覃家碩，羅家玉，龐華全，盧能源，鄭 洋，龍春莉，趙鐵建

（1.廣西中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，廣西 南寧 530200；2.廣西中醫(yī)藥大學賽恩斯新醫(yī)藥學院，廣西 南寧 530222）

肝纖維化是機體對于酒精、藥物、毒物、肝炎病毒等因素引起長期肝損害而產(chǎn)生的傷口修復過程［1］。肝星狀細胞（hepatic stellate cells，HSC）是肝臟細胞的主要類型之一，約占肝臟細胞總數(shù)的5%~10%［2］。肝臟發(fā)生纖維化時，眾多的炎癥因子，如轉化生長因子 β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、磷脂酰肌醇 3-激酶（phosphatidylinositol 3 ki?nase，PI3K）、細胞外信號調節(jié)激酶1（extracellular sig?nal-regulated protein kinases 1，ERK1）等會通過相關的細胞信號通路不斷地誘導HSC，以令其激發(fā)為成纖維細胞，進而過量分泌細胞外基質（extracellular matrix，ECM）以作為肝纖維化的顯著特征［3］。中醫(yī)的臟腑學說認為，肝主藏血、疏泄與升發(fā)，肝纖維化屬“積聚”“黃疸”“脅痛”等范疇，其發(fā)生、發(fā)展、變化的機理為正虛血瘀［4］。

丹參為唇形科（Labiatae）鼠尾草屬（Salvia）藥用植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根莖及干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品［5-6］。丹參性微寒、味苦，入心、肝二經(jīng)，有活血通絡、止痛祛瘀、安神除煩、涼血消腫之功效，臨床上常作為活血化瘀類藥物用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、臟器纖維化以及腫瘤等的治療［7-8］。研究表明，丹參含有丹參酮類、丹酚酸類、內酯類、黃酮類以及含氮化合物等多種化學成分［6］，在抗肝纖維方面，主要以丹參酮類和丹酚酸類為主。丹參酮類為二萜類化合物，主要包括丹參酚、丹參酮ⅡA（Tan ⅡA）、紫丹參萜醚、異隱丹參酮等，具有抗炎抗菌、抗肝纖維化、抗腫瘤以及保護心血管等藥理學作用［9］。丹酚酸類為苯丙酸類化合物，主要包括丹酚酸B（SalB）、丹參素、丹酚酸A（SalA）、咖啡酸等，具有抗氧化、保肝護腦、抗炎等作用［10］。本文就丹參的有效化學成分在逆轉肝纖維化的相關調控作用機制的研究進展綜述如下。

1 Tan ⅡA的抗肝纖維化作用機制

Tan ⅡA 又稱丹參酮ⅡA，為桔紅色的針形結晶體。其分子式為C19H18O3，分子量為294.33，于水中微溶，于氯仿、乙醇、丙酮等有機溶劑中易溶。張彩華等［11］研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠肝纖維化模型中，Tan ⅡA可通過促進骨形態(tài)發(fā)生蛋白7（bone morphogenetic protein，BMP-7）和Smad6，Smad7 蛋白的表達來抑制TGF-β1/Smads 信號通路的激活，進而抑制肝纖維化。YING 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，Tan ⅡA 可有效地降低肝臟的氧化應激程度和肝細胞的凋亡速度，改善肝臟功能。SHI 等［13］研究發(fā)現(xiàn)，Tan ⅡA 可通過抑制HSC增殖并下調HSC 中的Ⅰ型膠原蛋白α2（collagen Type Ⅰ Alpha 2，COL1A2）和α-平滑肌肌動蛋白（αsmooth muscle actin，α-SMA）的表達來阻礙LX-2 人HSC 的激活。YANG 等［14］研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠肝硬化模型中，Tan ⅡA 能提高卵圓形細胞標記物6（oval cell marker-6，OV-6）、上皮細胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule，EPCAM）和角蛋白18（cytoker?atin 18，CK-18）的蛋白表達水平，并可通過促進內源性干細胞增殖及分化來減少ECM 的分泌量，達到改善肝硬化的治療目的。由此看來，Tan ⅡA 可通過靶向Smad6/7 蛋白、HSC 以及內源性干細胞來制止肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。

