謝正林 吳夢(mèng)雅 許俊齊 趙婉寧 代升飛

摘??? 要：為在食用菌菌渣資源可循環(huán)利用過程中有效檢測(cè)及監(jiān)測(cè)菌渣中的農(nóng)藥殘留，本研究采用單因素試驗(yàn)，優(yōu)化了食用菌菌渣前處理的超聲時(shí)間、靜置時(shí)間及氮吹時(shí)間，建立了菌渣中乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、異菌脲、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯9種農(nóng)藥多殘留量測(cè)定方法。結(jié)果表明，單因素試驗(yàn)確定前處理最佳提取條件為超聲10 min、靜置20 min、氮吹29 min，此方法確定乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、異菌脲、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯9種農(nóng)藥組分檢出限分別為 0.140，0.069，0.048，0.417，0.085，0.732，0.133，0.055，0.349 μg·kg-1;經(jīng)低、中、高多次方法驗(yàn)證樣品中9種農(nóng)藥的平均加標(biāo)回收率范圍控制在76.5%～112.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍是1.60%～11.9%，符合檢測(cè)要求，具備檢測(cè)菌渣未知樣能力;在對(duì)菌渣9種農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，其中未檢出4種，檢出5種，且該5種檢出農(nóng)藥殘留的含量均小于限定值。綜上，該方法具有前處理簡(jiǎn)便、操作可控性高、儀器設(shè)備需求小、靈敏度高、檢測(cè)準(zhǔn)確且安全等特點(diǎn)，可用于食用菌菌渣農(nóng)藥多殘留檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：氣相色譜法;食用菌菌渣;農(nóng)藥多殘留

中圖分類號(hào)：X712???????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A????????? DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2022.01.013

Study on Multiple Residue Detection of Nine Pesticides in Edible Fungus Slag

XIE Zhenglin1，2， WU Mengya1， XU Junqi1， ZHAO Wanning1， DAI Shengfei1，2

（1. Jiangsu Agricultural and Forestry Vocational and Technical College， Jurong， Jiangsu 212400， China; 2. Jiangsu Agricultural and Forestry Testing Center， Jurong， Jiangsu 212400， China）

Abstract： In order to effectively detect and monitor pesticide residues in the recycling of edible fungus residue resources， the experiment was conducted with single factor test，? the ultrasonic time， resting time and nitrogen blowing time were optimized， and the method for determination of 9 pesticide residues in edible fungus slag including vinclozolin， triazolone， procymidone， iprodione， fenpropathrin， lambda-cyhalothrin， cyfluthrin， flucythrinate， fluvalinate were established. The results showed that the optimal extraction conditions determined before the univariate test were ultrasound for 10 min， resting for 20 min， and nitrogen blowing for 29 min. The above method determined the detection limit of nine pesticide components including vinclozolin， triazolone， procymidone， iprodione， fenpropathrin， lambda-cyhalothrin， cyfluthrin， flucythrinate， fluvalinate were?? 0.140， 0.069， 0.048， 0.417， 0.085， 0.732， 0.133， 0.055， 0.349 μg·kg-1， respectively. The average standard recovery range of 9 pesticides in the samples verified by low， medium and high multiple methods was 76.5%-112.2%， the relative standard deviation was 1.60%-11.9%， which could meet with the testing requirements， indicating that the method could be used for the? detect unknown samples of bacterial slag. In edible fungus slag five pesticide residues were detected but the otherfour species were not detected， and all the content of the detected pesticide residues were less than the limited value. Comprehensively， the method has the characteristics of simple preprocessing， high operation control， small equipment demand， high sensitivity， accurate detection， and safety， which could be used for the detection of pesticide residues in edible fungus residue.

