張翠　王珺　王凱波　林偉　孫田

[摘要]目的：探討重樓皂苷Ⅰ（PPⅠ）是否通過調(diào)控長鏈非編碼RNA CEBPA-AS1（LncRNA CEBPA-AS1）/微小RNA-195-5p（miR-195-5p）通路影響瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡。方法：原代培養(yǎng)人瘢痕疙瘩成纖維細胞，使用不同濃度的PPⅠ處理細胞，si-CEBPA-AS1、pcDNA-CEBPA-AS1分別轉(zhuǎn)染至細胞;采用MTT檢測細胞增殖;應(yīng)用流式細胞儀檢測細胞周期;采用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率;采用qRT-PCR法檢測LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表達量;雙熒光素酶報告實驗檢測LncRNA CEBPA-AS1與miR-195-5p的靶向關(guān)系。結(jié)果：與Control組比較，PPⅠ可明顯降低細胞存活率、S期細胞比例、Bcl-2蛋白水平、LncRNA CEBPA-AS1的表達水平，提高G0/G1期細胞比例、凋亡率、miR-195-5p的表達水平，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與si-NC組比較，si-CEBPA-AS1組細胞存活率、S期細胞比例降低，G0/G1期細胞比例、凋亡率升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。雙熒光素酶報告實驗證實LncRNA CEBPA-AS1可靶向調(diào)控miR-195-5p;轉(zhuǎn)染pcDNA-CEBPA-AS1可明顯逆轉(zhuǎn)PPⅠ對細胞增殖、細胞周期及凋亡的作用。結(jié)論：重樓皂苷Ⅰ可能通過下調(diào)LncRNA CEBPA-AS1的表達及上調(diào)miR-195-5p的表達從而抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及促進細胞凋亡。

[關(guān)鍵詞]重樓皂苷Ⅰ;LncRNA CEBPA-AS1;miR-195-5p;瘢痕疙瘩;成纖維細胞;增殖;凋亡

[中圖分類號]R619+.6? ? [文獻標志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2021）09-0012-05

Polyphylin Ⅰ Inhibits Keloid Fibroblast Proliferation and Promotes Apoptosis by Regulating the LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p Pathway

ZHANG Cui，WANG Jun，WANG Kai-bo，LIN Wei，SUN Tian

（Department of Dermatology，Shenyang Seventh People's Hospital，Shenyang 110000，Liaoning，China）

Abstract： Objective? To investigate whether PPⅠ affects keloid fibroblast proliferation and apoptosis by regulating the LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p pathway. Methods? Primary culture of human keloid fibroblasts， and treatment of cells with different concentrations of PPⅠ. si-CEBPA-AS1 and pcDNA-CEBPA-AS1 were transfected into cells respectively. MTT was used to detect cell proliferation. Application of flow cytometry to detect cell cycle. Flow cytometry was used to detect the apoptosis rate. The expression of LncRNA CEBPA-AS1， miR-195-5p was detected by qRT-PCR method. The dual luciferase report experiment detected the targeting relationship between LncRNA CEBPA-AS1 and miR-195-5p. Results? Compared with the Control group， PPⅠ could significantly reduce the cell survival rate， S phase cell ratio， the protein level of Bcl-2， the expression level of LncRNA CEBPA-AS1， the differences were statistically significant （P<0.05）， and increase the G0/G1 phase cell ratio， apoptosis rate， the expression level of miR- 195-5p （P<0.05）. Compared with the si-NC group， the cell survival rate and the proportion of S-phase cells in the si-CEBPA-AS1 group was decreased （P<0.05）， and the proportion of cells in the G0/G1 phase and the apoptosis rate were increased （P<0.05）. The dual luciferase report experiment confirmed that LncRNA CEBPA-AS1 could target miR-195-5p. Transfection of pcDNA-CEBPA-AS1 could obviously reverse the effects of PPⅠ on cell proliferation， cell cycle and apoptosis. Conclusion? PolyphylinⅠmay inhibit the proliferation of keloid fibroblasts and promote apoptosis by down-regulating the expression of LncRNA CEBPA-AS1 and up-regulating the expression of miR-195-5p.