2 SalA的抗肝纖維化作用機制

SalA 亦稱丹酚酸A，為淡黃色結晶。其分子式為C26H22O10，相對分子量為494.45，可溶于水，亦溶于乙醚、乙醇等有機溶劑。吳雄健等［15］研究發(fā)現(xiàn)，SalA 可通過下調肝纖維化大鼠體內Smad3 蛋白和TGF-β1的表達來阻礙TGF-β1/Smad 信號通路的激活，進而減少α-SMA 的合成，抑制肝纖維化。此外，SalA 還可通過抑制基質金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）和肌鈣蛋白Ⅰ（troponin Ⅰ，TnⅠ）的表達來激活肝纖維化大鼠的Wnt/β-catenin 信號通路，從而達到抗肝纖維化的作用［16］。另外，WANG 等［17］研究發(fā)現(xiàn)，在CCl4誘導的肝纖維化大鼠模型中，SalA 可通過阻止磷酸肌醇3激酶（phosphoinositol 3 kinase，PI3K）/蛋白激酶 B（protein kinase B，AKT）/哺乳動物靶點（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號級聯(lián)的激活來減少α-SMA、HYP 蛋白的合成和增加Bcl-2 基因的表達，進而遏制靜態(tài)HSC 的活化和ECM 的生物合成，延緩肝臟的纖維化程度。提示SalA 可通過靶向TGF-β1、Smad3、TIMP-1、TnⅠ以及PI3K/AKT/mTOR 信號級聯(lián)來發(fā)揮抗肝纖維化效果。

3 SalB的抗肝纖維化作用機制

SalB 亦稱紫草酸B 或丹酚酸B，為淡黃色粉末。其相對分子量為718.61，分子式為C36H30O16，可溶于水，亦溶于乙醇、甲醇等有機溶劑。闞悅等［18］研究發(fā)現(xiàn)，SalB 能顯著促進二乙基亞硝胺刺激的纖維化小鼠病變肝組織區(qū)域內的細胞凋亡和TGF-β1誘導激活的HSC-T6 的凋亡；究其凋亡機制，可能為SalB增加了Cleaved Caspase-9 蛋白的合成量，加速了相關肝纖維化細胞的凋亡進程。王育紅等［19］研究證實，SalB 可顯著增加CCl4刺激的纖維化大鼠肝組織內谷胱甘肽（glutathione，GSH）的含量和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性，并降低肝組織丙二醛（malondialdehyde，MDA）的水平，提示SalB 可通過促進小鼠體內抗氧化酶的合成，清除自由基并減少脂質過氧化主產(chǎn)物MDA 的產(chǎn)生，進而改善CCl4引起的氧化損傷。此外，SalB 還可通過降低小鼠肝臟內TGF-β1的含量來阻斷TGF-β1為樞紐的促肝纖維化信號級聯(lián)，進而遏制靜態(tài)HSC 活化和減少肝臟內的膠原積聚，遏制肝纖維化［19］。另外，ZHANG 等［20］研究指出，SalB 可通過降低人 HSC 內的TGF-β1信號下游的轉錄因子肌細胞增強因子2（myocyte enhancer factor 2，MEF2）的表達來遏制TGF-β1誘導的MEF2 信號通路的激活，進而抑制HSC 活化，延緩肝臟的纖維化程度。由此來看，SalB可通過靶向 Cleaved Caspase-9、TGF-β1以及 MEF2來減輕肝臟的纖維化程度。