Key words： gas chromatography; edible bacteria residue; pesticide residue

近年來，隨著食用菌產(chǎn)業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大，產(chǎn)量日益提升，在消耗大量栽培原料的同時(shí)，菌渣產(chǎn)量也不斷增加。面對(duì)大量菌渣的產(chǎn)生，為避免環(huán)境污染，提高生態(tài)效益，推動(dòng)綠色生態(tài)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，菌渣高效循環(huán)利用產(chǎn)業(yè)化也初見雛形[1]。

食用菌菌渣作為優(yōu)質(zhì)資源在農(nóng)作物種植、園藝作物栽培基質(zhì)、養(yǎng)殖飼料等產(chǎn)業(yè)上發(fā)揮著不小作用[2-3]。菌渣主要是棉子殼、玉米芯、木屑等一些作物秸稈，在經(jīng)過菌絲降解后，農(nóng)藥殘留一部分會(huì)轉(zhuǎn)移到食用菌中，大部分還會(huì)殘留在菌渣中。目前，面對(duì)食品安全，人們大部分注意力放在食用菌農(nóng)殘的檢測(cè)上，而對(duì)于食用菌菌渣安全利用，關(guān)注度不夠。因而，建立一種安全有效的菌渣農(nóng)殘檢測(cè)，分析菌渣中農(nóng)藥殘留成分，防控菌渣中農(nóng)藥殘留進(jìn)一步轉(zhuǎn)移，對(duì)菌渣資源化安全循環(huán)利用有重要意義。為此，本研究基于氣相色譜法檢測(cè)農(nóng)藥殘留的基礎(chǔ)上，探討菌渣中9種農(nóng)藥多殘留：乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、異菌脲、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯的檢測(cè)方法，以期為菌渣資源化利用過程中安全使用奠定研究基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 儀器設(shè)備

氣相色譜儀（Agilent 7890A，配ECD檢測(cè)器）;臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：sigma G-26C? 最大轉(zhuǎn)速，26 000轉(zhuǎn)·min-1（賽多利斯）;電子天平：ME204E/02（梅特勒上海有限公司）;漩渦混合器：Mixplus （艾本森）;超聲波儀：SB25-12DTD （寧波新芝） ;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RE-52AA（上海亞榮公司）;全自動(dòng)平行濃縮儀：AutoEVA-60（廈門?？乒荆?分散機(jī)：IKAT10 （德國(guó)IKA公司）;磨粉機(jī)：SS-1022（圣順機(jī)械）;離心管、移液器以及其它實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備等。

1.2 試劑、耗材

乙腈、丙酮、正己烷：HPLC級(jí) 德國(guó)默克公司;固相萃取柱：弗羅里矽柱（Florisil），容積6 mL，填充物1 000 mg;濾膜：0.2? μm，有機(jī)溶劑膜，鋁箔;菌渣：秀珍菇菌渣，由江蘇農(nóng)林食用菌教學(xué)工場(chǎng)提供;農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品采購于天津阿爾塔科技有限公司，濃度均為1 000 mg·mL-1。

1.3 儀器條件

色譜柱：Agilent色譜柱HP-5MS（30 m×0.250 mm×0.25 mm -60～325 ℃）;柱流量：1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量：1 μL;進(jìn)樣口溫度：250 ℃;載氣：高純氮?dú)饧兌取?9.99%;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣;升溫程序：150 ℃保持0.5 min，10 ℃·min-1升至260 ℃保持5 min，25 ℃·min-1升至300 ℃，保持12 min。

1.4 樣品前處理

1.4.1 試樣的制備與保存 取新鮮菌渣，高速勻漿，放入離心管中，于-20～-18 ℃條件下保存，備用。

1.4.2 試樣前處理 參考NY/T 761-2008標(biāo)準(zhǔn)[4]：準(zhǔn)確稱取25.0 g菌渣置離心管中，移取50.0 mL乙腈，高速振蕩2 min后，超聲提取，濾液收集到裝有7 g NaCl的具塞量筒中，收集濾液40～50 mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置，使乙腈相和水相分層。

濃縮：吸取10.00 mL上清液置于試管中，將試管插入全自動(dòng)平行濃縮儀，50 ℃氮吹至近干，用2.0 mL正己烷復(fù)溶，密封，待凈化。

凈化：將萃取柱依次用5.0 mL丙酮+正己烷（1∶9，V/V）、5.0 mL正己烷潤(rùn)洗活化，隨后立即倒入待凈化液，收集過濾液，用5.0 mL丙酮+正己烷（1∶9，V/V）沖洗萃取柱，并重復(fù)1次。收集的過濾液置于全自動(dòng)平行濃縮儀上，50 ℃氮吹至4 mL，用正己烷定容至5.0 mL，混勻，移入儀器進(jìn)樣品瓶中，待測(cè)。

