丁瑋潔，夷 崢#，王梓蒙，石 巍，黃維綱△

1.上海市臨床檢驗中心，上海 200126，2.上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司，上海 201203

人絨毛膜促性腺激素(HCG)是一種可促進性腺發(fā)育的糖蛋白激素，主要由胎盤的合體滋養(yǎng)層細胞分泌，其分子結(jié)構(gòu)中包含α、β兩個非共價結(jié)合的亞基，α亞基由92個氨基酸構(gòu)成，β亞基由145個氨基酸構(gòu)成，其中α亞基與黃體生成素(LT)、促卵泡生成素(FSH)和促甲狀腺激素(TSH)同源，而β亞基則具有較高的特異性，在分析檢測中具有較大價值[1]。HCG對維持早期妊娠和胚胎發(fā)育有重要作用，是早期妊娠診斷和孕期監(jiān)控的常用指標，HCG水平的驟降或大幅波動可能預(yù)示著異常妊娠或先兆流產(chǎn)。此外，HCG的檢測在其他疾病診斷或篩查中的應(yīng)用也極為廣泛，如妊娠滋養(yǎng)層疾病(絨毛膜上皮癌等)的診斷和監(jiān)控、妊娠高血壓綜合征的預(yù)測、唐氏綜合征的產(chǎn)前篩查等[2-4]。對HCG的檢測，不同實驗室有不同的檢測系統(tǒng)。發(fā)展較快、應(yīng)用較廣的方法是對總β-HCG進行檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)[5]。免疫學(xué)分析是基于抗原抗體間特異性反應(yīng)而建立的檢驗方法。目前，免疫學(xué)分析主要包括酶聯(lián)免疫吸附測定法、時間分辨熒光免疫測定法、CLIA和免疫層析法等[6-7]。CLIA兼有化學(xué)發(fā)光分析的高靈敏度和免疫學(xué)分析的高特異性。CLIA的靈敏度高(一般達10-16～10-21mol/L)，線性范圍寬，樣品自身發(fā)光，背景干擾低，檢測結(jié)果精準可靠，但需要專業(yè)人員操作，設(shè)備及封閉的檢測體系無法適用于現(xiàn)場檢測[8]。Beckman Coulter Access 2 CLIA系統(tǒng)對總β-HCG的檢測屬于雙位點酶聯(lián)免疫吸附試驗(雙抗體夾心法)，采用堿性磷酸酶發(fā)光體系。膠體金試紙條檢測HCG具有簡便、快速且不需要儀器設(shè)備的優(yōu)點，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床尿液或者血清HCG的檢測[9]。本研究在常規(guī)膠體金定性評價尿HCG質(zhì)控品的基礎(chǔ)上，引入CLIA定量檢測質(zhì)控品HCG水平，以期達到準確監(jiān)控尿HCG質(zhì)控品穩(wěn)定性和均勻性的目的。

1 資料與方法

1.1儀器與試劑 采用Beckman Coulter Access 2 CLIA系統(tǒng)進行HCG定量檢測。尿HCG質(zhì)控品為上海市臨床檢驗中心下發(fā)的質(zhì)控品[上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司產(chǎn)品(批號：20290602、20290902)]；HCG定量檢測采用儀器配套試劑及定標品；尿HCG檢測試紙條為艾博生物醫(yī)藥(杭州)有限公司產(chǎn)品；HCG標準品購自上海安普實驗科技股份有限公司。

1.2方法

1.2.1HCG CLIA定量檢測方法的建立和使用 配制水平為0、30、60、150和200 mIU/mL的尿HCG標準溶液并采用全自動CLIA系統(tǒng)對上述標準溶液進行檢測，繪制標準曲線，建立HCG CLIA定量檢測方法。然后用建立的CLIA定量檢測方法對尿HCG質(zhì)控品中的HCG進行測定。

1.2.2尿HCG質(zhì)控品均勻性評價 取10瓶質(zhì)控品進行檢測，每瓶重復(fù)檢測2次。CLIA：對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。膠體金法：按試劑盒操作說明書操作，若檢測結(jié)果符合率為100%，則表明樣品均勻性符合要求。

1.2.3尿HCG質(zhì)控品開瓶穩(wěn)定性評價 分別于開瓶后1、2、3、5和7 d對尿HCG質(zhì)控品進行檢測，取3瓶質(zhì)控品，每個樣品重復(fù)檢測2次。CLIA：計算檢測結(jié)果的平均值，與原始水平平均值進行比較，若差值在3s內(nèi)，則認為樣品是穩(wěn)定的[10]。膠體金法：若檢測結(jié)果符合率為100%，則表明樣品是穩(wěn)定的。

1.2.4尿HCG質(zhì)控品儲存穩(wěn)定性評價 每月取6瓶尿HCG質(zhì)控品，每個樣品重復(fù)檢測2次。CLIA：計算檢測結(jié)果平均值，與原始平均值進行比較，若差值在3s內(nèi)，則認為質(zhì)控品是穩(wěn)定的。膠體金法：若檢測結(jié)果符合率為100%，則表明樣品是穩(wěn)定的。

