張一凡，郝 林，奉啟鋮，陳梓欣，胡婭琪

(西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西 西安 710021)

PDT是以光敏劑和氧的相互作用為基礎(chǔ)的一種新型癌癥治療手段，通過將光敏劑注入體內(nèi)，經(jīng)特定波長激光照射后產(chǎn)生單線態(tài)氧和自由基，破壞腫瘤組織外周血管，從而對腫瘤細(xì)胞造成損傷，激發(fā)人體免疫機(jī)制[1]。與其他傳統(tǒng)的治療方法不同，PDT對組織具有侵襲小，低累積毒性和高反應(yīng)性的優(yōu)點(diǎn)。該手段相較于手術(shù)或化療等治療方法可有效降低長期發(fā)病率，其中光敏劑的性能直接決定PDT效果[2]。

在眾多光敏劑中，由于卟啉(圖1)在光治療窗口(600～ 850 nm)具有較高的活性氧(ROS)產(chǎn)率，且結(jié)構(gòu)易于官能化修飾、結(jié)構(gòu)多樣，因此在PDT方面具有一定的優(yōu)勢。但是卟啉化合物疏水性較強(qiáng)，并且平面大環(huán)π-π系統(tǒng)之間的強(qiáng)吸引力相互作用導(dǎo)致其在生理?xiàng)l件下具有很強(qiáng)的自聚集傾向[3]，更是由于體內(nèi)應(yīng)用代謝較快而降低其對光的吸收而降低生物利用度，所以為實(shí)現(xiàn)更好的治療效果，往往會增加光敏劑的用量，同時也增加了藥物毒性而引起副作用。目前在II型PDT中三重激發(fā)態(tài)分子吸收能量并傳遞給周圍的O2，氧分子被激發(fā)形成1O2或其他ROS，因而PDT的治療效果取決于細(xì)胞中的O2含量。然而，由于腫瘤細(xì)胞較快的新陳代謝(如侵略性增殖和腫瘤血管系統(tǒng)的畸變)會導(dǎo)致組織處于缺氧狀態(tài)，較低的O2含量使光敏劑無法高效地產(chǎn)生ROS，這是降低PDT效果的主要限制因素。因此目前PDT所面臨的挑戰(zhàn)主要集中在：如何改善光敏劑的溶解性、聚集問題、提高ROS產(chǎn)率和實(shí)現(xiàn)腫瘤的靶向聯(lián)合治療。因此，開發(fā)新型的光敏系統(tǒng)以改善PDT效果至關(guān)重要。

圖1 卟吩、卟啉和金屬卟啉的結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Structural formulas of porphin， porphyrin and metal porphyrin

為了解決以上問題，研究者將卟啉分子作為有機(jī)橋連配體合成具有一定尺寸和周期性結(jié)構(gòu)的Por-MOFs，通過MOFs對卟啉進(jìn)行納米功能化修飾，在Por-MOFs框架結(jié)構(gòu)中，卟啉分子之間被很好的分隔開，避免了由于分子聚集而引發(fā)的性能下降，以期改善其在體內(nèi)的循環(huán)性能、腫瘤富集能力、以實(shí)現(xiàn)更好的PDT效果。目前，Por-MOFs納米材料作為光敏劑在PDT治療中主要是以II型機(jī)制與光熱治療、化療、放療等結(jié)合，進(jìn)行多模式協(xié)同治療。本文著重對近五年來Por-MOFs在PDT的應(yīng)用進(jìn)行概述，主要包括ROS產(chǎn)率的提高，腫瘤乏氧微環(huán)境的改善，生理活性分子的消耗，信號分子的釋放，靶向聯(lián)合治療這五個方面，并對其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

