姜?jiǎng)偃A，劉子鷗，陸 偉，劉 紅，曹 鑫

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院1特檢中心；3血液內(nèi)科，江蘇 226001；2南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院）

華氏巨球蛋白血癥(Waldenstrom macroglobulinemia,WM)屬于非霍奇金淋巴瘤(NHL),特點(diǎn)為骨髓中小B淋巴細(xì)胞增生并伴有不同程度的漿細(xì)胞分化,外周血出現(xiàn)單克隆IgM,且大部分患者存在MYD88L265P體細(xì)胞突變[1]。WM異質(zhì)性強(qiáng),不同患者的預(yù)后差別較大,目前仍不可治愈[2]。常見的影響預(yù)后因素有年齡、血細(xì)胞數(shù)量、B組癥狀、β2-微球蛋白(β2-MG)、M蛋白水平、乳酸脫氫酶(LDH)水平、低白蛋白血癥以及WM國(guó)際預(yù)后指數(shù)(ISSWM)分期等[2]。T細(xì)胞是細(xì)胞免疫機(jī)制中的重要細(xì)胞,T細(xì)胞亞群的組成一定程度上反映機(jī)體的免疫功能,有研究發(fā)現(xiàn)輔助性T細(xì)胞參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[3]。本研究回顧性分析南通大學(xué)附屬醫(yī)院血液內(nèi)科2010年1月—2020年12月收治的44例WM患者初診臨床資料,探討外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在WM中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料初治WM患者44例(WM組),其中男性32例,女性12例,男女之比1.4∶1,年齡38～77歲,平均63.1±9.9歲。均基于臨床特征、組織病理形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)及基因?qū)W檢查,符合2016年世界衛(wèi)生組織淋巴腫瘤分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。排除臨床資料不完整以及初診時(shí)未進(jìn)行T細(xì)胞亞群檢測(cè)的患者。選取同期在我院進(jìn)行健康體檢的20例正常人為健康對(duì)照組,其中男性12例,女性8例,年齡40～75歲,平均64.2±9.98歲。兩組性別、年齡比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)采用枸櫞酸鈉真空采血管采集研究對(duì)象外周靜脈血,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)進(jìn)行免疫分型。所用抗體包括CD3-FITC、CD4-PE和CD8-APC鼠抗人單克隆熒光抗體及其同型對(duì)照抗體(BD Bio sciences,美國(guó)),檢測(cè)外周血CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞比例。正常參考值:CD3+細(xì)胞64%～79%,CD4+細(xì)胞30%～40%,CD8+細(xì)胞21%～29%,CD4+/CD8+比值1.4～2.0。

1.3 隨訪通過病案記錄或電話對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行隨訪,隨訪時(shí)間1～82個(gè)月,中位隨訪時(shí)間33個(gè)月,最后一次隨訪時(shí)間為2020年12月,記錄患者總體生存時(shí)間(OS)和無進(jìn)展生存時(shí)間(PFS)。OS定義為從最初的確診時(shí)間至任何原因引起死亡的時(shí)間,或至最后隨訪時(shí)間。PFS定義為最初的確診時(shí)間至第一次疾病進(jìn)展的時(shí)間,或至最后隨訪時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,Graphpad Prism 8進(jìn)行繪圖。非正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)表示,組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。繪制Kaplan-Meier患者OS和PFS,組間生存期比較應(yīng)用log-rank檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組外周血T細(xì)胞亞群指標(biāo)比較WM組患者外周血CD4+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值低于健康對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而兩組CD3+及CD8+細(xì)胞比例比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 兩組T細(xì)胞亞群比較

2.2 T細(xì)胞亞群與WM患者臨床特征的相關(guān)性男性、伴有遺傳學(xué)異常的WM患者CD3+細(xì)胞比例分別低于女性、遺傳學(xué)正?；颊?差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);＜65歲、ISSWMⅠ期、Ca2+正?；颊逤D4+/CD8+比值分別高于≥65歲、ISSWMⅡ、Ⅲ期、低Ca2+患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);低Ca2+、細(xì)胞遺傳學(xué)異?；颊逤D8+細(xì)胞比例分別高于Ca2+正常、遺傳學(xué)正常患者,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 T淋巴細(xì)胞亞群與WM患者臨床特征的關(guān)系

