尹燦友，李 麗，鄧 飛，邱明雙，邵 靚，周莉媛，陳 斌，裴超信，吉色曲伍，李英林

（1.西昌市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局西鄉(xiāng)片區(qū)畜牧獸醫(yī)中心站，四川西昌 615000；2.四川省動物疫病預(yù)防控制中心，四川成都 610041；3.涼山州動物疫病預(yù)防控制中心，四川西昌 615000）

為加強(qiáng)獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力建設(shè)，提高全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力，四川省動物疫病預(yù)防控制中心按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》[1]、《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核工作實施方案》[2]、《關(guān)于開展獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知》以及四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳《關(guān)于開展全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知要求》等文件有關(guān)要求，于2018—2020 年組織開展了全省地市（州）級獸醫(yī)實驗室檢測能力比對工作。全省21 個地市（州）級獸醫(yī)實驗室按要求在規(guī)定時間內(nèi)完成了盲樣領(lǐng)取、檢測、正式報告出具和結(jié)果上報等流程。比對結(jié)果既可客觀反映四川省地市（州）級獸醫(yī)實驗室檢測能力及水平，也可反映出存在的問題。本文對2018—2020 年四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果進(jìn)行了梳理分析，以期提高獸醫(yī)實驗室檢測能力，更好地發(fā)揮獸醫(yī)實驗室作用。

1 材料與方法

1.1 比對項目

四川省歷年比對項目為3 個，包括1～2 個病原學(xué)檢測項目和1～2 個血清學(xué)檢測項目。2018—2020 年涉及的比對項目包括：禽流感病毒核酸檢測（RT-PCR 方法）、口蹄疫病毒核酸檢測（RT-PCR/熒光RT-PCR 方法）、豬瘟病毒抗體檢測（ELISA方法）、禽流感病毒抗體檢測（HA/HI 方法）、非洲豬瘟病毒核酸檢測（熒光PCR 方法）以及O 型口蹄疫病毒抗體檢測（固相競爭ELISA 方法），共計6 個項目。

1.2 比對項目采用方法及標(biāo)準(zhǔn)

2018—2020 年四川省地市（州）級獸醫(yī)實驗室比對項目、采用方法和標(biāo)準(zhǔn)，詳情見表1。

表1 比對項目、方法及標(biāo)準(zhǔn)

1.3 比對樣品

2018 年每個比對項目設(shè)置5 份盲樣，2019—2020 年每個比對項目均設(shè)置6 份盲樣。樣品均由相應(yīng)國家參考實驗室或試劑公司提供，經(jīng)四川省動物疫病預(yù)防控制中心驗證、編號和封裝后，由參與比對的21 個地市（州）級獸醫(yī)實驗室派專人在指定時間統(tǒng)一領(lǐng)取，并要求在12 h 內(nèi)送達(dá)參與比對的實驗室。

1.4 比對試劑

參與比對的21 個地市（州）級獸醫(yī)實驗室采用的試劑均來自同一廠家、同一批次，由四川省動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一采購、驗證并發(fā)放。比對試劑廠家及批號見表2。

表2 比對試劑名稱、廠家及批號

1.5 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

比對項目結(jié)果的參考值及判定標(biāo)準(zhǔn)見表3。

表3 比對結(jié)果參考值、判定標(biāo)準(zhǔn)

2 比對結(jié)果

2018 年全省整體平均正確率為95.59%，其中禽流感病毒核酸檢測16 個市（州）結(jié)果完全正確，口蹄疫病毒核酸檢測19 個市（州）結(jié)果完全正確，豬瘟病毒抗體檢測21 個市（州）結(jié)果完全正確；2019 年全省整體平均正確率為97.09%，其中禽流感H9 亞型抗體檢測17 個市（州）結(jié)果完全正確，口蹄疫病毒核酸檢測21 個市（州）結(jié)果完全正確，豬瘟抗體檢測19 個市（州）結(jié)果完全正確；2020年全省整體平均正確率為97.88%，其中禽流感H5亞型抗體檢測17 個市（州）結(jié)果完全正確，非洲豬瘟病毒核酸檢測19 個市（州）結(jié)果完全正確，口蹄疫抗體檢測21 個市（州）結(jié)果完全正確。具體結(jié)果見表4。

表4 2018—2020 年全省各地市（州）級獸醫(yī)實驗室比對結(jié)果

3 分析與討論

3.1 就總體水平而言

2018—2020 年連續(xù)3 年的比對結(jié)果正確率都在95%以上，說明四川省地市（州）級獸醫(yī)實驗室檢測能力處于較高水平，能滿足非洲豬瘟、禽流感等重大動物疫病檢測需要；就各年整體正確率來看，2019 年全省平均正確率（97.09%）較2018 年（95.59%）上升了1.50 個百分點，2020 年（97.88%）較2019 年上升了0.79 個百分點，正確率總體呈逐年上升趨勢。