Key words： Polyphylin Ⅰ; LncRNA CEBPA-AS1; miR-195-5p; keloid; fibroblast; proliferation; apoptosis

瘢痕疙瘩是皮膚纖維組織增生異常引起的，天然植物提取物對瘢痕具有明顯的抑制作用，但關(guān)于其作用機制尚未完全闡明[1-3]。重樓是我國中醫(yī)藥治療中的重要藥物之一，其主要成分重樓皂苷Ⅰ（Polyphylin Ⅰ，PPⅠ）具有抑制腫瘤細胞增殖的作用[4]。但重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡的影響尚不明確。長鏈非編碼RNA CEBPA-AS1（LncRNA CEBPA-AS1）在肝癌中呈高表達，并可能促進肝癌發(fā)生及發(fā)展[5]。通過生物信息學(xué)分析顯示微小RNA-195-5p（miR-195-5p）可能是LncRNA CEBPA-AS1的靶基因，miR-195-5p在肺癌細胞中表達下調(diào)，上調(diào)其表達可抑制肺癌細胞增殖、遷移及侵襲[6]。但重樓皂苷Ⅰ是否可通過調(diào)控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路影響瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡尚未可知。因此，本研究主要探討重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡的影響，探究其對LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路的調(diào)控作用。

1? 材料和方法

1.1 材料和試劑：收集2017年10月-2018年10月于筆者醫(yī)院進行瘢痕疙瘩手術(shù)的10例患者為研究對象，其中男6例，女4例，年齡22～63歲，平均（43.25±6.35）歲，取材部位：前胸部3例，肩部2例，耳垂部5例，采取樣本時瘢痕疙瘩處于增生活躍期、質(zhì)地較硬且局部充血，患者表現(xiàn)為毛細血管擴張且伴隨瘙癢或疼痛，瘢痕疙瘩不存在破損或感染，均未接受任何治療。

重樓皂苷Ⅰ購自中國藥品生物制品檢定所;DMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司;胰蛋白酶、Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒購自美國Thermo Fisher公司;CEBPA-AS1小分子干擾RNA（si-CEBPA-AS1）、亂序無意義陰性序列（si-NC）、miR-195-5p寡核苷酸模擬物（miR-195-5p mimics）及陰性對照mimic NC序列（miR-NC）購自廣州銳博生物科技有限公司;pcDNA3.1購自上海聯(lián)邁生物工程有限公司;Trizol試劑購自美國Invitrogen公司;反轉(zhuǎn)錄、熒光定量檢測試劑盒購自大連寶生物工程有限公司;MTT購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責任公司;細胞凋亡檢測試劑盒購自美國Sigma公司;兔抗人Bax、Bcl-2抗體購自美國Santa Cruz公司;HRP標記的山羊抗兔二抗購自武漢艾美捷科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 原代培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞[7]：采用原代分散細胞培養(yǎng)法分離培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞，將切取的瘢痕疙瘩組織置于膠原酶溶液內(nèi)消化4h，剪碎，置于膠原酶溶液中消化，分散成纖維細胞，過濾，離心后進行洗滌，加入含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素與100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)，待成纖維細胞鋪滿瓶底，置于光學(xué)顯微鏡下觀察，加入0.25%胰蛋白酶消化進行傳代培養(yǎng)，取第4代細胞進行后續(xù)實驗。

1.2.2 實驗分組：瘢痕疙瘩成纖維細胞接種于6孔板（3×104個/孔），分別加入含有不同濃度（2mg/L、10mg/L、20mg/L）的重樓皂苷Ⅰ的培養(yǎng)基處理24h[8]，分別記作PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組。同時加入含0.1% DMSO的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h作為Control組。后續(xù)實驗設(shè)置si-NC組（si-NC轉(zhuǎn)染至瘢痕疙瘩成纖維細胞）、si-CEBPA-AS1組（si-CEBPA-AS1轉(zhuǎn)染至瘢痕疙瘩成纖維細胞）、PPⅠ-H+pcDNA組（pcDNA轉(zhuǎn)染至瘢痕疙瘩成纖維細胞，加入含有濃度為20mg/L重樓皂苷Ⅰ的培養(yǎng)基處理24h）、PPⅠ-H+pcDNA-CEBPA-AS1組（pcDNA-CEBPA-AS1轉(zhuǎn)染至瘢痕疙瘩成纖維細胞，加入含有濃度為20mg/L重樓皂苷Ⅰ的培養(yǎng)基處理24h）。

1.2.3 MTT檢測細胞增殖：收集各組瘢痕疙瘩成纖維細胞接種于96孔板（5×103個/孔），每孔加入MTT溶液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入150μl DMSO，室溫避光振蕩孵育5min，應(yīng)用酶標儀檢測各孔吸光度值（OD值）。計算細胞存活率（%）=實驗處理組OD值/Control組OD值×100%。