1 ROS產(chǎn)率的提高

較低的ROS產(chǎn)率是降低PDT效果的主要因素，為了獲得較高的PDT治療效果，提高ROS的產(chǎn)率是關(guān)鍵問題之一。早在2014年，Lu等[4]首次通過Hf4+和羧基卟啉(H2DBP)合成DBP-UiO NMO，用于治療頭頸部癌。通過將卟啉分子以MOFs結(jié)構(gòu)進(jìn)行組裝有效地避免了卟啉分子聚集引起的自猝滅，提高了對癌細(xì)胞的靶向性，有利于ROS的擴(kuò)散，卟啉羧基與Hf之間的配位作用加強(qiáng)了系間竄越使得3O2轉(zhuǎn)換為1O2，在體內(nèi)體外顯示出較強(qiáng)的PDT效果。但由于卟啉的摩爾消光系數(shù)相對較低而影響PDT效果，難以治療臨床病例中深層組織腫瘤。因此，為加快組織內(nèi)1O2產(chǎn)率，增強(qiáng)光敏劑的光吸收系數(shù)，該課題組設(shè)計了一種氯基納米金屬有機(jī)框架，將DBP-UiO中的卟啉還原為二氫卟吩，得到了DBC-UiO，光譜產(chǎn)生13 nm的紅移，大大提高了摩爾消光系數(shù)(約11倍)，PDT效果明顯提升[5]。Zhou等[6]報道了以一種碘取代的二羧基鋅卟啉(ZnDTPP-I2-2H)為配體通過一鍋法在UiO-66基礎(chǔ)上合成新型ZnDTPP-I2?UiO-66。相對于無碘取代的ZnDTPP?UiO-66，ZnDTPP-I2?UiO-66通過重原子效應(yīng)有效提高了卟啉光敏劑的系間竄越效率和1O2產(chǎn)率，在生理?xiàng)l件下具有較高的光敏性，對于腫瘤細(xì)胞具有優(yōu)異的PDT效果。然而，Ju等[7]認(rèn)為由于三重激發(fā)態(tài)分子可以轉(zhuǎn)變?yōu)榛鶓B(tài)的過程受到輻射衰減，磷光，最終會降低1O2的產(chǎn)率。增強(qiáng)系間竄越未必會提高3O2-→1O2的轉(zhuǎn)換率，因此要增強(qiáng)PDT效果需要提高1O2的產(chǎn)率。該工作將卟啉(TMPyP)組裝為PS@MOF，進(jìn)一步地將葉酸和半胱天冬酶標(biāo)記在PS@MOF表面得到PS@MOF多功能納米探針，減弱了磷光，提高了3O2-→1O2的轉(zhuǎn)換率。修飾的Cy3標(biāo)記的半胱天冬酶可用來進(jìn)行細(xì)胞凋亡成像，以及激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3用于藥物治療效果的評估。通過二苯基苯并呋喃檢測1O2的形成，發(fā)現(xiàn)1O2產(chǎn)率得到增加6.2倍，PS@MOF合成簡單，生物相容性好，特異性好，PDT治療效果較優(yōu)。這項(xiàng)工作將診斷功能整合在一個納米載體上，在癌癥的精準(zhǔn)診斷和治療前景方面具有廣闊的應(yīng)用。

除了以卟啉直接作為配體合成Por-MOFs，通過后修飾法將卟啉光敏劑連接到NMOFs顆粒表面不僅可以保持卟啉的光敏性，同時可以保持NMOFs的結(jié)構(gòu)完整性。如Kan等[8]通過后修飾的合成方法將卟啉連接到MOFs納米顆粒的表面，保持了MOF材料的完整性和卟啉的光敏特性，發(fā)現(xiàn)MOFs顆粒中卟啉的位置可能是提高PDT效果的關(guān)鍵因素?；赥iO2與Por-MOFs之間的光化學(xué)反應(yīng)，Shi等[9]將超小TiO2包覆于鑭系上轉(zhuǎn)換納米粒子(UCNPs)與Por-MOFs異質(zhì)二聚體表面構(gòu)筑的光敏系統(tǒng)具有較好的生物相容性，穩(wěn)定性和水溶性，在近紅外光輻射條件下，UCNPs產(chǎn)生的紫外可見光不僅可以刺激TiO2和卟啉的光化學(xué)反應(yīng)，同時能實(shí)現(xiàn)有效的腫瘤富集和深層滲透，可作為一種理想的PDT平臺用于多種類型的腫瘤治療。為了提高Por-MOFs在細(xì)胞內(nèi)的富集，降低毒性，Wang[10]報道了一種由MOF通過液相剝離法制備超小Por-MOFs納米點(diǎn)，此材料可被腎臟快速清除，具有較低的生物毒性，由于尺寸較小，產(chǎn)生的1O2是單純MOFs前體的2倍，可以較好的從框架材料中擴(kuò)散出去，避免了單線態(tài)氧的猝滅，大大降低了PDT因NMOFs內(nèi)部產(chǎn)生的ROS利用效率低下而導(dǎo)致的PDT有效性的降低。超小型納米點(diǎn)在體內(nèi)顯示出高效的腫瘤富集和快速的腎清除能力，這一研究成果推進(jìn)了安全有效的光動力治療材料的開發(fā)及臨床應(yīng)用。

