蔣玉林，毛 偉，劉不盡，張 濤，王棟芳，廖紅梅，鄒海曼

重慶市血液中心輸血研究所，重慶 400052

臨床上ABO血型正反定型不一致的常見原因有紅細(xì)胞抗原減弱和血清抗體減弱[1]。血清抗體減弱或缺失多見于新生兒、老年人、ABO亞型或免疫低下的患者。健康成年人缺乏相應(yīng)ABO抗體的情況比較罕見，機制尚不明確[2]，但在某些疾病或生理情況下會有抗體減弱或缺失，在這種情況下，ABO基因檢測就顯得尤其重要[3]。最近筆者發(fā)現(xiàn)1例因抗B抗體(抗-B)缺失導(dǎo)致ABO血型鑒定困難者，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1病歷資料 女性，28歲，因頸部包塊于某醫(yī)院耳鼻咽喉頜面腫瘤科就診，既往無輸血史。實驗室檢查：血紅蛋白(Hb)77 g/L，血小板(PLT)73×109/L,總蛋白(TP)38 g/L，清蛋白(ALB) 29 g/L,球蛋白(GLB)9 g/L。臨床輸血科發(fā)現(xiàn)ABO血型正、反定型不符，故送至本實驗室鑒定。

1.2試劑與儀器 單克隆抗A抗體(抗-A)、抗-B(上海血液生物醫(yī)藥有限公司)，凍干人源抗-A、抗-B血清、抗AB抗體(抗-AB)血清(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所)，A、B、O型試劑紅細(xì)胞(實驗室自制)，微柱凝膠卡(BioVue公司)、人類基因組DNA提取試劑盒(QIAGEN公司)，人類紅細(xì)胞ABO血型-B亞型基因分型試劑盒[PCR-序列特異性引物(SSP)法，天津秀鵬公司]，人類紅細(xì)胞ABO外顯子6-7血型基因測序試劑盒(江蘇中濟(jì)萬泰生物醫(yī)藥有限公司)、瓊脂糖凝膠(GENE公司)、0.5×TBE電泳緩沖液(自制)。所有試劑使用嚴(yán)格按照說明書操作。

KUBOTAKA2200型血型血清學(xué)專用離心機(日本久保田公司)、BioVue系統(tǒng)工作站(BioVue公司)、SiGMA 1-15型高速離心機(德國賽多利斯公司)、NANO-100型微量分光光度計(杭州奧盛公司)、ABI9700型PCR擴增儀(美國ABI公司)、PowerPac型電泳儀(Bio-Rad公司)、Fire Reader V10型凝膠成像系統(tǒng)(Uvitec公司)、3730型DNA遺傳分析儀(美國ABI公司)。

1.3血型血清學(xué)方法 ABO血型正、反定型采用鹽水法。檢出弱抗原或弱抗體時加做吸收放散試驗。

1.4PCR-SSP 嚴(yán)格按照人類紅細(xì)胞ABO血型-B亞型基因分型試劑盒(PCR-SSP法)說明書操作。

1.5ABO基因第6、7外顯子直接測序 嚴(yán)格按照人類紅細(xì)胞ABO外顯子6-7血型基因測序試劑盒說明書操作。使用SeqScape v2.7軟件進(jìn)行序列分析。

2 結(jié) 果

2.1血型血清學(xué)檢測 在室溫、4 ℃及血清加倍時，正定型顯示為A型，反定型為AB型。加做抗H抗體(抗-H)和人源抗-A、抗-B、抗-AB后，正定型仍為A型。ABO正反定型結(jié)果如下，正定型(單克隆抗血清)：抗-A 4+，抗-B 陰性，抗-H 1+,正定型(人源多克隆抗血清)：抗-A 4+，抗-B 陰性，抗-AB 4+，反定型：A1c、Bc、Oc、自身c均為陰性。