2 結(jié) 果

2.1HCG CLIA定量檢測方法的建立 水平為0、30、60、150和200 mIU/mL的尿HCG標準溶液的檢測結(jié)果依次為(0.10±0.01)、(43.67±0.84)、(88.88±0.58)、(168.09±1.88)、(226.56±4.53)mIU/mL。通過線性擬合，得到線性回歸方程：Y=1.087 9X+9.724 1，R2=0.990 8，線性良好。

2.2尿HCG質(zhì)控品的均勻性 對2個批號(20290602、20290902)的尿HCG質(zhì)控品進行檢測。F臨界值F0.05(9,10)=3.02，根據(jù)化學(xué)放光法的定量檢測結(jié)果[分別為(98.22±1.89)、(118.8±3.01)mIU/mL]進行計算，F(xiàn)值分別為0.58和2.04，均小于F臨界值[F0.05(9,10)=3.02]，這表明尿HCG質(zhì)控品是均勻的。膠體金法檢測這2個批號尿HCG質(zhì)控品的結(jié)果均為陽性，結(jié)果符合率均為100%。

2.3尿HCG質(zhì)控品的穩(wěn)定性

2.3.2儲存穩(wěn)定性 儲存1、2、3、4、5個月時，CLIA檢測結(jié)果分別為(94.70±1.01)、(100.03±1.75)、(101.21±2.36)、(99.36±2.47)、(81.16±1.87)mIU/mL。儲存5個月時質(zhì)控品HCG水平已經(jīng)不在穩(wěn)定性范圍(92.55～103.89 mIU/mL)內(nèi)，表明該質(zhì)控品不穩(wěn)定；而采用膠體金法，檢測結(jié)果仍為100%的陽性，表明該質(zhì)控品仍是穩(wěn)定的，但與前4個月時的檢測結(jié)果相比，陽性條帶有減弱的趨勢。

3 討 論

臨床上常將HCG作為正常早期妊娠、異位妊娠、葡萄胎和絨毛膜癌等的診斷或鑒別診斷指標。若檢測結(jié)果為弱陽性，則提示臨床醫(yī)生應(yīng)進行復(fù)查，以避免漏檢或誤診。從質(zhì)量控制的角度而言，對尿HCG質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性進行評價是很有必要的。

本課題組首先采用Beckman Coulter Access 2 CLIA檢測系統(tǒng)對HCG標準溶液進行了檢測，根據(jù)檢測結(jié)果繪制了標準曲線，建立了尿HCG CLIA定量檢測方法，所得的線性回歸方程的線性擬合系數(shù)大于0.99，線性良好。然后，本課題組選用上海市臨床檢驗中心下發(fā)的室內(nèi)質(zhì)控品作為研究對象，采用膠體金法定性檢測和CLIA定量檢測評價了尿HCG質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性。本研究顯示：該質(zhì)控品均勻性符合要求；開瓶穩(wěn)定性符合要求；4個月內(nèi)兩種方法評估儲存穩(wěn)定性，結(jié)果均為穩(wěn)定；儲存5個月時，膠體金法評估的結(jié)果為穩(wěn)定，而CLIA評價結(jié)果為不穩(wěn)定。

在產(chǎn)品均勻性及開瓶穩(wěn)定性的評價中，CLIA和膠體金法評價的結(jié)果均一致。儲存4個月內(nèi)的穩(wěn)定性評價中，兩種方法的結(jié)果一致(本次研究的對象有效期為4個月);儲存5個月時的穩(wěn)定性評價中，兩種方法的結(jié)果不一致。采用CLIA評價質(zhì)控品時，檢測結(jié)果經(jīng)計算后已經(jīng)不在穩(wěn)定性的范圍內(nèi)，表明該批次的質(zhì)控品已經(jīng)失控，而膠體金法評價質(zhì)控品時，檢測結(jié)果仍為100%陽性，穩(wěn)定性符合要求。但是從實際的試紙條反應(yīng)來看，檢測結(jié)果與前4個月時的結(jié)果相比，陽性條帶有減弱的趨勢。

膠體金法和CLIA是臨床實驗室最常用的檢測方法，聯(lián)合采用這兩種方法進行檢測可有效降低結(jié)果中的假陽性[12]。通常HCG的檢測方法中膠體金免疫層析法較為常用，主要原因在于該方法操作簡便快速，在使用過程中不需要使用其他特殊設(shè)備或儀器，同時檢測標本便于儲存[13]。CLIA具有檢測靈敏度高、檢測值可定量、可實現(xiàn)自動化檢測的特點。在對尿HCG質(zhì)控品進行均勻性和穩(wěn)定性質(zhì)量控制時，CLIA可以更直觀地對結(jié)果進行判斷。在質(zhì)控品儲存時間臨近有效期時，CLIA檢測靈敏度高的優(yōu)勢更能體現(xiàn)，可以有效提高尿HCG室內(nèi)質(zhì)量控制的效果。