2 腫瘤乏氧微環(huán)境的改善

缺氧是大多數(shù)實(shí)體瘤的一個最顯著特征，通常是由腫瘤細(xì)胞的侵略性增殖和腫瘤血管系統(tǒng)的畸變引起的，嚴(yán)重的缺氧微環(huán)境降低了PDT效果，更是產(chǎn)生復(fù)發(fā)、侵襲和轉(zhuǎn)移而造成難以治愈的重要原因。因此要提高PDT效果必須要改善腫瘤細(xì)胞缺氧環(huán)境。

納米酶由于具有高穩(wěn)定性、低成本和易于制備等優(yōu)點(diǎn)，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的關(guān)注，已有諸多研究報道了將納米酶用于腫瘤的化學(xué)動力學(xué)治療。然而，由于納米酶對正常組織毒性相對較高和在靶點(diǎn)組織活性較低，開發(fā)一種毒性低、多種酶活性且高效腫瘤部位特異性的納米復(fù)合酶仍然面臨巨大的挑戰(zhàn)。基于PtNPs對H2O2優(yōu)異的催化性，Liu等[14]提出一種催化性增強(qiáng)的雙納米酶Por-MOFs(PCN)，首先將具有過氧化氫酶活性的Pt NPs負(fù)載于PCN表面形成三明治夾層結(jié)構(gòu)-PCN@Pt@PCN，內(nèi)層結(jié)構(gòu)嵌入葡萄糖氧化酶模擬酶-AuNPs，再通過配位作用將葉酸修飾于其表面得到PCN@Pt@PCN-AuNPs-FA復(fù)合材料，增加了材料在生理環(huán)境中的穩(wěn)定性。其中Pt NPs可以通過將腫瘤細(xì)胞內(nèi)H2O2催化為O2而有效地改善腫瘤細(xì)胞的乏氧狀態(tài)，增強(qiáng)了PDT效果，另外Au NPs促進(jìn)了β-D-葡萄糖的消耗，與Pt NPs協(xié)同作用實(shí)現(xiàn)了腫瘤的饑餓療法。此項(xiàng)工作考慮了腫瘤微環(huán)境，基于改善微環(huán)境的思想設(shè)計了相關(guān)的納米反應(yīng)器，為實(shí)際應(yīng)用中催化多層模型的設(shè)計在提供了思路。

除此之外，抑制葡萄糖的有氧酵解可減少氧的消耗，有利于提高PDT效果。Zhang等[15]以Por-MOFs納米粒子(PCN-224)為載體，將葡糖氧化酶(GOX)和過氧化氫酶(CAT)封裝至MOFs內(nèi)部，癌細(xì)胞膜包覆表面。光激發(fā)條件下，PCN-224生成1O2，GOX加速了葡萄糖的分解，進(jìn)而抑制了葡萄糖的有氧酵解，切斷了腫瘤的能量供給。此外，CAT將腫瘤細(xì)胞內(nèi)H2O2還原為O2，改善了組織內(nèi)乏氧情況。Zhao等[16]通過液層擴(kuò)散法制備得到負(fù)載氧化鐵的鐵Por-MOFs(FeTCPP/Fe2O3MOF)材料，MOFs材料中的鐵以及負(fù)載的Fe2O3可以催化芬頓反應(yīng)產(chǎn)生羥基自由基進(jìn)而改善腫瘤細(xì)胞的乏氧環(huán)境。Por-MOFs優(yōu)異的單分散性和多孔性使更多的活性位點(diǎn)暴露，促進(jìn)了PDT過程中卟啉分子與氧分子間的能量交換，1O2、·OH協(xié)同作用獲得了理想的PDT/CDT腫瘤治療效果。進(jìn)一步地將微囊化紅細(xì)胞包覆于MOFs表面以增強(qiáng)其在體內(nèi)的血液循環(huán)和停留時間，再將AS1411適配體修飾在MOFs表面以實(shí)現(xiàn)其在腫瘤組織中的高富集，這項(xiàng)工作為Por-MOFs在腫瘤靶向治療方面提供了理論實(shí)踐基礎(chǔ)。