2.3 T細(xì)胞亞群與WM患者預(yù)后的關(guān)系在隨訪期間有16例(36.7%)疾病進(jìn)展,10例(22.7%)死亡。1年和3年OS分別為82%和67%,PFS分別為67%和54%。以CD3+、CD4+、CD8+正常低值作為cut-off值進(jìn)行生存分析,發(fā)現(xiàn)高CD3+、CD4+組患者OS優(yōu)于低CD3+、CD4+患者,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),但PFS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),見圖1。CD8+細(xì)胞比例與患者OS、PFS均無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。根據(jù)X-tile軟件判斷CD4+/CD8+比值的最佳cut-off值為1.5,結(jié)果顯示CD4+/CD8+≥1.5患者OS及PFS優(yōu)于CD4+/CD8+＜1.5患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見圖2。

圖1 外周血CD3+、CD4+細(xì)胞比例與OS及PFS的關(guān)系

圖2 外周血CD4+/CD8+比值與OS及PFS的關(guān)系

3 討 論

人體正常免疫反應(yīng)可清除早期腫瘤細(xì)胞,免疫系統(tǒng)異常使惡性細(xì)胞逃逸免疫監(jiān)視,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,而腫瘤會(huì)反過來進(jìn)一步破壞免疫系統(tǒng)[4]。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),免疫細(xì)胞亞群在外周循環(huán)中的分布與B細(xì)胞淋巴瘤的預(yù)后相關(guān)[5-6]。免疫調(diào)節(jié)藥物(如來那度安)及免疫監(jiān)視點(diǎn)抑制劑(PD-1抑制劑)對(duì)WM均有一定療效[7],提示W(wǎng)M與免疫異常相關(guān)。

T細(xì)胞在機(jī)體免疫應(yīng)答中占有重要地位,本研究利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WM患者外周血CD3+,CD4+、CD8+細(xì)胞比例以及CD4+/CD8+比值,并結(jié)合臨床特征進(jìn)行分析,探討初診時(shí)患者外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)的臨床意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn),WM患者外周血CD4+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值低于健康對(duì)照組,低CD3+,低CD4+,低CD4+/CD8+患者OS較短,預(yù)后較差。CD3+細(xì)胞代表總T細(xì)胞數(shù)量,CD4+細(xì)胞代表輔助T細(xì)胞水平。CD4+T細(xì)胞為特異性免疫應(yīng)答提供信號(hào),并輔助產(chǎn)生抗體,能增強(qiáng)CD8+細(xì)胞和吞噬細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng),CD4+/CD8+比值反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài),兩者相互促進(jìn)相互制約。CD3+細(xì)胞降低提示整體免疫功能有所下降,而CD4+細(xì)胞減少可能使得特異性免疫反應(yīng)減弱,CD4+/CD8+明顯降低則提示T細(xì)胞亞群的比例異常。本研究結(jié)果顯示,總T細(xì)胞減少,尤其是CD4+細(xì)胞減少的WM患者預(yù)后較差,提示患者可能存在一定程度的免疫抑制,與既往彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的研究結(jié)果類似[8]。因此,對(duì)WM患者進(jìn)行T細(xì)胞亞群檢測(cè)有助于判斷患者細(xì)胞免疫狀態(tài),對(duì)評(píng)估預(yù)后有所幫助。

本研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞遺傳學(xué)異常患者CD3+細(xì)胞比例低于無遺傳學(xué)異?；颊?年齡較大患者CD4+/CD8+比值低于年齡較輕患者,提示遺傳學(xué)異常及年齡增高可能引起機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降,從而影響患者生存。與血鈣正?；颊弑容^,低鈣血癥患者CD8+細(xì)胞增多,CD4+/CD8+比值較低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而CD4+細(xì)胞數(shù)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),提示低鈣水平可能影響WM患者的免疫功能。有研究發(fā)現(xiàn)維生素D具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用,而T細(xì)胞是維生素D發(fā)揮這種作用的重要靶細(xì)胞[9]。在血液腫瘤的研究中也發(fā)現(xiàn)維生素D能調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能和造血細(xì)胞的分化、增殖,而且維生素D水平與異基因干細(xì)胞移植后患者的預(yù)后相關(guān),影響移植物抗宿主病的風(fēng)險(xiǎn)[10]。