韋朝俊 王 向 王 堯 劉大男

(貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，貴陽市 550004，電子郵箱：1528481469@qq.com)

原發(fā)性高血壓是多個微效基因和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，研究表明，CLCNKA基因多態(tài)性可增加機體水鈉潴留，參與原發(fā)性高血壓的發(fā)生與發(fā)展，是原發(fā)性高血壓重要的易感基因之一[1-3]，但目前關(guān)于CLCNKA基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓靶器官損害的相關(guān)性的研究仍較少。左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)和腎功能損害是原發(fā)性高血壓發(fā)生、發(fā)展的獨立危險因素，與原發(fā)性高血壓患者的預(yù)后密切相關(guān)[4]，明確基因與原發(fā)性高血壓靶器官損害的相關(guān)性有助于理解兩者間的相互作用機制。本研究探討CLCNKA基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者LVH及早期腎功能損害的相關(guān)性，為原發(fā)性高血壓患者靶器官損害的防治提供臨床思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月至2020年2月在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科門診及住院部診治的178例原發(fā)性高血壓患者作為研究對象，其中男性92例，女性86例，年齡23～81(60.0±13.0)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)原發(fā)性高血壓的診斷符合《中國高血壓防治指南(2018年修訂版)》[5]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg]，受試者測量血壓前1 d及測量當(dāng)天禁止飲用咖啡、濃茶、酒精及其他影響心臟自主神經(jīng)功能的藥物，避免劇烈活動及情緒波動；(2)臨床資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)繼發(fā)性高血壓患者；(2)合并其他影響心臟自主神經(jīng)、脈壓及血管順應(yīng)性疾病的患者；(3)腦卒中、腫瘤、肝腎衰竭及風(fēng)濕免疫系統(tǒng)等疾病患者。本研究經(jīng)中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院(這是一個全國多中心的臨床研究，采用的是項目批準(zhǔn)的倫理委員會信息)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料的收集：收集所有患者的性別、年齡、吸煙史(每天吸煙1支以上，連續(xù)或累計6個月)等一般資料，并進(jìn)行體格檢查，測定身高、體重、收縮壓和舒張壓，計算體質(zhì)指數(shù)；囑患者收集24 h尿液，采用放射免疫法檢測24 h尿微量白蛋白；采用酶比色法檢測患者的TG、TC、HDL-C、LDL-C、24 h尿鈉。

1.2.2 左心室質(zhì)量指數(shù)的檢測：由同一技術(shù)人員采用彩色多普勒超聲診斷儀測量患者的左心室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)、室間隔厚度(interventricular septum thickness,IVST)、左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall,LVPW)以及舒張期后壁厚度(posterior wall thickness,PWT)按照Devereux校正公式[6]計算左心室質(zhì)量(left ventricular mass,LVM)=0.8×10.4×[(IVST+PWT+LVEDD)3-LVEDD3]+0.6，體表面積(body surface area,BSA)=0.0061×身高+0.0128×體重-0.1529。左心室質(zhì)量指數(shù)(left ventricular mass index,LVMI)(g/m2)=LVM/BSA。LVH診斷標(biāo)準(zhǔn)：男性LVMI>115 g/m2，女性LVMI>95 g/m2。

1.2.3 DNA提?。菏褂糜杀本┮嫘蜥t(yī)療科技有限公司提供的一次性基因采樣盒(批號：1905G05)采集患者口腔頰黏膜脫落細(xì)胞，采用柱式質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒提取樣本DNA，置于-80℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 PCR擴增：使用DNAMAN 8.0設(shè)計引物，由北京益序醫(yī)療科技有限公司合成，上游引物：5′-ATGGAGGGCTGTGGGGGC-3′，下游引物：5′-GACGGCAAGAGCCTCTCC-3′。PCR試劑盒購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司(批號：Lot#S06FC021)，反應(yīng)體系為30 μL，由8 μL 16032 Panel Mix、10 μL 3XT酶、5 μL濃度為12 ng/μL的樣本DNA和7 μL的無酶水組成；反應(yīng)程序：95℃ 3 min;95℃ 30 s；60℃ 4 min,17個循環(huán)；72℃ 4 min；10℃保存。

1.2.5 基因型鑒定：PCR產(chǎn)物經(jīng)AMPure XP Beads純化，在Illumina X10高通量測序平臺進(jìn)行基因型診斷。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示，兩組間比較用t檢驗，多組間比較用單因素協(xié)方差分析；計數(shù)資料以例數(shù)表示，比較采用χ2檢驗；采用Logistic回歸模型分析檢驗指標(biāo)間的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 患者的一般資料 根據(jù)LVMI將患者分為非LVH組143例與LVH組35例，兩組患者的吸煙史、TG、TC、LDL-C、24 h尿鈉、收縮壓、舒張壓水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)；而相較于非LVH組患者，LVH組患者的女性比例更高、年齡更大、體質(zhì)指數(shù)更低、HDL-C水平更高、CLCNKA基因rs1805152位點AA基因型的比例更高(均P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料的比較