3 生理活性分子的消耗

谷胱甘肽(GSH)是一種普遍存在的生物硫醇，具有清除毒素、維持氧化還原穩(wěn)態(tài)和調(diào)控基因的作用，GSH的濃度異?？赡芤鸲喾N疾病。光敏劑產(chǎn)生的ROS可被細(xì)胞中高濃度的GSH消除，因而降低了PDT效果。因此有兩種途徑可以提高ROS的產(chǎn)率：(1)減少GSH濃度；(2)增加光敏劑濃度。但光敏劑的濃度過高會引起副作用，因此減小GSH的含量有望增強(qiáng)PDT效果。鑒于Cu2+可以特異性結(jié)合GSH，Zhang等[17]報道了一種Al-Cu混合金屬Por-MOFs，其中Cu2+為PDT的活性中心，通過與Cu2+的特異性鍵合作用，細(xì)胞內(nèi)GSH濃度降低，ROS濃度增大，同時Por-MOFs被癌細(xì)胞捕獲在光輻射條件下產(chǎn)生高濃度ROS，獲得了較好的PDT效果。

除了Cu2+，過氧化氫酶、MnO2、MnFe2O4等都可以消耗GSH，Zhang等[18]以MnFe2O4為核，四羧基卟啉為配體，Zr4+為金屬節(jié)點(diǎn)合成了MnFe2O4@MOF核-殼納米粒子，MnFe2O4不僅可以與GSH反應(yīng)，還具有過氧化氫酶的活性可將H2O2催化生成1O2，有效改善了癌細(xì)胞的乏氧環(huán)境，具有較高的PDT效果，基于MnFe2O4的磁共振成像可輔助PDT用于腫瘤的精準(zhǔn)治療。MnO2具有很強(qiáng)的氧化能力，能被GSH還原為Mn2+，可用作腫瘤細(xì)胞MRI/PDT聯(lián)合診療平臺。該檢測平臺為早期腫瘤的診斷提供了更可靠的檢測方案。Tian等[19]將MnO2包覆至Por-MOFs(PCN-222)表面，進(jìn)一步負(fù)載阿霉素得到生物相容性好的PCN@MnO2材料，GSH被MnO2消耗提高了1O2產(chǎn)率，PDT效果得到增強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)了阿霉素的可控釋放，這肯定了MnO2在PDT和化療方面所具有的重要意義，顯示了在成像引導(dǎo)的癌癥治療方面的應(yīng)用前景。Liu等[20]合成了不同類型的Por-MOFs納米粒子，并成功地應(yīng)用在成像-PDT多模診療方面，為癌癥的精準(zhǔn)治療提供了方向。比如在Fe3O4表面原位生成了Por-MOFs(PMOF)得到了生物相容性良好的核-殼納米材料，用于熒光/磁共振雙模成像引導(dǎo)的PTT/PDT雙模治療。Fe3O4@C@PMOF具有在癌細(xì)胞中高富集，正常細(xì)胞中低毒的優(yōu)點(diǎn)，在腫瘤的多模診療方面具有一定的潛力。

