陳滔 張紹花

子宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的惡性腫瘤。2020全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告[1]顯示，2020年全球女性子宮頸癌新發(fā)病例604 127例，其中109 741例來自中國(guó)，子宮頸癌位于女性惡性腫瘤的第四位，發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率和死亡率遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)國(guó)家。1976年，Harald zur Hausen發(fā)現(xiàn)了人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）與子宮頸癌的因果關(guān)系，高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染是宮頸癌及癌前病變的致病因素[2]。為了優(yōu)化診斷工具與篩查選擇，促進(jìn)宮頸癌預(yù)防并挽救更多生命，發(fā)布了第二版《宮頸癌前病變篩查和治療指南》[3]，其強(qiáng)烈推薦將HPV-DNA檢測(cè)作為首選的篩查方式，取代了至今沿用的醋酸染色目視觀察（visual observation of acetic acid staining，VIA）或細(xì)胞學(xué)檢查。從敏感性和特異性方面考慮，具有更高的性價(jià)比。HPV具體型別的感染和感染持續(xù)時(shí)間是宮頸病變發(fā)生及發(fā)展的2個(gè)關(guān)鍵因素，而HPV病毒的載量及病毒清除與預(yù)后關(guān)系的研究存在爭(zhēng)議[4-6]。不同型別的HPV病毒載量與宮頸病變間的風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系仍然需要大量細(xì)致的研究工作方得以探明。本研究采用對(duì)21種HPV病毒亞型進(jìn)行分型并同時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化定量檢測(cè)，文章的研究結(jié)果為吉首地區(qū)女性HPV的主要感染類型為單一型感染，最易感亞型并非HPV16、18型，隨著年齡的增長(zhǎng)女性更易感HPV，需在防控工作中要引起重視。不同亞型感染與其病毒載量的關(guān)系有待進(jìn)一步探究，為后期標(biāo)準(zhǔn)制訂了借鑒內(nèi)容，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集整理2020年6月—2021年5月來吉首市人民醫(yī)院婦科門診接受同步HPV分型定量檢測(cè)的14～79歲女性共1 316例，平均年齡（39.91±3.18）歲。同時(shí)追蹤HPV檢測(cè)結(jié)果為陽性的病例的TCT及在陰道鏡下做多點(diǎn)活檢的病理檢查結(jié)果。本次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 同步HPV分型定量檢測(cè) 本研究采用江蘇碩世生物科技股份有限公司生產(chǎn)的HPV分型及定量檢測(cè)試劑盒，利用多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了同步HPV分型與定量的檢測(cè)。在短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確地區(qū)分檢驗(yàn)標(biāo)本中21種HPV基因亞型（包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82、73及HPV 6、11和81亞型），并通過單拷貝基因（管家基因）與待測(cè)細(xì)胞之間的線性關(guān)系獲得單位細(xì)胞內(nèi)HPV病毒亞型的載量——HPV基因拷貝數(shù)/每10萬細(xì)胞。細(xì)胞單拷貝基因數(shù)測(cè)算樣本中細(xì)胞數(shù)，獲得同等細(xì)胞數(shù)中HPV的病毒量，進(jìn)而同步對(duì)這21種HPV亞型病毒載量進(jìn)行定量檢測(cè)。

1.2.2 樣本的采集 采樣前，用棉拭子輕輕擦拭宮頸口過多的分泌物，將宮頸采樣刷伸入宮頸口鱗柱上皮交界處，順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈采集宮頸脫落細(xì)胞，將其放入標(biāo)有患者編號(hào)的取樣管中，密閉送檢。樣本采集后及時(shí)檢測(cè)，2～8℃保存3 d內(nèi)完成檢測(cè)，-20℃保存不超過12個(gè)月。樣本避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不能超過5次，采用冰袋低溫運(yùn)輸不能超過3 d。

1.2.3 儀器及試劑 使用的主要檢測(cè)設(shè)備為美國(guó)伯樂公司生產(chǎn)的CFX-96實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀（polymerase chain reaction，PCR），檢測(cè)試劑為江蘇碩世生物科技股份有限公司生產(chǎn)的人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法），分析軟件為江蘇碩世生物科技股份有限公司自研的HPV核酸分型定量分析軟件V1.0進(jìn)行分型定量分析。將檢出的HPV亞型對(duì)應(yīng)的循環(huán)閾值（cycle threshold，CT值）及內(nèi)參基因的CT值分別輸入分析軟件對(duì)應(yīng)位置中，由軟件自動(dòng)分析計(jì)算出單位細(xì)胞內(nèi)對(duì)應(yīng)型別HPV感染的標(biāo)準(zhǔn)病毒載量。設(shè)備及試劑嚴(yán)格按照各自操作說明書使用，讀取每次有效實(shí)驗(yàn)的分型及定量拷貝數(shù)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料的表達(dá)方式為n（%），比較用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料的表達(dá)方式為（x-±s），比較用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

本研究共對(duì)1 316例標(biāo)本進(jìn)行21種HPV基因分型定量情況進(jìn)行檢測(cè)。其中發(fā)現(xiàn)有HPV感染者254例，感染率為19.30%。其中單一型別HPV感染人數(shù)190例，感染率為14.44%，感染人次數(shù)占總感染者74.8%，為主要感染方式。含至少16型HPV感染人數(shù)26例，感染率1.98%；含至少18型HPV感染人數(shù)6例，感染率0.46%。感染人次數(shù)最多的亞型為HPV52型，感染人次76例，感染率5.78%，占總感染者比例29.92%。吉首地區(qū)女性HPV感染總體分布情況見表1。

