尹 磊，黨全偉，朱月健，李冬梅，段體斌，劉國(guó)衛(wèi)

(1.安徽普仁中藥飲片有限公司，安徽 亳州 236800；2.中藥提取安徽省技術(shù)創(chuàng)新中心，安徽 亳州 236800；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中一公司，河南 鄭州 450000)

狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根莖。

始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝等功效。其炮制品又分為生狗脊片、熟狗脊與燙狗脊等，通過(guò)去毛、蒸制、炒制等方法去除表面須毛并增加功效；一方面通過(guò)機(jī)械滾筒或砂燙等方法去除藥材表面金黃色絨毛，減少刺喉傷肺等，同時(shí)通過(guò)砂燙等進(jìn)行高溫炮制，炮制后其成分經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化也增強(qiáng)了補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝等功效[1-2]。徐鋼等[3]發(fā)現(xiàn)狗脊各炮制品正丁醇提取部位對(duì)于成骨細(xì)胞有顯著增值作用，且炮制品的增值作用大于生品。鞠成國(guó)等[4]分析發(fā)現(xiàn)狗脊及其炮制品和狗脊毛具有鎮(zhèn)痛和不同程度的活血作用。許枬等[5]比較分析燙狗脊炮制前后的氨基酸、揮發(fā)油、鞣質(zhì)等成分變化，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)砂燙后，燙狗脊揮發(fā)油、鞣質(zhì)和游離性氨基酸均有所降低，但水解氨基酸含量增高，同時(shí)總糖經(jīng)過(guò)高溫轉(zhuǎn)化，其最終生成5-羥甲基糠醛，該成分與氨基酸進(jìn)一步聚合產(chǎn)生梅拉德反應(yīng)，該反應(yīng)與熟地黃、酒黃精炮制過(guò)程類(lèi)似，成品顏色加深，推測(cè)狗脊通過(guò)砂燙炮制后可增強(qiáng)其補(bǔ)益作用。白桐菲等[6-7]研究發(fā)現(xiàn)，狗脊砂燙后原兒茶酸和咖啡酸呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。趙敏杰等[8]分析狗脊炮制過(guò)程中的成分變化，發(fā)現(xiàn)水溶性蛋白在炮制后呈一定程度降低，總酚酸和總多糖的含量呈一定程度的升高，其結(jié)果與其他文獻(xiàn)報(bào)道一致，說(shuō)明狗脊炮制過(guò)程變化的復(fù)雜性和工藝研究的必要性。

葉森等[9]通過(guò)分析市售燙狗脊飲片的質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)原兒茶酸含量差異較大。李丹等[10]采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化燙狗脊炮制工藝，其最佳工藝為砂量比4.67、砂燙時(shí)間5.87 min、溫度177.99 ℃。梁志毅等[11]通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，微波炮制狗脊過(guò)程中含量與顏色有一定關(guān)聯(lián)性，可作為炮制過(guò)程中的監(jiān)測(cè)依據(jù)。本研究在飲片生產(chǎn)過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)燙狗脊飲片受炮制工藝參數(shù)影響較大，質(zhì)量難以穩(wěn)定，表面顏色變化較快，為優(yōu)化當(dāng)前工藝參數(shù)和優(yōu)化成品顏色性狀，結(jié)合當(dāng)前藥典檢測(cè)指標(biāo)和外觀(guān)性狀，分別考察了輔料沙子用量、炒制溫度和時(shí)間，以期生產(chǎn)出合格、穩(wěn)定、優(yōu)質(zhì)的燙狗脊成品。現(xiàn)將研究過(guò)程報(bào)道如下。

1 材料與試劑

炒藥機(jī)(杭州金竺機(jī)械有限公司)、紅外測(cè)溫儀(山東奧博自動(dòng)化科技有限公司)、手工篩、UITiMate3000高效液相色譜儀(美國(guó)戴安(中國(guó))有限公司)、BSM電子天平(上海卓精電子科技有限公司)、CP214電子天平(奧豪斯儀器(常州)有限公司)、DHG-9101-3A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)CANON EOS 77D 照相機(jī)(日本佳能株式會(huì)社)。