3.2 就檢測方法而言

對于核酸檢測，在檢測禽流感和口蹄疫病毒核酸時，2019 年采用的熒光RT-PCR 正確率高于2018 年的普通RT-PCR，同時2020 年采用熒光PCR 開展非洲豬瘟病毒核酸檢測比對時正確率也高達(dá)98.41%，這與熒光RT-PCR/PCR 的特異性、靈敏度、自動化程度高于普通RT-PCR/PCR 有關(guān)。對于抗體檢測，ELISA 方法和HA-HI 試驗都是獸醫(yī)實驗室常見的血清學(xué)檢測方法，ELISA 因為采用商品化試劑盒且結(jié)果判定使用儀器讀數(shù)，而HA-HI試驗因紅細(xì)胞需自備且結(jié)果判定受人為主觀因素影響，因此ELISA 方法正確率略高于HA-HI 試驗。

4 存在問題

4.1 部分實驗室設(shè)備條件差

2018 年有2 個市（州）因獸醫(yī)實驗室條件限制而無法開展病原學(xué)檢測，另外有個別實驗室因凝膠成像系統(tǒng)故障無法顯示電泳結(jié)果。2019 年個別市（州）因?qū)嶒炇以O(shè)備配置太低無法開展多重?zé)晒獠≡瓕W(xué)檢測，也有實驗室因設(shè)備配套設(shè)施不完善而影響檢測結(jié)果。

4.2 部分實驗人員對某些檢測方法不熟悉，檢測能力有待提高

2020 年口蹄疫抗體檢測采用固相競爭ELISA方法。該方法是OIE 在國際貿(mào)易中口蹄疫血清學(xué)檢測指定方法之一，既可定性又可測定效價。檢測結(jié)果顯示：只有6 個實驗室能將陰陽性對照和被檢樣品的效價完全判定正確，而部分實驗室僅能正確判定陰陽性，但對說明書中效價判定方法理解不到位；另有個別實驗室只作了定性檢測，未按要求進(jìn)行效價測定。2020 年雖然大部分市（州）非洲豬瘟病毒核酸檢測正確率能達(dá)到100%，但仍然有個別市（州）實驗室出現(xiàn)假陰性（漏檢）結(jié)果或/和Ct 值偏差較大的情況。

4.3 部分檢測結(jié)果報告不規(guī)范

四川省歷年比對均要求各市（州）實驗室不僅報送檢測結(jié)果，也要求提交檢測原始記錄及檢測報告。但從檢測報告和原始記錄上看，連續(xù)3 年均有部分實驗室存在記錄和報告不詳盡、不完整、不規(guī)范的問題。比如凝膠電泳圖清晰度差或未標(biāo)注泳道，HA 試驗報告中數(shù)據(jù)填寫不規(guī)范，未填寫陰、陽性對照結(jié)果以及缺少ELISA 試驗的OD 值。

5 建議

5.1 加強(qiáng)獸醫(yī)實驗室建設(shè)，更新完善檢測設(shè)施設(shè)備

目前，各地高度重視獸醫(yī)實驗室建設(shè)工作，動物疫病防控工作正逐步構(gòu)建以全面開展實驗室監(jiān)測預(yù)警和疫病凈化為重點的新防疫理念。四川省獸醫(yī)實驗室系統(tǒng)已初步建成了省、市、縣三級獸醫(yī)實驗室的分工格局，但個別市（州）獸醫(yī)主管部門在推進(jìn)獸醫(yī)實驗室建設(shè)中重視程度不夠，進(jìn)展緩慢。需進(jìn)一步提高認(rèn)識，不斷加強(qiáng)獸醫(yī)實驗室建設(shè)，加大支持力度和資金投入，更新完善檢測設(shè)施設(shè)備[3]。

5.2 加強(qiáng)實驗室技術(shù)人員培訓(xùn)，提升檢測能力和水平

各市（州）實驗室應(yīng)當(dāng)不斷加強(qiáng)內(nèi)部培訓(xùn)和規(guī)范化建設(shè)，完善實驗室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，提升實驗室能力和管理水平。建議進(jìn)一步穩(wěn)定和強(qiáng)化獸醫(yī)實驗室人員隊伍和能力建設(shè)[4]，加強(qiáng)與省級動物疫病預(yù)防控制中心和其他市（州）級單位之間的交流、培訓(xùn)，穩(wěn)步推進(jìn)實驗室管理體系更上新臺階。

5.3 繼續(xù)推進(jìn)獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核工作，加強(qiáng)比對考核

全省獸醫(yī)實驗室考核是在農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一組織下的獸醫(yī)行業(yè)實驗室檢測能力認(rèn)可工作[5]。同時，市（州）級實驗室檢測能力是全省動物疫病監(jiān)測工作的重要技術(shù)支撐。截至目前，四川省大部分市（州）級實驗室通過了全省獸醫(yī)實驗室考核，仍未通過實驗室考核的市（州）、縣（區(qū)）需抓緊進(jìn)行實驗室條件建設(shè)，完善儀器設(shè)備和技術(shù)人員配置。比對項目涉及的疫?。ㄇ萘鞲小⒖谔阋?、豬瘟、非洲豬瘟）均屬于一類動物疫病，因此圍繞這幾類動物疫病開展的實驗室比對工作緊緊抓住了當(dāng)前重大動物疫病防控的重點。比對結(jié)果正確率未達(dá)到100%的地方需認(rèn)真總結(jié)，及時查找和糾正問題，做到持續(xù)改進(jìn)，不斷提升。建議繼續(xù)推進(jìn)動物疫病防控系統(tǒng)獸醫(yī)實驗室考核工作，穩(wěn)步推進(jìn)生物安全監(jiān)管，定期開展比對核查工作。