表1 吉首地區(qū)女性HPV感染亞型分布情況

根據(jù)年齡的不同，將受檢的吉首地區(qū)女性分為低齡至老齡5個(gè)組別，分別與平均對(duì)照組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)老齡組的HPV陽性率較平均對(duì)照組有顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。吉首地區(qū)女性不同年齡組別HPV感染分布情況見表2。

表2 吉首地區(qū)女性不同年齡組別HPV感染分布情況

本研究對(duì)1 316例標(biāo)本進(jìn)行21種HPV基因分型定量檢測(cè)。包含復(fù)合感染情況下，所有21種型別總感染頻率為342次。選取同期10次實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控作為本次研究的質(zhì)控對(duì)照組和感染頻率超過10次的HPV亞型作為亞型測(cè)試組（它們感染頻次由高至低依次為：HPV52、58、16、81、68、53、51、39、6。將各亞型依次分為亞型檢測(cè)組1、2、3、4、5、6、7、8、9）進(jìn)行比較分析。發(fā)現(xiàn)各亞型檢測(cè)組的病毒載量均值較質(zhì)控對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。吉首地區(qū)女性不同HPV亞型感染病毒載量情況見表3。

表3 吉首地區(qū)女性不同HPV亞型感染病毒載量情況

3 討論

大量研究已經(jīng)表明，高危型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件[7-9]。本研究發(fā)現(xiàn)吉首地區(qū)女性HPV感染主要為單一亞型感染，單一亞型的HPV感染使人們更容易對(duì)HPV的感染進(jìn)行準(zhǔn)確的處置，同時(shí)人們也需要對(duì)復(fù)合型HPV感染者引起足夠的重視，復(fù)合型HPV感染情況相對(duì)復(fù)雜，需要更多的研究對(duì)其進(jìn)行探索。

本研究顯示吉首地區(qū)HPV感染人群中，HPV52、58型感染人數(shù)最多，成為最易感亞型，甚至超過16、18型感染人數(shù)，這在全國(guó)范圍均具有普遍性，因此52型的HPV感染值得人們更加深入關(guān)注。

宮頸癌的癌前病變與年齡密切相關(guān)，本研究顯示吉首地區(qū)女性受檢者中≥60歲的老齡組HPV檢測(cè)陽性率顯著高于平均水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這可能受限于當(dāng)?shù)厝罕妼?duì)于宮頸癌防治政策的認(rèn)知程度，老年人更少接收到相關(guān)的政策信息，對(duì)于HPV檢測(cè)不了解，一般待有了臨床癥狀才去就診，進(jìn)而導(dǎo)致受檢者陽性率較高[10]。另一方面，由于絕大多數(shù)HPV感染都是一過性的，機(jī)體能夠?qū)Υ蟛糠值腍PV自動(dòng)清除[11]，老年人的機(jī)體免疫能力降低，對(duì)HPV清除能力下降也是導(dǎo)致老年人HPV感染率增加的重要原因。這表明在宮頸癌防治方面，人們需要更加關(guān)注老年人群體，做好政策宣傳和定期篩查與回訪。

HPV分型定量檢測(cè)，其標(biāo)本為受檢者的宮頸脫落細(xì)胞，由于取樣及送檢保存的耗材相同，采樣人員相對(duì)固定，且均經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)的宮頸采樣培訓(xùn)。因此固定人群使用固定耗材對(duì)HPV的定量檢測(cè)結(jié)果的影響可忽略[12]。對(duì)所有陽性標(biāo)本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)此次吉首地區(qū)女性HPV感染亞型最多的為52型和58型，占所有陽性比例為22.22%和10.53%。52、58型同樣有著較高的致癌風(fēng)險(xiǎn)，需及時(shí)有效篩查，可根據(jù)研究結(jié)果，按照不同亞型的易感程度進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)化管理風(fēng)險(xiǎn)人群[13-14]。所有亞型的病毒載量值與試劑盒本身質(zhì)控定量值相比或各亞型檢測(cè)組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明不同HPV亞型的感染所產(chǎn)生的病毒載量高低無顯著差別。病毒載量的高低與不同HPV亞型感染及宮頸癌癌變的關(guān)系還有待更加深入研究。

高危型HPV的檢測(cè)已被學(xué)術(shù)界認(rèn)可為子宮頸癌防治最有利武器。2014年WHO 宮頸癌綜合防治基本實(shí)踐指南（第二版）指出，普及利用HPV檢測(cè)篩查女性預(yù)防子宮頸癌，將大大節(jié)約醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)的成本。同時(shí)近年來國(guó)際上有相關(guān)學(xué)者提出HPV的病毒載量是子宮頸癌發(fā)病的獨(dú)立致癌因素[15]，盡早準(zhǔn)確地進(jìn)行HPV分型檢測(cè)篩查，對(duì)宮頸癌的防治有著非常重要的意義[16-17]。雖然此次研究未發(fā)現(xiàn)不同亞型的感染與其載量間的直接差異關(guān)系，但隨著研究的進(jìn)一步深入，HPV感染期的病毒載量仍將成為子宮頸癌防治的重點(diǎn)關(guān)注要素之一。

綜上所述，吉首地區(qū)女性HPV的感染以單一型感染為主，以HPV52型為最易感的亞型，且隨著年齡的增長(zhǎng)女性感染HPV的風(fēng)險(xiǎn)升高，因此在防控工作中需引起重視，不同亞型感染與其病毒載量的關(guān)系有待進(jìn)一步探究。