梅小燕　黃靜　溫小云

[中圖分類號]R446.5 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）19-0205-02

布魯菌?。˙rucellosis）是由布魯菌Bru.ceZ入侵人體所誘發(fā)的一種多宿主感染的世界性人獸共患傳染病，常見與人類共同感染的動物類別包括牛、羊、豬等，其中，我國以羊感染為主。隨著布魯菌病人畜感染疫情在世界范圍內(nèi)發(fā)生率的提高，對于該疾病的檢測和控制也逐漸引起了廣泛的關注。國家疾病監(jiān)測系統(tǒng)的病例統(tǒng)計結(jié)果證實，我國人與人之間布魯菌病傳染病例有增加趨勢，其中以內(nèi)蒙古、東北和西北等地區(qū)流行趨勢最為嚴重，部分其他區(qū)域的布魯菌病報告病例也有所增加，同時，布魯菌病的臨床表現(xiàn)負責程度較高，臨床特征復雜多變，且病情輕重不一，會對感染主體多個系統(tǒng)造成直接的損害?？傮w來看，特征性布魯菌病病例已經(jīng)較為少見，因而該疾病的臨床診斷難度也逐漸增加，早期確診可能性逐漸降低?，F(xiàn)階段，布魯菌病的防控形勢逐漸嚴峻，以往的布魯菌或生物型鑒定的主要基礎是單項特異性血清（A、M和R血清）凝集試驗、堿性復紅染料抑菌試驗、噬菌體裂解、HS、CO的生長要求等，這也是布魯菌病鑒定診斷的金標準，但這些檢驗方法操作時間較長且較為復雜。隨著PCR檢測方法應用率的提高，其在BCSP31屬基因與AMOS種/型基因檢測中的應用率也有所提升，但過程較為復雜，容易受到操作條件的限制，因而應用價值較低。本研究對VITEK2Compact微生物自動鑒定儀對布魯氏菌誤鑒定的原因及局限性進行了分析。

1資料和方法

1.1菌株來源 本研究回顧分析2例無確切原因體溫異常升高患者的臨床資料，對其實施血培養(yǎng)菌株分離檢查。

1.2儀器與試劑 檢查設備：BD9240血培養(yǎng)儀和血培養(yǎng)瓶;480PCR擴增儀;VITEK2 Compact微生物鑒定儀;GN鑒定卡和試劑盒;TakaRa 16S rRNA Bacterial Identification PCR Kit 16S rRNA試劑盒。

1.3菌株分離鑒定 血培養(yǎng)檢測結(jié)果為陽性的標本置于5%羊血瓊脂平板上，通過恒溫箱進行處理，動態(tài)監(jiān)測其菌落生長形態(tài)和進度，通過革蘭染色法用VITEK2 Compact微生物鑒定儀上機鑒定。

1.416SrRNA檢測和測序 按流程實施16Sr RNA基因擴增，并對結(jié)果實施測序處理。

1.5統(tǒng)計學分析 文中數(shù)據(jù)借助版本為SPSS 22.0的軟件包進行統(tǒng)計分析。

2結(jié)果

2.1菌株2次重復鑒定過程和結(jié)果比較 16SrRNA檢測數(shù)據(jù)與細菌鑒定結(jié)果有所不同，完成首次菌株檢測后可再次實施微生物檢測和GN鑒定。數(shù)據(jù)差異比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。如表1所示。

2.2菌株樣本檢測指標結(jié)果比較 對菌株樣本分別使用國產(chǎn)機復合RBT、SAT和MRT抗原進行檢測，檢測結(jié)果符合率差異存在統(tǒng)計學意義（P<0.05）。如表2所示。

