姚正鋼 陳勇毅

廣東省陽江市公共衛(wèi)生醫(yī)院感染內(nèi)科，廣東陽江529500

近年來，艾滋病合并結(jié)核病雙重感染率不斷攀升，大約有30%～40%的艾滋病患者因肺結(jié)核感染而失去生命。為保證在早期診斷中準(zhǔn)確診斷出艾滋病合并結(jié)核患者，為后續(xù)治療方案的制訂提供依據(jù)和參考，需要采用有效的檢測方法來提高診斷準(zhǔn)確率和效率。在現(xiàn)階段的臨床診斷和鑒別過程中，對結(jié)核感染的判別標(biāo)準(zhǔn)即結(jié)核菌培養(yǎng)[1]。但在實(shí)際檢測時，其陽性率較低，且耗費(fèi)時間長，不適用于艾滋病患者的診斷[2]。T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（T-SPOT.TB）是近年來發(fā)展較快、診斷效能較好的一種檢測方法，其利用結(jié)核菌特異性抗原作為刺激物，可對具有免疫功能缺陷的艾滋病患者進(jìn)行肺結(jié)核感染診斷[3-4]。為此，本研究主要分析T-SPOT.TB對艾滋病合并結(jié)核病患者的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年1月至2020年9月陽江市公共衛(wèi)生醫(yī)院感染科門診以及住院所收治的160例結(jié)核病患者。根據(jù)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查、病理學(xué)結(jié)果等進(jìn)行分組，艾滋病合并結(jié)核病患者作為研究組，結(jié)核患者作為對照組。其中研究組患者96例，男53例，女43例，平均年齡（45.24±7.8）歲。對照組患者64例，男31例，女33例，平均年齡（45.76±8.2）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)過免疫印跡法確診患者為HIV-1抗體陽性；②臨床癥狀符合結(jié)核病表現(xiàn)者；③處于初步診療階段者；④治療依從性較好者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有肝炎病毒感染或其他肝臟類疾病者；②有影響造血功能的血液系統(tǒng)疾病者；③中重度肝損傷及腎損傷者；④妊娠期或哺乳期婦女。該研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有入選患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

T-SPOT.TB檢測方法：采用廣東希格生物科技有限公司所提供的T-SPOT.TB試劑盒。抽取患者外周靜脈血5 ml，予肝素抗凝，在4 h后將外周血的單個核細(xì)胞進(jìn)行分離[5]。采用AIM-V培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，保障細(xì)胞濃度為適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)，一般為2.5×106/ml。然后在IFN-γ抗體微量板中分別加入50 μl法培養(yǎng)液、植物血凝素以及結(jié)合分歧桿菌特異抗原A、B，并在每個檢測孔中加入100 μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，再將微孔板放置在溫度為37℃、二氧化碳濃度為5%的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)20 h后，可將PSB溶液進(jìn)行洗脫，在每孔加入50 μl的酶標(biāo)記抗IFN-γ抗體，置于4℃環(huán)境下孵育1 h。將PBS溶液洗脫之后，可加入50 μl的底物顯色溶液，在室溫條件下孵育7 min左右，最后使用蒸餾水徹底將培養(yǎng)板進(jìn)行洗滌以終止反應(yīng)。通過統(tǒng)計(jì)每個檢測孔中具有顏色的斑點(diǎn)數(shù)[6-7]。如陰性對照孔點(diǎn)數(shù)＜6個，檢測孔的點(diǎn)數(shù)減去其點(diǎn)數(shù)的結(jié)果＞6個，則表示樣本檢測為陽性；如陰性對照孔點(diǎn)數(shù)≥6個，檢測孔的點(diǎn)數(shù)是其兩倍，則表示樣本檢測為陽性。

結(jié)核菌素測驗(yàn)（PPD試驗(yàn)）方法：PPD試驗(yàn)的判斷是在被測試患者的前臂尺側(cè)部位進(jìn)行皮內(nèi)注射，注射物為0.1 ml的結(jié)核菌素純蛋白衍生物（北京祥瑞生物制品有限公司，國藥準(zhǔn)字S10960017），72 h后對出現(xiàn)的局部皮丘硬結(jié)部分進(jìn)行直徑測量。當(dāng)硬結(jié)皮丘的均徑＜5 mm，判斷為陰性；均徑5～9 mm，判斷為一般陽性；均徑10～20 mm，判斷為中度陽性；均徑＞20 mm，或均徑＜20 mm，但存在水皰、壞死等現(xiàn)象，可判斷為強(qiáng)陽性[8]。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法和結(jié)核菌素測驗(yàn)結(jié)果對患者進(jìn)行診斷。比較T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)的陽性率，比較兩種方法的敏感性和特異性。觀察不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)水平的艾滋病合并肺結(jié)核患者T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)結(jié)核病檢測金標(biāo)準(zhǔn)，即采集患者呼吸道分泌物作為樣本，以檢出結(jié)核桿菌為病理檢測陽性。將a設(shè)置為真陽性、b為假陽性、c為假陰性、d為真陰性。敏感性=a/（a+c）×100%；特異性=d/（b+d）×100%；陽性預(yù)測值=a/（a+b）×100%；陰性預(yù)測值=d/（c+d）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件開展實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析工作，計(jì)量資料采用（）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)陽性率情況比較

