謝忠海 沈琦斌 李冬 顧勤花

非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)分裂慢、擴(kuò)展轉(zhuǎn)移較晚，發(fā)病初期無(wú)明顯癥狀，通常確診時(shí)病情已進(jìn)展至中晚期，5 年生存率較低，預(yù)后差，嚴(yán)重威脅患者生命健康安全[1]。黑色素瘤抑制性活性蛋白（melanoma inhibitory active，MIA）最早通過(guò)純化處理，從HTZ-19 惡性黑色素瘤細(xì)胞清液中分離而成，其細(xì)胞分子結(jié)構(gòu)包含107 個(gè)疏水肽氨基酸及11 個(gè)KDA 蛋白質(zhì)，在腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[2]。MIA 蛋白表達(dá)和非小細(xì)胞肺癌的惡性增殖及侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性密切相關(guān)，能夠有效抑制肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和分化，阻斷腫瘤血管形成，進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡[3]?；诖?，本研究旨在觀察MIA 對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤臨床分期、組織分化程度的影響，以期為臨床治療方案的制定提供依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020 年5 月—2021 年5 月浙江省湖州市中心醫(yī)院住院治療的非小細(xì)胞肺癌患者86 例納入本次研究，其中男51 例，女35 例，年齡52～87（69.75±17.29）歲；TNM 分期[4]：Ⅲ期23 例，Ⅳ期26 例，Ⅱ期17 例，Ⅰ期20 例；Karnofsky 評(píng)分[5]：63～88（73.22±6.27）分；癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移：淋巴轉(zhuǎn)移35 例，血液轉(zhuǎn)移28 例，骨轉(zhuǎn)移12 例；組織分化：低分化42例，中分化31 例，高分化13 例。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)倫理學(xué)原則。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有入選患者全部通過(guò)影像學(xué)、手術(shù)病理檢查，符合中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)制定的《中國(guó)非小細(xì)胞肺癌免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療專(zhuān)家共識(shí)（2020 年版）》相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；（2）患者預(yù)計(jì)生存期＞3 個(gè)月，Karnofsky 評(píng)分＞60 分；（3）所有患者與其家屬對(duì)本研究全部知情，簽署同意確認(rèn)書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并肺部創(chuàng)傷性疾病、肺動(dòng)脈高壓、肺結(jié)核等肺部器質(zhì)性病變疾病；（2）合并肺血吸蟲(chóng)病、新型冠狀病毒性肺炎等肺部傳染性疾??；（3）惡性腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)、其他癌癥轉(zhuǎn)移及凝血功能障礙患者；（4）伴有嚴(yán)重精神分裂綜合征、語(yǔ)言和意識(shí)等基礎(chǔ)功能喪失及臨床資料不完整的患者。

1.3 方法

1.3.1 資料采集 制定《非小細(xì)胞肺癌患者基礎(chǔ)資料問(wèn)卷調(diào)查表》采集患者的性別（男、女），年齡（＜60歲、≥60 歲），臨床分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有、無(wú)）及組織分化程度（低分化、中分化、高分化）等資料。

1.3.2 MIA 檢測(cè) 采集非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)腫瘤細(xì)胞病理組織，石蠟包埋后采用EnVision 免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞及其癌旁組織MIA 表達(dá)，操作步驟全部嚴(yán)格參照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。MIA蛋白工作液濃度比為1∶150。

1.3.3 MIA 免疫組化染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 在顯微鏡下觀察癌細(xì)胞及其癌旁組織MIA 染色結(jié)果。細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)完好，且細(xì)胞中出現(xiàn)清晰棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性。分別采用顯色強(qiáng)度、顯色細(xì)胞比例進(jìn)行MIA 免疫組化染色結(jié)果判定，具體如下：（1）顯色強(qiáng)度：淺黃色：1 分，棕黃色：2 分，棕褐色：3 分；（2）顯色細(xì)胞比例：顯色細(xì)胞百分比＜5%：0 分；5%～25%顯色：1 分；＞25%～50%顯色：2 分；＞50%～75%顯色：3 分；顯色細(xì)胞比例＞75%：4 分?？偡?顯色強(qiáng)度計(jì)分×顯色細(xì)胞比例計(jì)分，總分判定標(biāo)準(zhǔn)：0 分：陰性（-）；1～4 分：弱陽(yáng)性（+）；5～8 分：陽(yáng)性（++）；9～12 分：強(qiáng)陽(yáng)性（+++）[7]。根據(jù)MIA 免疫組化染色結(jié)果分組：MIA 低表達(dá)組：弱陽(yáng)性，顯色細(xì)胞總分1～4 分；MIA 高表達(dá)：陽(yáng)性（++）或強(qiáng)陽(yáng)性（+++），顯色細(xì)胞總分5～12 分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0 軟件行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）描述，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例（%）描述，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌、癌旁細(xì)胞組織MIA 表達(dá) 非小細(xì)胞肺癌、癌旁細(xì)胞組織均有MIA 陽(yáng)性表達(dá)，其中非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞陽(yáng)性染色部分顯示為彌漫性分布，包膜胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃和棕褐色團(tuán)塊，細(xì)胞核內(nèi)無(wú)分布，癌旁細(xì)胞組織陽(yáng)性染色部分顯示淺黃色。見(jiàn)圖1。

