徐晏玲，艾禾，漆丹平

1.成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，四川 成都 610200；2.成都市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院科教部，四川 成都 610041；3.成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610200

糖尿病是臨床常見(jiàn)疾病，腎損傷是糖尿病患者最重要的合并癥，也是導(dǎo)致患者進(jìn)展為終末期腎臟病的主要因素之一[1-2]。研究表明，糖尿病患者一旦進(jìn)展至終末期腎臟病，會(huì)由于機(jī)體代謝紊亂，在治療上比其他腎臟疾病的治療更加困難，因此2型糖尿病腎病患者早期確診治療對(duì)提高患者生存率，延緩疾病進(jìn)展有著重要意義[3]。目前有研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病患者疾病的發(fā)生與進(jìn)展與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等存在一定聯(lián)系，而血清同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(Cys C)、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)與機(jī)體氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)有關(guān)，并且尿足細(xì)胞是腎小球?yàn)V過(guò)屏障的主要組成細(xì)胞，因此對(duì)Hcy、Cys C、RBP以及尿足細(xì)胞的檢測(cè)有助于判斷患者病情進(jìn)展情況，具有重要臨床診斷價(jià)值。本文旨在進(jìn)一步探討Hcy、Cys C、RBP及尿足細(xì)胞聯(lián)合檢測(cè)對(duì)2型糖尿病腎病早期診斷的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院2019年1月至2020年8月間收治的2型糖尿病腎病早期患者58例作為A組，同時(shí)選取我院收治的58例單純糖尿病患者作為B組，糖尿病患者均符合1999年WHO指定的2型糖尿病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除合并急慢性腎炎、尿路感染、原發(fā)性高血壓等疾病者。選取同時(shí)期在醫(yī)院體檢的健康者58例作為C組。A組中男性31例，女性27例；年齡36～78歲，平均(58.3±9.5)歲；病程3～13年，平均(7.2±1.9)年。B組中男性35例，女性23例；年齡36～79歲，平均(58.5±9.2)歲；病程3～12年，平均(7.4±1.8)年。C組中男性33例，女性25例；年齡36～78歲，平均(58.9±9.4)歲。三組受檢者的性別、年齡比較和A組和B組患者的病程比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受檢均知情并簽署知情同意書。

1.2 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

1.2.1 血清Hcy、CysC水平 清晨采集所有受檢者空腹靜脈血5 mL，置于肝素鋰抗凝管中，常溫下采用離心機(jī)以3 000 r/min的速度離心分離10 min，取上層清液置于-70℃冰箱內(nèi)保存，待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患者血清Hcy、CysC水平，檢測(cè)儀器為貝克曼AU5800全自動(dòng)生化分析儀，Hcy檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京九強(qiáng)公司，CysC試劑盒購(gòu)自上海藍(lán)怡公司，所有操作均按說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.2 尿RBP、尿足細(xì)胞 取患者以及健康體檢者新鮮晨尿兩份，離心分離5 min，棄上層清液，沉渣采用PBS清洗3次，加入1 mL PBS重懸，然后加入PE標(biāo)記鼠抗人足盂蛋白單克隆熒光抗體50μL，于4℃環(huán)境下孵育45 min，采用離心機(jī)離心分離5 min，分離完成后采用PBS清洗3次，沉渣中加入2 mL PBS重懸后轉(zhuǎn)移至BD絕對(duì)計(jì)數(shù)管，置于振蕩器上充分混勻后采用美國(guó)BD公司生產(chǎn)BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。絕對(duì)細(xì)胞數(shù)=(熒光標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)×已知熒光小球總數(shù)×稀釋背書)/(熒光小球計(jì)數(shù)×樣本總體積)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較應(yīng)用q檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，使用受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic，ROC)分析各指標(biāo)診斷價(jià)值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者的各項(xiàng)指標(biāo)比較 A組患者的血清Hcy、CysC、RBP和尿足細(xì)胞水平明顯高于B組及C組，而B組患者的上述各項(xiàng)指標(biāo)又明顯高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0.5)，見(jiàn)表1。

表1 三組受檢者的各項(xiàng)指標(biāo)比較(±s)

表1 三組受檢者的各項(xiàng)指標(biāo)比較(±s)

注：與A組比較，a P<0.05；與B組比較，b P<0.05。

尿足細(xì)胞(個(gè)/μL)2.8±0.8 2.3±0.6a 0.7±0.1b 207.31<0.01組別A組B組C組F值P值例數(shù)58 58 58 Hcy(μmol/L)21.2±3.5 19.7±2.8a 7.7±1.9b 401.96<0.01 CysC(mg/L)1.8±0.3 1.5±0.2a 0.7±0.1b 401.86<0.01 RBP(mg/L)3.1±0.7 2.6±0.5a 0.8±0.1b 339.49<0.01