1.2.4 檢測細胞周期：取各組瘢痕疙瘩成纖維細胞，調(diào)整細胞密度為1×106個/毫升，加入預(yù)冷PBS，4℃條件下經(jīng)3 000r/min離心5min，棄上清，加入500μl PBS重懸細胞，加入70%乙醇（3.5ml），充分混勻，4℃條件下孵育24h，取出單細胞懸液，4℃條件下經(jīng)3 000r/min離心5min，棄上清，收集細胞沉淀，加入50μl RNaseA，37℃條件下水浴30min，加入PI染液（450μl），4℃條件下孵育30min，應(yīng)用流式細胞儀與Flowjoe軟件分析各組細胞在G0/G1期、S期、G2/M期所占細胞比例。

1.2.5 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率：收集各組瘢痕疙瘩成纖維細胞，0.25%胰蛋白酶消化，加入培養(yǎng)基制備細胞懸液，調(diào)整細胞密度為1×106個/毫升，加入預(yù)冷PBS，4℃條件下經(jīng)3 000r/min離心5min，棄上清，收集細胞沉淀，加入500μl結(jié)合緩沖液重懸細胞，加入5μl Annexin V-FITC充分混勻，加入5μl PI充分混勻，室溫振蕩搖晃孵育10min，應(yīng)用FACS Calibur流式細胞儀及應(yīng)用Cellauest軟件檢測各組細胞凋亡率。

1.2.6 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測細胞中LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表達水平：收集各組瘢痕疙瘩成纖維細胞，采用Trizol法提取細胞總RNA，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。LncRNA CEBPA-AS1正向引物5-AGAACCATTCCAAGAGCCCA-3，反向引物5-TGGCAACCTTAAACCACAGC-3;GAPDH正向引物5-GGAGCGAGATCCCTCC AAAAT-3，反向引物5-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3;miR-195-5p正向引物5-AATATTGGCTGTGCTGCTCC3，反向引物5-GGACCCTGTTCACACTCTGA-3;U6正向引物5-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3，反向引物5-GGAACGCTTCACG AATTTG-3，引物由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計合成。以cDNA為模板進行qRT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系：SYBR Green Master Mix 10微升/孔，正反向引物0.8微升/孔，cDNA 1微升/孔，ddH2O補足體系至20μl;反應(yīng)條件：95℃ 2min循環(huán)1次，95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 30s，共循環(huán)40次。LncRNA CEBPA-AS1以GAPDH為內(nèi)參，miR-195-5p以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p相對表達量。

1.2.7 雙熒光素酶報告基因檢測LncRNA CEBPA-AS1與miR-195-5p靶向關(guān)系：LncBase v.2預(yù)測顯示LncRNA CEBPA-AS1與miR-195-5p存在結(jié)合位點，利用基因突變技術(shù)將結(jié)合位點進行突變，構(gòu)建野生型載體WT-CEBPA-AS1與突變型載體MUT-CEBPA-AS1，分別將miR-NC、miR-195-5p mimics與WT-CEBPA-AS1、MUT-CEBPA-AS1共轉(zhuǎn)染至瘢痕疙瘩成纖維細胞，轉(zhuǎn)染24h，收集細胞，檢測細胞相對熒光素酶活性。

1.2.8 蛋白免疫印跡（Western blot）檢測Bax、Bcl-2蛋白表達：收集各組瘢痕疙瘩成纖維細胞，加入蛋白裂解液提取細胞總蛋白，采用BCA法測定蛋白濃度。SDS-PAGE電泳分離蛋白，將分離的蛋白凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2h，加入一抗稀釋液（1：1 000），4℃孵育過夜，TBST洗滌，加入二抗稀釋液（1：2 000），室溫孵育1h，TBST洗滌，曝光顯影，應(yīng)用ImageJ軟件分析各條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以（x?±s）表示且均符合正態(tài)分布，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的影響：與Control組比較，PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組細胞存活率顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;G0/G1期細胞比例顯著升高，S期細胞比例顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;且PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組細胞存活率、G0/G1期、S期細胞比例比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而不同組別間G2/M期細胞比例比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡的影響：與Control組比較，PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組細胞凋亡率顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;Bax蛋白水平顯著升高，Bcl-2蛋白水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;且PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組細胞凋亡率、Bax、Bcl-2蛋白水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1、表2。