2.2吸收放散試驗 由上述血型血清學(xué)結(jié)果分析：正反定型不符的原因可能是B抗原或抗-B減弱。故用人源抗-B血清加做吸收放散試驗。吸收放散試驗結(jié)果：患者放散液陰性，Oc放散液(陰性對照)陰性，Bc放散液(陽性對照)4+。吸收放散試驗結(jié)果證實患者紅細(xì)胞不能吸收放散人源抗-B，表明患者紅細(xì)胞表面不含有B抗原，基本排除ABO亞型的可能性。

2.3ABO基因分型 采用人類紅細(xì)胞ABO血型-B亞型基因分型試劑盒(PCR-SSP法)檢測患者ABO基因分型，結(jié)果顯示患者ABO基因型為A/O。

2.4ABO基因第6、7外顯子直接測序 ABO基因第6-7外顯子測序結(jié)果檢測到第6外顯子第261號堿基鳥嘌呤(G)缺失，第7外顯子第467號堿基發(fā)生單個堿基替換(C>T)。因此，患者的測序結(jié)果為A102/O01。見圖1。

圖1 ABO基因第6、7外顯子直接測序

3 討 論

ABO血型系統(tǒng)的抗體屬于天然抗體。一般情況下，出生后3個月體內(nèi)可檢出抗-A、抗-B，然后效價逐漸增加，5～10歲達(dá)到成年人的水平[4]。健康成年人缺乏抗-A和抗-B是比較罕見的，約占萬分之一[5]。目前，抗-A、抗-B缺失的機制尚不明確，可能與生理、治療等有關(guān)[6]。在免疫抑制、腫瘤等疾病狀態(tài)下，患者體內(nèi)血清蛋白水平降低，抗體也相應(yīng)減弱[7]。

本例患者的血清學(xué)結(jié)果顯示:正定型時患者紅細(xì)胞與抗-A凝集，抗-B不凝集，反定型時患者血清與試劑紅細(xì)胞均不凝集，考慮患者B抗原減弱或抗-B缺失。通過吸收放散試驗表明患者沒有B抗原，排除ABO亞型的可能，提示抗-B缺失。有文獻(xiàn)報道PCR-SSP檢測可作為血型血清學(xué)方法的補充，有助于疑難血型的鑒定[8]，在本病例中，通過PCR-SSP檢測發(fā)現(xiàn)患者基因型為A/O，進(jìn)一步確定抗-B缺失。為進(jìn)一步確定此患者的ABO血型，筆者進(jìn)行了分子生物學(xué)試驗，通過ABO基因測序，確定其ABO基因為A102/O01。有文獻(xiàn)報道，A102等位基因與A101等位基因只是在467位發(fā)生了堿基替換(C>T)，兩者翻譯的糖基轉(zhuǎn)移酶活力無顯著差異[9]，本病例中也發(fā)現(xiàn)A抗原并無減弱。綜合血型血清學(xué)和分子生物學(xué)結(jié)果，筆者考慮此患者ABO血型為A型，抗-B缺失。有文獻(xiàn)報道，低蛋白血癥引起抗-B缺失，但隨著疾病的好轉(zhuǎn)，此種抗體水平會逐漸恢復(fù)[10]。本病例中，患者血清蛋白水平明顯降低，但未檢測IgM水平。也有文獻(xiàn)報道相似病例O型患者抗-B缺失，但其原因未知[4]。對于其抗-B缺失的原因本課題組后續(xù)將跟蹤檢查。

綜上所述，在ABO正反定型不符時，排除試劑、設(shè)備、輸血等影響因素后，最可能的就是ABO亞型或疾病因素引起的抗原抗體減弱?？赏ㄟ^紅細(xì)胞血型、吸收放散試驗排除ABO亞型的可能，以及采用基因分型、測序等分子生物學(xué)技術(shù)作為血型鑒定的補充，有助于血型的正確鑒定，保證臨床輸血安全。