徐倩南，姜磊，林源，李莉，劉希玲

1.四川大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610041；2.司法鑒定科學(xué)研究院 上海市法醫(yī)學(xué)重點實驗室 司法部司法鑒定重點實驗室 上海市司法鑒定專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺，上海200063

1 案 例

1.1 簡要案情

石某（被檢母）、陳某（被檢父）與孩子（男性，3 周歲）委托本院進行親子鑒定。

1.2 檢驗過程

1.2.1 首次檢驗結(jié)果及分析

按照《法庭科學(xué)DNA 實驗室檢驗規(guī)范》（GA/T 383—2014）抽提DNA，采用SiFaSTRTM23 plex 身份鑒定系統(tǒng)（司法鑒定科學(xué)研究院）進行復(fù)合PCR 擴增，用3130xl基因分析儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）進行毛細管電泳和基因型分析。結(jié)果顯示，D3S1358、D5S818、D2S1338等21 個STR 基因座均為人類的遺傳學(xué)標(biāo)記，遵循孟德爾遺傳定律，聯(lián)合應(yīng)用進行親權(quán)鑒定，累積非父（母）排除率大于0.999 9。

分型圖譜顯示，孩子每個STR 基因座上的等位基因均可由被檢母和被檢父提供。在Amelogenin基因座（圖1），被檢母檢出X 峰，被檢父同時檢出X 峰和Y峰，孩子僅檢出X 峰，缺乏男性樣本應(yīng)包含的Y 峰，孩子疑似缺失Y 染色體。除STR 基因座外，SiFaSTRTM23 plex 身份鑒定系統(tǒng)還包含一個Y 染色體插入缺失（Y chromosome insertion/deletion，Y-InDel）位點，在此位點被檢母和孩子均未出現(xiàn)分型結(jié)果（圖1），與Amelogenin基因座結(jié)果相符。

圖1 被檢母、孩子和被檢父在Amelogenin 基因座和Y-InDel位點的分型結(jié)果Fig.1 Genotyping results of Amelogenin and Y-InDel for alleged mother，child and alleged father

1.2.2 Y 染色體STR 基因座檢驗結(jié)果及分析

采用AmpF?STRTMYfilerTMPCR 擴增試劑盒（美國Applied Biosystems 公司）進行復(fù)合擴增，用3130xl基因分析儀進行毛細管電泳和基因型分析。檢驗結(jié)果顯示，被檢母和孩子無Y 染色體STR 基因座，被檢父則在各個Y 染色體STR 基因座上均有分型結(jié)果，支持首次檢驗中孩子Y 染色體缺失的假設(shè)。所得分型結(jié)果如表1 所示。

表1 被檢母、孩子和被檢父血樣Y 染色體STR 分型結(jié)果（AmpF?STRTM YfilerTM PCR 擴增試劑盒）Tab.1 Genotyping results of Y-STR from the blood samples for alleged mother，child and alleged father（AmpF?STRTM YfilerTM PCR Amplification Kit）

1.2.3 X 染色體STR 基因座檢驗結(jié)果及分析

進一步采用Goldeneye?DNA 身份鑒定系統(tǒng)17X［基點認知技術(shù)（北京）有限公司］進行復(fù)合擴增，用3130xl基因分析儀進行毛細管電泳和基因型分析。檢驗結(jié)果顯示，被檢母和被檢父符合女性樣本和男性樣本X 染色體STR 基因座分型結(jié)果的特征，即女性雜合子樣本顯示2 個等位基因峰，男性樣本則只顯現(xiàn)為1 個等位基因峰[1]。但孩子作為男性樣本卻呈現(xiàn)出了女性雜合子樣本分型結(jié)果的特征，且X 染色體STR 基因座上的等位基因均可由被檢母和被檢父提供。所得分型結(jié)果如表2 所示。

表2 被檢母、孩子和被檢父血樣X 染色體STR 分型結(jié)果（Goldeneye? DNA 身份鑒定系統(tǒng)17X）Tab.2 Genotyping results of X-STR from the blood samples for alleged mother，child and alleged father（Goldeneye? DNA ID 17X）

2 討論

Amelogenin基因座是目前法醫(yī)學(xué)常用的用于性別鑒定的基因座，理論上，正常男性個體在Amelogenin基因座上應(yīng)同時檢出X 峰和Y 峰，本例孩子社會性別為男性，但采用常染色體STR 分型試劑盒SiFaSTRTM23 plex 身份鑒定系統(tǒng)檢測后發(fā)現(xiàn)Amelogenin基因座Y 峰缺失。遇到此種情況時應(yīng)從多個方面考慮，如引物結(jié)合區(qū)突變導(dǎo)致等位基因擴增失敗、性反轉(zhuǎn)、染色體缺失等[2]?？紤]到Amelogenin基因座區(qū)域偶爾會發(fā)生基因變異或缺失導(dǎo)致Amelogenin基因座峰圖出現(xiàn)異常[1]，故采用AmpF?STRTMYfilerTMPCR 擴增試劑盒對各樣本的Y 染色體STR 基因座進行檢測，以辨別Amelogenin基因座峰圖錯誤，Y 染色體STR 基因座檢驗結(jié)果表明本案孩子Y 染色體缺失。為進一步確認本案例是否為性反轉(zhuǎn)案例，采用Goldeneye?DNA 身份鑒定系統(tǒng)17X 檢測各樣本的X染色體STR 基因座，結(jié)果顯示被檢母和被檢父X 染色體數(shù)目正常，社會性別為男性的孩子擁有2 條X 染色體。綜上所述，推測孩子的染色體核型為（46，XX），符合男性性反轉(zhuǎn)綜合征的遺傳學(xué)特征。

性反轉(zhuǎn)綜合征是一種罕見的性發(fā)育障礙。在生殖醫(yī)學(xué)、兒科學(xué)等領(lǐng)域多有報道[3-5]。1964 年，DELACHAPELLE 等[3]首次發(fā)現(xiàn)男性個體擁有2條X 染色體而缺乏Y染色體的病例。謝家倫等[5]也報道了4例（46，XX）男性性反轉(zhuǎn)綜合征的病例，指出（46，XX）男性大多數(shù)有正常男性外生殖器，早期診斷需根據(jù)具體情況做性染色體檢查及性腺探查活檢。在法醫(yī)學(xué)親子鑒定中，性反轉(zhuǎn)案例較少遇到[6-8]。本案例通過聯(lián)合應(yīng)用常染色體STR、Y染色體STR和X染色體STR 3種生物學(xué)遺傳標(biāo)記確定被檢孩子因存在性反轉(zhuǎn)現(xiàn)象，故常染色體試劑盒檢測Amelogenin基因座Y峰缺失。

親子鑒定案件量逐年增加，隨之而來的問題也越來越多，如染色體缺失、嵌合體以及腫瘤等各種原因?qū)е碌腄NA 分型異常會在親子鑒定過程被更多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合應(yīng)用多種檢測手段以及多種生物學(xué)遺傳標(biāo)記將有助于更精準(zhǔn)地得出鑒定意見，降低鑒定風(fēng)險。