原兒茶酸對(duì)照品(批號(hào)：110809-200604)，對(duì)照品購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、冰醋酸為色譜純；純凈水。

狗脊藥材由安徽普仁中藥飲片有限公司提供，取自待包裝產(chǎn)品庫(kù)(批號(hào)1904162)，經(jīng)安徽普仁中藥飲片有限公司生藥專(zhuān)家朱月健鑒定為凈制后的生狗脊片。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理與檢測(cè)方法

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-1%冰醋酸溶液(5∶95)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算原兒茶酸的含量。供試品溶液與對(duì)照品溶液的色譜見(jiàn)圖1。

圖1 樣品HPLC色譜

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 取原兒茶酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液制成50 μg/1 mL的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 分別取供試樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液25 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取原兒茶酸對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，按照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果原兒茶酸峰面積的RSD為1.44%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“1.2.6”項(xiàng)制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，在室溫下分別于0、2、4、8、10、16、24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積、保留時(shí)間。測(cè)定原兒茶酸峰面積，計(jì)算其RSD為1.26%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品粉末5份，按“1.2.6”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算RSD為1.87%。結(jié)果表明采用該方法測(cè)定燙狗脊原兒茶酸含量，重復(fù)性良好。

2.2 燙狗脊炮制工藝研究

2.2.1 不同炮制程度對(duì)質(zhì)量的影響 燙狗脊：取潔凈后河砂，河砂用量為狗脊片8倍，在河砂溫度180 ℃(紅外測(cè)溫儀測(cè)定)時(shí)，投入凈制后的狗脊飲片炒制，分別在炒制2、3、4、5、6、7 min后取出，篩去河砂，得燙狗脊，觀(guān)察樣品性狀并備用。具體炮制條件，見(jiàn)表1。

表1 燙狗脊不同炒制程度炮制條件

2.2.2 不同河砂用量對(duì)質(zhì)量的影響 分別取3倍、5倍、8倍潔凈后河砂加熱至滑利狀態(tài)，待河砂溫度為180 ℃時(shí)，投入凈制后的狗脊飲片炒制，炒至燙狗脊片表面鼓起，表面呈棕褐色時(shí)取出，篩去河砂，得燙狗脊樣品備用。不同河砂用量炮制條件，見(jiàn)表2。

表2 燙狗脊不同河砂用量炮制條件

2.2.3 不同炮制溫度對(duì)質(zhì)量的影響 取潔凈后的河砂加熱至滑利狀態(tài)，在不同河砂溫度(紅外測(cè)溫儀測(cè)定)時(shí)投入凈制后的狗脊飲片炒制，炒至狗脊片表面略鼓起、外表面呈棕褐色時(shí)取出，篩去河砂，得燙狗脊。固定河砂用量為8倍量，設(shè)計(jì)不同河砂溫度對(duì)應(yīng)炒制時(shí)間，見(jiàn)表3。

表3 燙狗脊不同河砂溫度的炮制條件

2.3 檢測(cè)結(jié)果及分析

2.3.1 不同炮制程度檢測(cè)結(jié)果及分析 按“2.1.3”項(xiàng)制備供試品溶液，并按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表4；燙狗脊炮制成品顏色變化，見(jiàn)圖2。

表4 不同炒制程度對(duì)應(yīng)時(shí)間含量測(cè)定結(jié)果

圖2 燙狗脊不同炒制程度外觀(guān)

對(duì)比燙狗脊不同炒制程度的外觀(guān)顏色，可以看出G200214-1、G200214-2兩批樣品炒制程度輕，達(dá)不到藥典規(guī)定顏色棕褐色的要求；G200214-3、G200214-4兩批樣品炒制程度棕褐色，能夠達(dá)到藥典要求；G200214-5、G200214-6兩批樣品炒制顏色較重，炒制過(guò)度。對(duì)6批不同炒制程度的樣品進(jìn)行含量檢測(cè)，根據(jù)含量結(jié)果看出炒制程度輕時(shí)，原兒茶酸含量較低。炒制程度為棕褐色時(shí)，原兒茶酸含量較高，升高趨勢(shì)明顯；炒制呈灰褐色稍有部分炭化時(shí)，原兒茶酸含量降低。

