(yáng)等，2020）。在本研究中，隨著乳酸菌含量不斷增加，仔豬IL-6和IL-8含量先下降后上升，TNF-a含量一直處在下降水平，提示飼料添加適量乳酸菌可有效降低動(dòng)物的炎癥因子含量，有效緩解仔豬炎癥反應(yīng)，從而提高體內(nèi)的免疫反應(yīng)。

3.3 乳酸菌對(duì)仔豬腸道菌群的影響 仔豬健康與腸道內(nèi)部菌群的分布范圍息息相關(guān)，腸道菌群的種類明顯影響仔豬腸道。仔豬腸道微生物處于動(dòng)態(tài)平衡，機(jī)體受到外界刺激后，會(huì)導(dǎo)致仔豬體內(nèi)腸道菌群失調(diào)，使動(dòng)物出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。在本研究中，飼料添加不同水平乳糖菌對(duì)仔豬大腸桿菌和雙歧桿菌的含量無(wú)顯著影響，提示飼料中添加適量乳酸菌對(duì)仔豬大腸桿菌和雙歧桿菌無(wú)顯著影響。但其乳酸菌能有效緩解腹瀉的原因可能是乳酸菌抑制有害菌的生長(zhǎng)，保持腸道內(nèi)部菌群穩(wěn)定，維護(hù)動(dòng)物腸道健康。