組別nLDL-C(x±s,mmol/L)24 h尿鈉(x±s,mmol/L)收縮壓(x±s,mmHg)舒張壓(x±s,mmHg)rs1805152位點基因型(n)GA/GG/AALVH組352.43±1.02128.43±59.43145.23±23.6881.11±22.548/2/25非LVH組1432.48±1.03136.24±67.34140.25±21.8883.50±13.5370/8/65 χ2/t值-0.125-0.6091.186-0.6017.589P值0.9010.543 0.2370.5510.006

2.2 CLCNKA基因rs1805152位點各個基因型間24 h尿微量白蛋白水平的比較 CLCNKA基因單核苷酸多態(tài)性rs1805152位點GA基因型78例，GG基因型10例，AA基因型90例，各個基因型間24 h尿微量白蛋白水平的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(H=6.482，P=0.039)，其中CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型的24 h尿微量白蛋白水平高于GA基因型與GG基因型(P<0.05)，見表2。

表2 不同CLCNKA基因rs1805152位點各個基因型原發(fā)性高血壓患者24 h尿微量白蛋白水平的比較[M(P25，P75)，mg]

2.3 Logistic回歸分析 以是否發(fā)生LVH為因變量(LVH=0，非LVH=1)，以性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、HDL-C水平和rs1805152基因型作為自變量(年齡、體質(zhì)指數(shù)以連續(xù)變量納入，其余變量的賦值見表3)，進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示：年齡升高與rs1805152 AA基因型為原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的獨立危險因素(均P<0.05)。見表4。

表3 變量賦值表

表4 原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的Logistic回歸分析

3 討 論

LVH是原發(fā)性高血壓性心臟損害的主要表現(xiàn)，目前原發(fā)性高血壓導(dǎo)致LVH的具體機制尚未完全清楚，既往研究表明，遺傳、肥胖、高齡、高鈉膳食及女性是原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的主要危險因素[7-9]。CLCNKA(rs1805152位點)基因?qū)儆贑LC基因家族的成員，是重要的鹽敏感基因之一，其參與CLCNKA氯離子通道的形成及氯化鈉進(jìn)出腎臟細(xì)胞的調(diào)節(jié)，與原發(fā)性高血壓的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切[10]。CLCNKA基因突變引起的慢性血容量擴張使個體具有罹患鹽敏感性原發(fā)性高血壓的傾向，有研究顯示CLCNKA通道可被纈沙坦、奧拉沙坦阻斷，從而起到降低血壓的作用[11]。有研究表明，CLCNKA基因多態(tài)性不僅與原發(fā)性高血壓的發(fā)生有密切聯(lián)系，而且與心力衰竭的發(fā)生有明顯相關(guān)性[12]。但是關(guān)于CLCNKA基因多態(tài)性是否與LVH的發(fā)生相關(guān)的研究較少。本研究結(jié)果顯示，相較于非LVH組患者，LVH組患者的女性比例更高、年齡更大、體質(zhì)指數(shù)更低、HDL-C水平更高，且CLCNKA rs1805152位點AA基因型的比例更高(均P<0.05)，推測rs1805152位點基因多態(tài)性可能與原發(fā)性高血壓合并LVH有關(guān)。同時，本研究Logistic回歸分析結(jié)果顯示，CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型是原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的獨立危險因素(P<0.05)，說明攜帶CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型的原發(fā)性高血壓患者較攜帶GA、GG基因型的患者發(fā)生LVH的可能性更大，但是目前遺傳因素導(dǎo)致LVH的具體機制仍不清楚。此外，本研究結(jié)果還顯示，高齡為原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的獨立危險因素(P<0.05)，與既往研究結(jié)果相似[13-14]，但是未顯示肥胖、性別、體質(zhì)指數(shù)對LVH的發(fā)生有影響，這與上述既往研究結(jié)果不一致，可能與不同研究的研究人群不同及種族差異、樣本量等因素有關(guān)。

原發(fā)性高血壓導(dǎo)致的早期腎功能損害指的是臨床蛋白尿出現(xiàn)之前的微小腎功能損害，既往研究提示微量白蛋白尿是早期腎功能損害的敏感指標(biāo)[15]。原發(fā)性高血壓鹽敏感者早期腎功能損害程度遠(yuǎn)高于非鹽敏感者[16]。本研究結(jié)果顯示，CLCNKA基因單核苷酸多態(tài)性rs1805152位點各個基因型間24 h尿微量白蛋白水平的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，其中CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型患者的24 h尿微量白蛋白水平高于GA基因型和GG基因型(P<0.05)，提示攜帶CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型的原發(fā)性高血壓患者發(fā)生早期腎功能損害的可能性更大。有研究表明，原發(fā)性高血壓患者中，LVH與尿微量白蛋白水平顯著相關(guān)，尿微量白蛋白水平可能是LVH的一個預(yù)測因子[17-19]。但是本研究未比較原發(fā)性高血壓合并與未合并LVH患者24 h尿微量白蛋白水平的差異，因此尿微量白蛋白水平對原發(fā)性高血壓患者LVH的影響還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，CLANKA基因多態(tài)性可能與原發(fā)性高血壓合并LVH及早期腎功能損害有關(guān)，其中rs1805152位點AA基因型患者可能更容易發(fā)生LVH和早期腎功能損害。但本研究存在一定局限性，如樣本量較小、檢測指標(biāo)較少等，研究結(jié)論還有待進(jìn)一步證實。