2.3.2 不同河砂用量檢測(cè)結(jié)果及分析 按“2.1.3”項(xiàng)制備供試品溶液，并按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表5。

表5 不同河砂用量含量測(cè)定結(jié)果

分析檢驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同河砂用量影響燙狗脊炮制過(guò)程的含量轉(zhuǎn)化。輔料河砂用量在3～5倍時(shí)，不能完全覆蓋狗脊片，導(dǎo)致河砂傳熱不均勻。輔料河砂用量在8倍時(shí)，能夠覆蓋狗脊片均勻加熱，從而使內(nèi)在成分的含量發(fā)生轉(zhuǎn)化。

2.3.3 不同河砂溫度對(duì)燙狗脊含量影響及檢測(cè)結(jié)果分析 按“2.1.3”項(xiàng)制備供試品溶液，并按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表6。

表6 不同河砂溫度含量測(cè)定結(jié)果

分析檢驗(yàn)結(jié)果可以看出，在不同河砂溫度下，炮制的燙狗脊含量有很大變化。隨著河砂溫度提高，原兒茶酸含量先逐步提高然后降低；溫度過(guò)高時(shí)，燙狗脊鼓起程度明顯降低，顏色不均勻?？傮w河砂溫度在180～190 ℃時(shí)，燙狗脊原兒茶酸含量較高，且鼓起程度較高，顏色較均勻，由此確定河砂的適宜溫度為180～190 ℃，炒制時(shí)間為4～5 min。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)上述燙狗脊工藝實(shí)驗(yàn)所得的工藝條件，進(jìn)行三批次燙狗脊(批號(hào)2004242、206292、2008162)大生產(chǎn)，以驗(yàn)證工藝，所得樣品按照2015版藥典進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表7。

表7 3批次燙狗脊大生產(chǎn)原兒茶酸檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)3批次大生產(chǎn)驗(yàn)證結(jié)果可知，原兒茶酸含量均高于藥典要求，且成品鼓起程度和顏色較為均一。由此可知實(shí)驗(yàn)所得的燙狗脊生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，可用于燙狗脊飲片大生產(chǎn)。

3 討論

本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)探究燙狗脊炮制過(guò)程，發(fā)現(xiàn)原料中原兒茶酸的含量和成品性狀包括鼓起程度、表面與斷面顏色、質(zhì)地等受炒制程度、輔料河砂用量、河砂溫度的影響較大。其炒制程度外觀(guān)顏色從棕黃色、黃褐色、棕褐色、深棕褐色、巧克力棕色、灰褐色持續(xù)變化。根據(jù)含量檢測(cè)結(jié)果，當(dāng)外觀(guān)顏色達(dá)到棕褐色時(shí)，樣品原兒茶酸含量成分最高，且鼓起程度、斷面顏色也較優(yōu)，隨著進(jìn)一步炒制程度的加深，含量呈分解下降趨勢(shì)，直觀(guān)反映出炒制程度的變化。

結(jié)合文獻(xiàn)資料與實(shí)驗(yàn)研究，燙狗脊的炮制過(guò)程推測(cè)是梅拉德反應(yīng)[12]，通過(guò)高溫分解轉(zhuǎn)化，其總糖與分解的氨基酸結(jié)合轉(zhuǎn)化形成顏色較深的5-羥甲基糠醛，該成分是梅拉德反應(yīng)標(biāo)志產(chǎn)物之一，具有一定的補(bǔ)益作用，也驗(yàn)證了狗脊經(jīng)過(guò)炮制后增加了其補(bǔ)肝腎作用，但同時(shí)其顏色變化也不是越深越好，如同熟地黃、酒黃精等，應(yīng)防止其砂燙過(guò)程中發(fā)生炭化，影響質(zhì)量。