3討論

布魯菌病是一種牧區(qū)臨床常見疾病類型，且廣大城市和農(nóng)村地區(qū)，該疾病的發(fā)生率也呈現(xiàn)出上升趨勢，布魯菌病的臨床表現(xiàn)極為復雜，常見特征表現(xiàn)為間斷性發(fā)熱，而其他明顯癥狀和特征則較為少見，因而臨床上容易與其他發(fā)熱特征疾病相混淆，只有在患者感染標本中確定分理處布魯菌后才可以確診，而疾病的誤診和漏診也會給患者造成嚴重的不良后果。臨床上針對于布魯菌病，除了結(jié)合發(fā)熱癥狀進行診斷外，還會實施骨髓、血液、腦脊液、乳汁、尿液等檢查。從以往的臨床研究結(jié)果來看，針對于布魯菌病常見的誤鑒定原因在于：血培養(yǎng)分離凍存?zhèn)鞔暌约霸囵B(yǎng)細菌生長速度等特性的差異，造成部分生化反應速度差異，最終造成誤鑒定的結(jié)果，2次生化結(jié)果陽性數(shù)量存在差異能夠為這一判斷結(jié)果提供支持，另一方面，VITEK2鑒定儀GN卡使用的樣品量較少，因而容易影響結(jié)果和加樣讀數(shù)。更加值得關注的是，自動細菌鑒定儀無法在固定的時間獲得檢驗結(jié)果，這也是結(jié)果出現(xiàn)差異的一項主要影響因素，只要已檢測到的生化反應組合模式與數(shù)據(jù)庫中某種細菌編碼一致就會自動終止鑒定，獲得監(jiān)測結(jié)果，對于生長較為緩慢及生化反應模式相近的的細菌種類，誤鑒定概率較高。

醫(yī)學報道證實，約有25%的實驗室獲得性細菌性感染是由布魯氏菌所導致的，布魯氏菌能夠經(jīng)氣溶膠途徑的感染劑量為10～100個藺體。從以往的病例分析資料來看，未戴手套、口罩等不當操作是導致布魯菌感染的主要原因，盡管布魯菌病感染的具體作用機制尚未得到明確的分析，但從以往的研究結(jié)果來看，布魯氏菌的培養(yǎng)等操作應按照3級生物安全實驗操作的標志開展，首先對于疑似布魯菌病的患者，需要嚴格執(zhí)行這些操作規(guī)范，但是，從實際的臨床運行結(jié)果來看，全部的布魯菌病感染源都在于關節(jié)病變患者的培養(yǎng)物，外科醫(yī)生只有在患者的關節(jié)修復手術(shù)過程中，確定存在關節(jié)腔內(nèi)感染，并實施臨床標本培養(yǎng)檢查，才能夠確定出類似革蘭陰性菌的布魯菌。以往的布魯菌病患者的微生物實驗室檢驗結(jié)果均為被動檢驗，因而臨床上通常建議逐步完善細菌鑒系統(tǒng)生產(chǎn)廠家的系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫，在細菌鑒定過程中，對于人蒼白桿菌、解脲寡源桿菌、苯丙酮酸莫拉菌、支氣管敗血鮑特菌、動物潰瘍伯格菌、莫拉菌屬或流感嗜血什菌生物等部分菌種做出系統(tǒng)完善的報道，并在鑒定儀器系統(tǒng)中提示需與行魯氏菌鑒別，同時，在實施微生物實驗室檢驗過程中，檢驗人員需要采取更加安全有效的防護措施，以降低布魯氏菌感染所致的實驗室獲得性感染問題。

VITEK2 Compact微生物自動鑒定儀對布魯氏菌誤鑒定錯誤的原因分析：兩次鑒定數(shù)據(jù)結(jié)果證實，檢驗鑒定為馬耳他布魯氏菌中，僅有1例出現(xiàn)陽性生化反應，共表現(xiàn)出9種生化反應，而這也是兩次進行流程和方法完全相同鑒定為布魯氏菌實驗，但最紅陽性反應項目數(shù)量不相同的主要原因。Panagopoulos（加拿大）等人對四年中收治的4例蒙特利爾兒童進行了血培養(yǎng)霍氏鮑特菌分離實驗，結(jié)果亨氏，API20E、NE檢驗準確性不足，VITEK2 Compact微生物檢測結(jié)果可以確定為洛菲不動桿菌。臨床研究對VITEK2 CompactGN鑒定卡對1株玫瑰假單胞菌反復進行3次鑒定，結(jié)果證實，皮氏羅爾斯頓菌、支氣管炎鮑特菌等低鑒定度細菌。本研究結(jié)果說明鑒定結(jié)果存在一定的誤差，其原因在于：凍存?zhèn)鞔旰脱囵B(yǎng)分離原代培養(yǎng)細菌生長速度不同，造成鑒定結(jié)果的差異。另一方面，VITEK2 Compact微生物自動鑒定儀以及GN鑒定卡所涉及的樣品數(shù)量相對較少，因而樣本和結(jié)果的讀數(shù)也會會受到直接的影響。

綜上所述，VITEK2Compact微生物自動鑒定儀對于布魯氏菌鑒定存在一定的誤鑒定風險，需要對相關影響因素進行控制，提高檢測準確性。