4 丹參素的抗肝纖維化作用機制

丹參素亦稱月丹參酸甲，為白色的長針形結晶體。其相對分子量為198.17，分子式為C9H10O5，可溶于水，亦溶于乙醇、甲醇等有機溶劑。王蓉等［21］研究發(fā)現(xiàn)，丹參素可通過調控核因子紅系2 相關因子 2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）/血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）信號通路來上調SOD和GSH-Px水平，同時下調MDA水平，進而抑制氧化應激。此外，丹參素還可通過調控轉錄因子核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）信號通路，抑制TGF-β，環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）等炎癥因子的表達，從而延緩肝纖維化進程。另外，咼琳琳等［22］研究指出，丹參素可顯著制止血小板衍生的生長因子-BB（platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB）激發(fā)的 HSC 增殖和削弱HSC 對Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成分泌能力；究其機制，可能為丹參素阻遏了HSC內細胞外信號調節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK1/2）、AKT 蛋白的磷酸化，進而抑制了ERK1/2 和PI3K 信號通路的激活，延緩了肝臟的纖維化程度。彭汝琴等［23］研究指出，丹參素可在增加 Bax、Cleaved Cas?pase 3 蛋白表達的同時降低Bcl-2 蛋白及總Caspase 3 的表達，進而抑制HSC 的激活并促使其凋亡。此外，丹參素還可通過下調肝組織中磷酸化-絲裂原活化的蛋白激酶激酶（phosphorylated mitogen activated protein kinase kinase，p-MEK）、磷酸化-細胞外信號調節(jié)激酶（phosphorylated extracellular signal regulat?ed protein kinase，p-ERK）蛋白的表達來制止MEK/ERK 信號通路的激活，達到抗肝纖維化的效果［23］。另外，唐靜等［24］研究發(fā)現(xiàn)，在 TGF-β1誘導激活的HSC 中，丹參素可通過增加Smad7 蛋白的合成分泌和遏制Smad2/3 蛋白的磷酸化來阻礙TGF-β1/Smad信號通路的激活，進而降低細胞內Ⅰ、Ⅲ型膠原和α-SMA 的合成量，遏制肝纖維化。由此來看，丹參素可通過抑制MEK/ERK、NF-κB、PI3K/AKT、Nrf2/HO-1、ERK1/2 以及 TGF-β1/Smad 信號通路的激活來延緩肝纖維化的進一步發(fā)展。

5 丹參單體IH764-3的抗肝纖維化作用機制

丹參單體IH764-3 是丹參中的低分子化合物，其分子量約為158，可溶于水。房澍名等［25］研究證實，丹參單體IH764-3 可通過遏制ERK1 及其mRNA的表達來制止HSC 增殖并刺激其衰老凋亡；IH764-3 抑制 ERK1 及其 mRNA 的表達與其對 HSC 凋亡的促進作用相一致，并表現(xiàn)出了明顯的劑量依賴關系。劉麗等［26］研究指出，在肝硬化大鼠體內分離出的活化HSC 中，丹參單體IH764-3 可通過下調粘著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）的表達來抑制金屬蛋白酶 1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1）mRNA 的表達，進而弱化TIMP-1 對基質金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）的抑制作用，促進HSC 內Ⅰ、Ⅲ型膠原的降解。王春生等［27］研究發(fā)現(xiàn)，丹參單體 IH764-3 可通過下調TIMP-2 和上調膜型1 基質金屬蛋白酶（membranetype 1 matrix metalloproteinase，MT1-MMP）、MMP-2的表達來促進總膠原的降解，并遏制其合成，進而延緩肝纖維化進程。提示丹參單體IH764-3 可通過靶向 ERK1、FAK、TIMP-2、MT1-MMP 以及 MMP-2 來發(fā)揮抗肝纖維化作用。

綜上所述，丹參具有多成分、多靶標、多途徑的抗肝纖維化作用特點，其多種有效成分可通過靶向多種細胞蛋白酶和信號轉導通路來調控促纖維化因子的分泌、肝星狀細胞的衰老活化和膠原蛋白的降解合成，進而間接調控肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。其中含括Smad2/3/6/7、TGF-β1、ERK1、TIMP-1/2、cleaved caspase-3/9 蛋白和 Nrf2/HO-1、PI3K/AKT、MEK/ERK、TGF-β1/Smad 信號通路。由于肝纖維化發(fā)病機理復雜，丹參的多種化學成分在對肝纖維化的調控上可能具有傳導串聯(lián)性及靶標疊合性，若能研究闡明各有效成分間串聯(lián)作用的協(xié)同疊加性，將對中藥丹參的開發(fā)和臨床抗纖維化研究提供更廣闊的思路。