2.2 各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)2型糖尿病腎病的早期診斷價(jià)值 將A組和B組進(jìn)行研究，以腎小球?yàn)V過(guò)率<90 mL/min作為2型糖尿病腎病診斷切點(diǎn)，ROC分析顯示血清Hcy、CysC、RBP以及尿足細(xì)胞診斷最佳切點(diǎn)分別為20.81μmol/L、1.75 mg/L、2.91 mg/L以及2.73個(gè)/μL，各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)敏感性血清CysC>RBP>尿足細(xì)胞>Hcy，并且四者聯(lián)合檢測(cè)可顯著提高診斷敏感性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2和圖1。

表2 各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)2型糖尿病腎病早期診斷價(jià)值(%)

圖1 各項(xiàng)指標(biāo)診斷2型糖尿病腎病的ROC曲線

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病中最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥，近年來(lái)呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)[4-5]。糖尿病腎病可分為早期糖尿病腎病、臨床期糖尿病腎病和晚期糖尿病腎病。部分早期糖尿病腎病患者經(jīng)治療后可恢復(fù)正常，近一半的患者在治療后病情不會(huì)進(jìn)展，會(huì)停留在微量蛋白尿階段[6-7]。因此，早期診斷糖尿病腎病并采取積極治療，是提高生存質(zhì)量，改善預(yù)后的重要手段。

Hcy是人體內(nèi)含硫氨基酸的重要中間代謝產(chǎn)物之一，可損傷患者的血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞增生，影響到患者腎小球基底膜功能。相關(guān)研究表明，早期2型糖尿病腎病患者由于糖脂代謝異常，Hcy生成過(guò)多，自由基生成而出現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷。腎功能受損后，腎臟清除Hcy的能力也會(huì)下降，Hcy甲基化能力降低以及含硫氨基酸的代謝均為患者體內(nèi)Hcy水平升高的原因[8-10]。本研究顯示，2型糖尿病腎病患者血清Hcy水平均明顯高于單純糖尿病患者及正常人群。

CysC是有核細(xì)胞產(chǎn)生的一種低分子量蛋白，正常情況下會(huì)在經(jīng)腎小球過(guò)濾后會(huì)被腎小管上皮細(xì)胞吸收。CysC對(duì)腎小球以及腎小管損傷的評(píng)估有重要診斷意義。2型糖尿病腎病患者在正常蛋白尿階段，CysC水平即升高，標(biāo)志患者出現(xiàn)腎損傷[11-13]。RBP作為一種低分子量蛋白質(zhì)，正常情況下將視黃醇從肝臟運(yùn)轉(zhuǎn)到上皮細(xì)胞，隨著人尿液排出的量極少，當(dāng)患者肝臟出現(xiàn)損傷后，游離的RBP不會(huì)被腎小球?yàn)V過(guò)被近曲小管吸收分解，而是隨尿液排出。足細(xì)胞作為腎小球?yàn)V過(guò)屏障的重要組成部分，在對(duì)大分子的濾過(guò)的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，當(dāng)2型糖尿病早期患者出現(xiàn)微量白蛋白尿階段時(shí)，足細(xì)胞脫落功能受損，密度降低，因此在尿液中可檢測(cè)到大量蛋白質(zhì)[14-15]。

上述各項(xiàng)指標(biāo)能夠從不同角度體現(xiàn)糖尿病腎病患者的病情程度，多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能夠顯著提高糖尿病腎病的診斷準(zhǔn)確率，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)患者病情確診有著重要意義，可作為糖尿病患者預(yù)防以及動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的可靠指標(biāo)。本研究顯示，血清Hcy檢測(cè)的陽(yáng)性率為60.3%，CysC為79.3%，RBP為87.5%，尿足細(xì)胞為74.1%，四者聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為94.8%，四者聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率高于單一指標(biāo)檢測(cè)。這是由于患者尿微量白蛋白的排除量以及血清胱抑素C、尿視黃醇結(jié)合蛋白水平均隨著患者糖尿病腎病的進(jìn)展呈現(xiàn)出明顯增加的趨勢(shì)。而尿液中足細(xì)胞水平的升高提示患者腎小球發(fā)生病變，當(dāng)患者為微量白蛋白尿時(shí)，腎臟足細(xì)胞的密度明顯降低，一旦進(jìn)展為大量蛋白尿時(shí)，腎臟足細(xì)胞密度降低更為明顯，因此尿足細(xì)胞的數(shù)量測(cè)定對(duì)2型糖尿病患者早期腎病的預(yù)測(cè)具有重要的臨床意義[16-18]。

綜上所述，2型糖尿病患者在出現(xiàn)腎損傷時(shí)，血清Hcy、CysC、RBP及尿足細(xì)胞水平明顯升高，因此四者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)患者早期診斷有著重要意義。