圖1 非小細(xì)胞肺癌、癌旁組織MIA 免疫組化染色結(jié)果（×400）

2.2 MIA 表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床指標(biāo)的相關(guān)性非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞組織MIA 表達(dá)與患者性別、年齡無(wú)相關(guān)性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞組織內(nèi)MIA 表達(dá)和腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度存在密切相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 MIA 表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床指標(biāo)的相關(guān)性[例（%）]

2.3 不同腫瘤臨床分期細(xì)胞組織MIA 表達(dá)的比較Ⅲ～Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌、癌旁組織細(xì)胞MIA 表達(dá)均明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，且非小細(xì)胞肺癌MIA 表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同腫瘤臨床分期細(xì)胞組織MIA 表達(dá)的比較（pg/mg，）

表2 不同腫瘤臨床分期細(xì)胞組織MIA 表達(dá)的比較（pg/mg，）

注：MIA 為黑色素瘤抑制性活性蛋白；與同期癌旁組織比較，aP＜0.05

2.4 不同組織分化程度腫瘤細(xì)胞組織MIA 表達(dá)的比較 高分化非小細(xì)胞肺癌、癌旁組織細(xì)胞中MIA表達(dá)明顯高于中分化、低分化，且非小細(xì)胞肺癌MIA表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 不同組織分化程度非小細(xì)胞肺癌及癌旁細(xì)胞組織MIA表達(dá)的比較（pg/mg，）

表3 不同組織分化程度非小細(xì)胞肺癌及癌旁細(xì)胞組織MIA表達(dá)的比較（pg/mg，）

注：MIA 為黑色素瘤抑制性活性蛋白；與低分化比較，aP＜0.05；與中分化比較，bP＜0.05

3 討論

非小細(xì)胞肺癌是肺癌中最為常見(jiàn)的類(lèi)型，發(fā)病率占所有肺癌的80%以上，具有致病機(jī)制復(fù)雜、致死率高、預(yù)后差等特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅人們的生命健康安全[7]。MIA 作為一種新型的黑色素瘤抑制性活性蛋白，可對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的異常增殖和分化進(jìn)行有效抑制，極大削弱非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的軟瓊脂集落形成能力，從根本上降低非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞進(jìn)一步遷移、分化、侵襲能力[8]。

本研究結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌、癌旁細(xì)胞組織均有MIA 陽(yáng)性表達(dá)，其中非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞陽(yáng)性染色部分顯示為彌漫性分布，包膜胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃和棕褐色團(tuán)塊，細(xì)胞核內(nèi)無(wú)分布，癌旁細(xì)胞組織陽(yáng)性染色部分顯示淺黃色；說(shuō)明非小細(xì)胞肺癌的MIA陽(yáng)性表達(dá)明顯高于癌旁細(xì)胞組織，可以作為非小細(xì)胞肺癌與癌旁細(xì)胞組織的診斷標(biāo)志物，為臨床相關(guān)診療方案的制定提供參考，同Nencetti 等[9]研究結(jié)果相類(lèi)似。究其原因發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞腫瘤組織在生長(zhǎng)、增殖與分化的過(guò)程中，會(huì)大量分泌生成MIA，于正常細(xì)胞中對(duì)抗腫瘤形成，亦可幫助腫瘤細(xì)胞抵抗放化療產(chǎn)生的有毒、有害物質(zhì)堆積。抑制蛋白酶體活性，可抑制自身免疫疾病及癌癥的發(fā)展。非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的MIA 蛋白表達(dá)要高于癌旁細(xì)胞，抑制蛋白酶體的活性，進(jìn)而阻斷腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)降解，促使蛋白質(zhì)堆積，進(jìn)一步促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的凋亡[10]。

本研究結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞組織內(nèi)MIA 表達(dá)和腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度存在密切相關(guān)性（P＜0.05）；說(shuō)明非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度均可以直接影響患者體內(nèi)MIA 表達(dá)；同時(shí)，本研究還分析了MIA 與非小細(xì)胞肺癌組織的生長(zhǎng)、黏附具有關(guān)聯(lián)性，在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、增殖、分化過(guò)程中，和人體免疫反應(yīng)相互作用，共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；MIA 通過(guò)特異性阻斷肺癌組織細(xì)胞與纖連蛋白、層粘連蛋白結(jié)合，從根源上降低腫瘤細(xì)胞的活性，降低細(xì)胞組織分化能力。本研究結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌、癌旁組織細(xì)胞MIA 表達(dá)均明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，高分化非小細(xì)胞肺癌、癌旁組織細(xì)胞中MIA 表達(dá)高于中分化與低分化，且非小細(xì)胞肺癌MIA 表達(dá)高于癌旁組織；說(shuō)明可以通過(guò)增加MIA 表達(dá)，降低非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織分期和分化能力，阻斷腫瘤血管形成，促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而有利提高臨床治療效果。

綜上所述，MIA 能夠有效抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和分化能力，且與非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞組織分化密切相關(guān)。