4 信號分子的釋放

作為自然界中最小、最簡單的生物活性分子之一的NO，參與調(diào)解多種細(xì)胞活動，如血管生長、平滑肌舒張、免疫應(yīng)答、細(xì)胞凋亡和突觸信息傳遞等。NO除了在正常生理活動中發(fā)揮作用以外，大量研究已證實(shí)體內(nèi)NO生成不足常常與多種重大疾病的發(fā)生有密切的關(guān)系，內(nèi)生NO在抗腫瘤和治療方面具有重大的意義，適當(dāng)濃度的NO可促進(jìn)腫瘤生長，高濃度的NO則不利于腫瘤生長而具有抗腫瘤作用。人體內(nèi)NO是通過NO合成酶催化L-精氨酸(L-Arg)和O2生成的。鑒于L-Arg為NO供體，Zhang等[21]將L-Arg負(fù)載到Por-MOFs(PCN-224)中得到L-Arg@PCN-224納米粒子，進(jìn)一步包覆癌細(xì)胞膜可以更真實(shí)地模仿腫瘤細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)。PCN-224產(chǎn)生的大量1O2，不僅可以實(shí)現(xiàn)PDT，還可以催化L-Arg產(chǎn)生高濃度NO進(jìn)行聯(lián)合治療。結(jié)果表明，NO由于可以自由擴(kuò)散至乏氧的深層次腫瘤組織，包覆的癌細(xì)胞膜對腫瘤細(xì)胞具有靶向性，可有效地增強(qiáng)同類腫瘤細(xì)胞的PDT效果。Ma等[22]首次以四(4-羧基苯基)鋅卟啉為主有機(jī)配體、Cu2+為輔助配體合成了一種新型的混合金屬的MOF納米粒子類型的光敏劑(MOF NP)，這種光敏劑能夠?qū)DT治療過程中腫瘤微環(huán)境中存在信號分子-H2S激活，實(shí)現(xiàn)了活細(xì)胞內(nèi)ROS的可控釋放，能夠有效地殺死腫瘤細(xì)胞進(jìn)而達(dá)到實(shí)現(xiàn)有效的PDT治療效果。這為發(fā)展應(yīng)用于能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)部活性氧可控釋放以及靶向治療的多功能化的MOF NP光敏劑提供了思路。

5 靶向聯(lián)合治療

Por-MOFs解決了傳統(tǒng)卟啉光敏劑存在的水溶性差，自猝滅聚集的缺點(diǎn)。但是提高對癌組織的靶向性仍然是Por-MOFs在PDT應(yīng)用方面的關(guān)鍵問題。通過將小分子、多肽、抗體、適配體引入Por-MOFs可以實(shí)現(xiàn)與癌細(xì)胞表面受體的特異性結(jié)合，增強(qiáng)靶向性。其中功能化DNA修飾的Por-MOFs在這方面得到了廣泛的應(yīng)用，針對目前MOFs-DNA合成復(fù)雜的問題。Liu等[23]以Zr4+為金屬節(jié)點(diǎn)，四羧基卟啉，苯甲酸為配體合成Por-MOFs(Zr-MOF)，在此基礎(chǔ)上通過磷酸功能化適配體與Zr4+強(qiáng)烈的配位作用將適配體修飾在Zr-MOF，進(jìn)一步地與癌細(xì)胞表面受體結(jié)合引起適配體結(jié)構(gòu)的改變，增強(qiáng)了PDT靶向效果。