1.5 菌渣中9種農(nóng)藥多殘留提取條件優(yōu)化

在前期檢測(cè)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，分別設(shè)定超聲時(shí)間、靜置時(shí)間、氮吹時(shí)間范圍對(duì)農(nóng)殘回收率和精密度的具體影響，具體水平詳見表1，以回收率和精密度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，在其它條件相同的情況下，重復(fù)3次前處理提取回收，每次做3個(gè)平行。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

1.6.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 準(zhǔn)確移取乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、異菌脲、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷溶解配制成40 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于0～4 ℃保存。

1.6.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 外標(biāo)法：分別將9種農(nóng)藥儲(chǔ)備液配制成0.001，0.002，0.005，0.01，0.02，0.05，0.1 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物的峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.7 檢出限和定量限

1.7.1 檢出限 9種農(nóng)藥組分添加濃度為0.001 mg·kg-1的樣品的信噪比，根據(jù)式（1）可計(jì)算得檢出限。

檢出限=3×添加濃度/信噪比（1）

1.7.2 定量限 9種農(nóng)藥組分添加濃度為0.001 mg·kg-1的樣品的信噪比，根據(jù)式（2）可計(jì)算得定量限。

定量限=10×添加濃度/信噪比（2）

1.8 方法能力驗(yàn)證試驗(yàn)

取不含本底的菌渣樣品共18份，按照優(yōu)化提取方法進(jìn)行高中低3濃度添加回收試驗(yàn)，測(cè)定出9種農(nóng)藥組分的含量，以峰面積分別計(jì)算9種農(nóng)藥組分在不同添加水平的回收率，分別計(jì)算9種農(nóng)藥組分平均添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲時(shí)間對(duì)回收率和精密度影響

超聲波高頻振動(dòng)可以使菌渣基質(zhì)中的農(nóng)藥和提取液充分接觸，利于提高回收率。由表2可知，各試驗(yàn)在超聲10 min后，回收率基本變化小，且與其他組相比，差異不顯著，考慮到試驗(yàn)成本和效率，選擇超聲時(shí)間控制在10 min最佳。

2.2 靜置時(shí)間對(duì)回收率和精密度影響

由表3可知，隨著靜置時(shí)間推移，9種農(nóng)藥組分回收率也逐漸增加，但超過10 min后，回收率增加并不明顯。當(dāng)靜置15 min時(shí)，雖然回收率達(dá)到最高96.2%，但是精密度為4.34%～16.7%，，提取率雖達(dá)到檢測(cè)要求，但精密度超過了10%，故不選擇為最佳靜置時(shí)間。當(dāng)靜置20 min后，提取率在77.2%～94.4%，精密度在控制在10%以下，達(dá)到檢測(cè)要求，綜合以上，選擇靜置時(shí)間控制在20 min時(shí)最佳。

2.3 氮吹時(shí)間對(duì)回收率和精密度影響

氮吹濃縮時(shí)間對(duì)農(nóng)藥回收率有至關(guān)重要，由表4可知，隨著時(shí)間推移，回收率逐漸提高，當(dāng)?shù)档?9 min時(shí)，回收率達(dá)到最高94.4%，精密度在3.45%～7.42%之間，符合既定的檢測(cè)要求，隨著氮吹濃縮時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)，回收率隨之減低，故認(rèn)為氮吹時(shí)間控制在29 min時(shí)最佳。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

在優(yōu)化后的試驗(yàn)條件下，根據(jù)峰面積對(duì)9種農(nóng)藥的相應(yīng)濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定其線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍，詳見表5，其相關(guān)系數(shù)均>0.99，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合良好。

2.5 檢出限和定量限

由表6可知，菌渣9種農(nóng)藥的檢出限和定量限均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)要求，且均低于標(biāo)準(zhǔn)檢出限，可滿足實(shí)際樣品的測(cè)定。由表7可知，在截取0.5～0.6 min范圍內(nèi)，9種農(nóng)藥組分的信噪比均大于3，達(dá)到儀器可檢出要求。

