俸海刀

（柳州市動(dòng)物園管理處，廣西 柳州 545005）

動(dòng)物園養(yǎng)殖的動(dòng)物種類多、數(shù)量多，動(dòng)物園人員流動(dòng)量大，動(dòng)物飼養(yǎng)管理難度大，因此給各種動(dòng)物疾病的傳播創(chuàng)造了條件。抗生素和化學(xué)合成類藥物雖然在防病治病方面發(fā)揮了巨大作用，但是也要看到這類藥物不恰當(dāng)使用帶來的危害，如疾病的耐藥性不斷增強(qiáng)，殘留的抗生素污染養(yǎng)殖場(chǎng)地環(huán)境等。尤其是動(dòng)物園養(yǎng)殖了很多瀕危野生動(dòng)物，抗生素和化學(xué)合成類藥物的不當(dāng)使用，可能導(dǎo)致畸形胎、流產(chǎn)等現(xiàn)象發(fā)生，加大瀕危動(dòng)物的繁育難度。因此需要尋求有效的抗生素替代物，提高動(dòng)物園動(dòng)物的養(yǎng)殖成績[1-15]?？紤]動(dòng)物園動(dòng)物種類多、病因多的因素，因此在設(shè)計(jì)抗生素替代物時(shí)，需要滿足廣譜、高效、無毒、低毒的特點(diǎn)。中藥具有益氣養(yǎng)血、固本培元等功效，且綠色環(huán)保，筆者依據(jù)中藥配伍的原理，配制兩組中草藥添加劑，用其前期提取液進(jìn)行了抑菌和毒理試驗(yàn)，以期為動(dòng)物的健康養(yǎng)殖提供參考[1-15]。

1 材料與方法

1.1 中藥飼料添加劑前期提取物制備

配制中草藥飼料添加劑前期提取液，A組中藥松針、紫蘇籽、泡桐花、黃精、韭菜子、淫羊藿、東革阿里按照質(zhì)量比24∶20∶12∶15∶12∶10∶10組方，B 組中藥黨參、黃芪、當(dāng)歸、黃芩、梔子、淫羊藿、牛膝按照質(zhì)重量22∶17.5∶10∶12.5∶10∶8∶8組方。

按照A 組B 組的組方進(jìn)行藥材的挑揀、清洗、干燥、混合粉碎，然后加沸水?dāng)嚢璩珊隣钪兴幏?，凍融，?jīng)過3次醇提，合并濾液，除乙醇后再次濃縮，至相對(duì)密度1.18，即得試驗(yàn)所用中草藥飼料添加劑前期提取液[16]。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)儀器

試驗(yàn)動(dòng)物為均重20 g的成年小白鼠，由廣東江門一號(hào)生態(tài)園提供；試驗(yàn)所需的器具為牛津杯、培養(yǎng)皿、低速臺(tái)式水平離心機(jī)、低溫冰箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡等，均購于深圳市泰潤儀器設(shè)備有限公司。

1.3 抑菌試驗(yàn)

1.3.1 藥敏試驗(yàn)

將培養(yǎng)皿滅菌后分成6個(gè)扇區(qū)，在超凈工作臺(tái)中，用經(jīng)酒精燈火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌4種細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。將牛津杯內(nèi)加入100 μL 藥液按順序放入6 個(gè)扇區(qū)中央，37 ℃下培養(yǎng)24 h，測(cè)量抑菌圈直徑。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

采用10 倍稀釋法及2 倍稀釋法，參考黃亞東等[16]的方法進(jìn)行最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定。

1.4 毒理學(xué)試驗(yàn)

1.4.1 急性毒性試驗(yàn)（LD50的測(cè)定）

設(shè)4 個(gè)劑量組，劑量分別是10000 mg·kg-1、20000 mg·kg-1、40000 mg·kg-1、80000 mg·kg-1，同時(shí)設(shè)立1個(gè)空白對(duì)照組。每組有10只小白鼠，連續(xù)給藥1周，每天觀察小白鼠精神狀態(tài)、食欲和飲水情況、中毒情況，并記錄白鼠的死亡數(shù)目[17-18]。

1.4.2 蓄積毒性試驗(yàn)

設(shè)4個(gè)劑量組（劑量分別為1000 mg·kg-1、2000 mg·kg-1、4000 mg·kg-1、8000 mg·kg-1）和1個(gè)空白對(duì)照組，灌胃給藥，連續(xù)給藥3 周，停止給藥后再觀察1 周，在4 周內(nèi)每天觀察小白鼠精神狀態(tài)、食欲和飲水情況、體重情況以及中毒情況，并記錄白鼠的死亡數(shù)目[19]。

1.5 數(shù)據(jù)處理及分析

試驗(yàn)結(jié)束用SPSS 10.0 軟件， 采用one- way ANOVA 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行Duncan’s 多重比較。結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 抑菌試驗(yàn)效果

2.1.1 抑菌圈直徑

抑菌圈直徑測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 抑菌直徑 mm

由表1 可知，2 組提取液均有一定的抑菌作用，從大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌4 個(gè)抑菌圈直徑可以看出，A 組分別比B 組高出3.95 mm、2.35 mm、0.35 mm 和2.6 mm，說明A組提取液的抑菌效果強(qiáng)于B組提取液，其中A組大腸桿菌、沙門氏菌和副豬嗜血桿菌3個(gè)抑菌直徑明顯高于B組，差異顯著（P＜0.05）。

2.1.2 MIC和MBC

MIC和MBC測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 MIC和MBC測(cè)定結(jié)果 mg·mL-1

由表2可知，2組中藥提取液的MIC和MBC 都較為理想。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，除了巴氏桿菌兩組的MIC和MBC 差異不顯著外，試驗(yàn)A 組在大腸桿菌、沙門氏菌和副豬嗜血桿菌的MIC 和MBC 均明顯優(yōu)于試驗(yàn)B組，差異顯著（P＜0.05）。

2.2 毒理學(xué)試驗(yàn)

2.2.1 急性攻毒試驗(yàn)

在急性攻毒后1周時(shí)間內(nèi)，試驗(yàn)小白鼠的精神狀態(tài)正常，即使在灌服最大劑量80000 mg·kg-1中草藥提取液后，也沒有出現(xiàn)任何中毒現(xiàn)象。因而無需測(cè)定半數(shù)致死量，即LD50＞80000 mg·kg-1。急性攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明本試驗(yàn)所設(shè)計(jì)的動(dòng)物用中草藥飼料添加劑是屬于無毒類物質(zhì)。

2.2.2 蓄積毒性試驗(yàn)

在蓄積毒性試驗(yàn)給藥3 周后，2 個(gè)試驗(yàn)組的小白鼠的精神狀態(tài)，采食和飲水等情況均表現(xiàn)正常，也未出現(xiàn)中毒情況，停止給藥1周后，小白鼠的精神狀態(tài)、采食和飲水等情況均表現(xiàn)正常，見表3。

表3 蓄積毒性試驗(yàn)結(jié)果 g

由表3 可知，給藥3 周后，各劑量組與空白對(duì)照組相比，在試驗(yàn)初始重、結(jié)束重和平均增重方面均無明顯差異（P＞0.05）。

3 結(jié) 論

本試驗(yàn)所設(shè)計(jì)的中藥提取液具有較好的抑菌（大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌）殺菌作用，無毒副作用，在動(dòng)物飼養(yǎng)過程中可以作為中藥添加劑使用。