納米MOFs的結(jié)構(gòu)和尺寸會影響藥物的負(fù)載，以及細(xì)胞的吞噬作用。Zhang等[24]以四羧基卟啉、苯甲酸為配體，Zr4+為金屬節(jié)點(diǎn)合成了PCN-224，PCN-224可以作為載體負(fù)載阿霉素(DOX)得到DOX@PCN-224，進(jìn)一步地將兩終端修飾羧基和熒光素的A549肺癌細(xì)胞適配體通過羧基與Zr4+的配位作用，修飾于DOX@PCN-224得到PCN-224-DNA，當(dāng)PCN-224-DNA接觸A549細(xì)胞后，可以通過與腫瘤細(xì)胞表面的蛋白特異性結(jié)合作用進(jìn)行識別，另外熒光素可以實(shí)現(xiàn)癌細(xì)胞的追蹤，腫瘤微環(huán)境較低pH使得DOX被釋放，引起癌細(xì)胞凋亡，并且在化學(xué)治療和光動力治療聯(lián)合方面表現(xiàn)出較高的靶向性，表面進(jìn)行適配體功能化修飾的PCN-224為基于MOFs材料的靶向治療和生物傳感器的發(fā)展提供了思路。Sun等[25]以一鍋法合成的ZIF-8納米粒子為模板，通過自犧牲模板法合成了具有超高載藥量的空心球形H-PMOF，相對于傳統(tǒng)非空心Por-MOFs納米粒子，H-PMOF不僅具有較強(qiáng)的光動力治療效果，還可作為藥物載體負(fù)載阿霉素(DOX)和吲哚菁綠(ICG)，負(fù)載率高達(dá)635%，進(jìn)一步將細(xì)胞膜包覆在其表面得到具有優(yōu)異的同型性瘤靶向作用和免疫逃逸功能的材料，更有意思的是DIHPm顯示出pH調(diào)控和近紅外激光觸發(fā)的DOX釋放能力，實(shí)現(xiàn)了藥物的可控遞送。Min等[26]設(shè)計了一種將抗血管生成藥物封裝于卟啉MOFs孔道內(nèi)，然后在MOFs外包裹一層MnO2，癌細(xì)胞膜包覆表面，從而增加生物相容性，極大地提高了PDT的治療效果。Li等[27]通過將葡萄糖氧化酶(GOx)和過氧化氫酶嵌入PCN-224的癌細(xì)胞膜，偽裝卟啉金屬有機(jī)骨架，構(gòu)建了一種用于協(xié)同饑餓和光動力治療的腫瘤靶向級聯(lián)生物反應(yīng)器(mCGP)。通過仿生表面功能化，mCGP的免疫逃逸和同源靶向行為將顯著增強(qiáng)其腫瘤靶向能力。mCGP通過催化內(nèi)源性過氧化氫促進(jìn)微環(huán)境氧化，在光照射下加速細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的分解，增加單線態(tài)氧產(chǎn)率，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤的PDT-饑餓-免疫協(xié)同治療。

相對于傳統(tǒng)MOFs，多組分MOFs(混合配體，混合金屬)具有結(jié)構(gòu)多樣性，多組分Por-MOFs結(jié)合了每一種成分所具有的物化性質(zhì)，極大地增強(qiáng)了材料的整體功能，具有較高的應(yīng)用性能。例如，Sun等[28]引入多個具有不同分子尺寸、對稱性、連接性的有機(jī)配體通過一鍋法合成穩(wěn)定性較高的多組分Por-MOFs(Zr-MOF)，通過調(diào)控卟啉分子和開關(guān)分子的比例獲得了較高的1O2產(chǎn)率。通過光致變色開關(guān)控制光輻射實(shí)現(xiàn)ROS的可逆產(chǎn)生，相比與同種分子光敏劑，Zr-MOF納米離子具有優(yōu)異的1O2產(chǎn)生調(diào)控性能以及增強(qiáng)的PDT效果[29]。Sakamaki等[30]以多種卟啉衍生物(二羧基苯基/五氟苯基取代鎳卟啉/卟吩)為混合配體，Hf4+為金屬節(jié)點(diǎn)合成了Por-MOFs，再進(jìn)行金屬化將Zn2+配位至卟啉中心作為生物偶聯(lián)位點(diǎn)。通過將乙二胺功能化麥芽三糖修飾在Hf-MOFs表面可以提高分子兩親性與癌細(xì)胞表面過度表達(dá)的糖受體結(jié)合，增加胰腺癌和乳腺癌細(xì)胞對光敏劑的攝取以提高靶向性，克服了目前PDT過程中在光敏劑持續(xù)時長、腫瘤特異性差等問題，且對正常組織毒性較小以及不存在暗毒性，能夠保證正常組織免受損傷。另外，由于MOFs組分含有順磁性Ni2+，因此可作為磁共振成像試劑。

6 結(jié) 語

PDT由于具有高效性、低毒性、無創(chuàng)性在癌癥治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景，仍然面臨一些挑戰(zhàn)，比如如何提高缺氧環(huán)境中PDT的治療效果，解決腫瘤組織的缺氧問題是關(guān)鍵問題。Por-MOFs光敏劑的發(fā)展為增強(qiáng)PDT效果起到了一定的作用，通過調(diào)控Por-MOFs結(jié)構(gòu)性能實(shí)現(xiàn)高效的聯(lián)合診療在癌癥治療和抗癌藥物的遞送方面意義重大。比如，以NO供體為代表的氣體治療具有較小的毒性和副作用，優(yōu)異的生物相容性，聯(lián)合PDT以期對癌癥地診療研究有所突破。