兩組患者經(jīng)T-SPOT.TB、PPD檢測后，研究組患者中T-SPOT.TB陽性率為84.38%，對照組患者陽性率為68.75%，研究組陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)PPD試驗(yàn)后，兩組患者的陽性率分別為58.33%、62.50%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)陽性率情況比較

2.2 T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)診斷艾滋病合并結(jié)核病的價值評價

T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)檢測結(jié)果與病理結(jié)果情況見表2。根據(jù)公式計(jì)算T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值，T-SPOT.TB的敏感性為84.00%，明顯高于PPD試驗(yàn)的63.54%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；T-SPOT.TB的特異性為51.42%，高于PPD試驗(yàn)的50.00%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；T-SPOT.TB的陽性預(yù)測值為86.06%，高于PPD試驗(yàn)的65.59%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；T-SPOT.TB的陰性預(yù)測值為47.37%，低于PPD試驗(yàn)的47.76%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表2 T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)檢測結(jié)果與病理結(jié)果情況

表3 T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)診斷艾滋病合并結(jié)核的價值評價情況（%）

2.3 不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的艾滋病合并結(jié)核病患者T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)陽性情況

研究組96例患者中，CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥200個/μl患者的T-SPOT.TB陽性率為54.32%，PPD檢測陽性率為51.79%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)＜200個/μl患者的T-SPOT.TB陽性率為45.68%，PPD檢測陽性率為48.21%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。比較T-SPOT.TB與PDD試驗(yàn)在CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥200個/μl以及CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)＜200個/μl患者中的陽性率，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的艾滋病合并結(jié)核病患者T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)陽性情況[n（%）]

3 討論

結(jié)核感染是艾滋病患者常見的感染種類，是導(dǎo)致患者病死的重要原因，所以準(zhǔn)確診斷艾滋病合并結(jié)核病，并制訂有效的治療方案是必要的，有利于改善患者的預(yù)后情況[9-10]。目前因艾滋病合并結(jié)核病缺乏比較典型的影像學(xué)表現(xiàn)，同時痰細(xì)菌的陽性率較低，在診斷中極容易出現(xiàn)漏診或者誤診[11]。即便對艾滋病合并結(jié)核病患者進(jìn)行PPD試驗(yàn)作為參考，但還是具有很高的假陽性率[12-13]。并且艾滋病患者本身的機(jī)體免疫功能缺陷不利于準(zhǔn)確、有效的檢出結(jié)合感染陽性患者。而T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法是近年來檢測結(jié)核感染的一種有效技術(shù)[14]，對其T淋巴細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行檢測，可以準(zhǔn)確判斷檢測樣本是否感染結(jié)核分歧桿菌，原理是利用人體感染結(jié)核分歧桿菌所產(chǎn)生的記憶性T淋巴細(xì)胞，促使其受到結(jié)核分歧桿菌相關(guān)抗原的刺激，此時T淋巴細(xì)胞會迅速增殖并分泌出INF-γ[15-16]。

本研究中，根據(jù)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查、病理學(xué)結(jié)果等，基于診斷標(biāo)準(zhǔn)，將結(jié)核患者作為對照組、將艾滋病合并結(jié)核病患者作為研究組。同時進(jìn)行T-SPOT.TB和PPD試驗(yàn)，并按照不同分層分組對兩種診斷技術(shù)的陽性率進(jìn)行比較。其將T-SPOT.TB檢測技術(shù)應(yīng)用在艾滋病合并結(jié)核病的診斷，并與傳統(tǒng)的PPD實(shí)驗(yàn)進(jìn)行診斷價值比較。相關(guān)研究結(jié)果顯示，采用單獨(dú)的特異性混合多肽早期分泌性抗原靶（ESAT-6）誘導(dǎo)的IFN-γ反應(yīng)，在艾滋病合并結(jié)核病患者中的敏感性可達(dá)54%～76%，而T-SPOT.TB檢測技術(shù)的敏感性可達(dá)84.00%。在本研究中，T-SPOT.TB檢測艾滋病合并結(jié)核病患者的陽性率為84.38%，PPD試驗(yàn)陽性率為58.33%。提示在檢測有效性方面，T-SPOT.TB優(yōu)勢更為顯著。同時在T-SPOT.TB、PPD試驗(yàn)診斷艾滋病合并結(jié)核病價值比較方面，T-SPOT.TB在敏感性以及陽性預(yù)測值方面均高于PPD試驗(yàn)，提示T-SPOT.TB的診斷效率較高，且不受機(jī)體免疫抑制以及分枝桿菌感染條件的影響。在PPD試驗(yàn)中，研究組陽性率與對照組雖存在差異但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明試驗(yàn)本身可能存在假陽性，應(yīng)當(dāng)對肺外結(jié)核、潛在性結(jié)核感染等因素進(jìn)行排除。對研究組的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)水平進(jìn)行觀察，不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)水平的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，原因可能是CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較低的雙重感染者因細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重受損。因此，T-SPOT.TB具有相對較高的診斷效能。

綜上所述，T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法對艾滋病合并結(jié)核病患者具有更高的臨床診斷價值，值得推廣。