2.6 方法能力驗(yàn)證

取不含本底的菌渣樣品共18份，進(jìn)行3檔濃度添加回收試驗(yàn)，每個(gè)濃度6個(gè)平行。按優(yōu)化好的試驗(yàn)方法先分別測(cè)定出的9種農(nóng)藥含量，以峰面積計(jì)算9種農(nóng)藥在不同添加水平的回收率，計(jì)算9種農(nóng)藥組分平均添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（表8），樣品中各組分的平均加標(biāo)回收率范圍控制在76.5%～112.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍是1.60%～11.9%，符合檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)要求[5]。

2.7 方法應(yīng)用

2.7.1 空白樣品農(nóng)藥殘留測(cè)定 空白樣品譜圖見圖1，圖中可知空白中未出現(xiàn)9種待測(cè)農(nóng)藥。由圖2可知，9種農(nóng)藥色譜圖如下，各農(nóng)藥峰形較好，響應(yīng)值較高。因此，可利用優(yōu)化好的前處理方法對(duì)樣品進(jìn)行農(nóng)藥提取，并進(jìn)行檢測(cè)。

2.7.2 菌渣樣品農(nóng)藥殘留量測(cè)定 按照優(yōu)化好提取的方法，對(duì)菌渣樣品進(jìn)行農(nóng)藥殘留提取及測(cè)定。用于定量的標(biāo)樣濃度為0.01 mg·L-1，質(zhì)控回收樣添加濃度為0.05 mg·kg-1，加標(biāo)樣品平行2次，待測(cè)菌渣樣品平行2次。采用2.3所述中的儀器條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表8。由表8可知，空白樣均未檢出目標(biāo)農(nóng)藥，9種農(nóng)藥加標(biāo)樣平均回收率為94.0%～104.2%，RSD值為0.206%～8.71%，說明檢測(cè)方法與檢測(cè)能力均可達(dá)到檢測(cè)要求。菌渣樣品中乙烯菌核利、三唑酮、甲氰菊酯、氟氨氰菊酯4種農(nóng)藥未檢出，但腐霉利、異菌脲、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯5種農(nóng)藥有檢出，平均含量分別為：3.535，0.278，0.428，0.129，0.134 mg·kg-1。

3 結(jié)論與討論

本研究建立了測(cè)定菌渣中9農(nóng)藥多殘留量的方法，反復(fù)試驗(yàn)確定前處理最佳提取條件為，超聲時(shí)間10 min、靜置時(shí)間20 min、氮吹時(shí)間29 min。

通過前處理和儀器檢測(cè)方法確定9種農(nóng)藥組分檢出限分別為：乙烯菌核利0.140 μg·kg-1、三唑酮0.069 μg·kg-1、腐霉利0.048 μg·kg-1、異菌脲0.417 μg·kg-1、甲氰菊酯0.085 μg·kg-1、高效氯氟氰菊酯0.732 μg·kg-1、氟氯氰菊酯0.133 μg·kg-1、氟氰戊菊酯0.055 μg·kg-1、氟氨氰菊酯0.349 μg·kg-1;經(jīng)過低、中、高多次方法驗(yàn)證試驗(yàn)表明，樣品中9種農(nóng)藥的平均加標(biāo)回收率范圍控制為76.5%～112.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1.60%～11.9%，均符合檢測(cè)要求，具備檢測(cè)菌渣未知樣能力。對(duì)未知菌渣樣的檢測(cè)結(jié)果表明：菌渣9種農(nóng)藥殘留未檢出4種，檢出5種，且5種檢出農(nóng)藥殘留的含量均小于限定值，表明菌渣的安全利用較為樂觀。

本研究建立了菌渣中農(nóng)藥多殘留量檢測(cè)方法，且該方法具有前處理簡(jiǎn)便、操作可控性高、儀器設(shè)備需求小、靈敏度高、檢測(cè)準(zhǔn)確，且安全等特點(diǎn)，對(duì)于食用菌產(chǎn)業(yè)中菌渣高效循環(huán)利用具有重要意義。

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收稿日期：2021-09-04

基金項(xiàng)目：江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院科技項(xiàng)目（2021kj77），江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目（202113103021y）

作者簡(jiǎn)介：謝正林（1982—），男，江蘇句容人，實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)與食用菌技術(shù)推廣方面研究。