2.3 重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞中LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p表達量的影響：與Control組比較，PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組LncRNA CEBPA-AS1的表達水平顯著降低，miR-195-5p的表達水平顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;且PPⅠ-L組、PPⅠ-M組、PPⅠ-H組LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表達水平比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.4 干擾LncRNA CEBPA-AS1表達對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡的影響：與si-NC組比較，si-CEBPA-AS1組細胞存活率顯著降低，G0/G1期細胞比例顯著升高，S期細胞比例顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;G2/M期細胞比例無明顯變化（P>0.05）;細胞凋亡率顯著升高，Bax蛋白水平顯著升高，Bcl-2蛋白水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖2，表4。

2.5 LncRNA CEBPA-AS1靶向調(diào)控miR-195-5p：LncBase v.2預(yù)測顯示LncRNA CEBPA-AS1與miR-195-5p存在結(jié)合位點，見圖3。共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T- CEBPA-AS1的細胞實驗中，與miR-NC組比較，miR-195-5p組熒光素酶活性顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;共轉(zhuǎn)染MUT-CEBPA-AS1的細胞實驗中，miR-195-5p組熒光素酶活性與miR-NC組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表5。與si-NC組比較，si-CEBPA-AS1組miR-195-5p的表達水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;與pcDNA組比較，pcDNA-CEBPA-AS1組miR-195-5p的表達水平顯著降低（P<0.05）。見表6。

2.6 LncRNA CEBPA-AS1過表達可降低重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡的作用：與PPⅠ-H+pcDNA組比較，PPⅠ-H+pcDNA-CEBPA-AS1組細胞存活率顯著升高，G0/G1期細胞比例顯著降低，S期細胞比例顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;G2/M期細胞比例無明顯變化（P>0.05）;細胞凋亡率顯著降低，Bax蛋白水平顯著降低，Bcl-2蛋白水平顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖4，表7。

3? 討論

瘢痕疙瘩成纖維細胞過度增殖與細胞外基質(zhì)過量沉積可造成瘢痕疙瘩的形成，目前臨床主要采用藥物進行預(yù)防及治療，但治療效果不佳，因而尋找治療效果好且副作用小的藥物具有重要意義，苦參堿、辣椒素等藥物具有抗炎、止癢、抗腫瘤等作用，可明顯抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖[9-10]。因而本研究仍積極探尋新型治療藥物并探究其可能作用機制，為提高瘢痕疙瘩的治療效果提供參考依據(jù)。

重樓是治療腫瘤的重要藥物之一，其具有清熱解毒、消腫止痛等作用，重樓皂苷Ⅰ是重樓的主要活性物質(zhì)，其具有抗腫瘤等作用，并可作用腫瘤細胞凋亡及抑制細胞增殖[11-13]。與上述研究結(jié)果相似，本研究結(jié)果顯示不同濃度的重樓皂苷Ⅰ處理后細胞存活率顯著降低，G0/G1期細胞比例顯著升高，S期細胞比例顯著降低，且隨著藥物劑量的增加而明顯變化，提示重樓皂苷Ⅰ可抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖，并可誘導(dǎo)細胞周期阻滯于G1期，且呈劑量依賴性。Bcl-2屬于抗凋亡蛋白，Bax屬于促凋亡蛋白，Bax表達上調(diào)可通過促進線粒體釋放細胞色素C而激活Capase級聯(lián)反應(yīng)從而促進細胞凋亡[14]。本研究結(jié)果顯示不同濃度的重樓皂苷Ⅰ處理后瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡率顯著升高，Bax表達上調(diào)，Bcl-2表達下調(diào)，且隨著藥物劑量的增加而顯著變化，提示重樓皂苷Ⅰ可促進瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡，且呈劑量依賴性。

LncRNA CEBPA-AS1在口腔鱗狀細胞癌中表達上調(diào)，其高表達量與口腔鱗狀細胞癌患者預(yù)后不良相關(guān)，并可能通過CEBPA/Bcl2促進腫瘤發(fā)生[15]。本研究結(jié)果顯示不同濃度的重樓皂苷Ⅰ處理后LncRNA CEBPA-AS1的表達水平顯著降低，且隨著藥物劑量的增加而顯著降低，提示重樓皂苷Ⅰ可能通過下調(diào)LncRNA CEBPA-AS1的表達從而發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示干擾LncRNA CEBPA-AS1表達后瘢痕疙瘩成纖維細胞存活率顯著降低，G0/G1期細胞比例顯著升高，S期細胞比例顯著降低，細胞凋亡率顯著升高，Bax表達上調(diào)，Bcl-2表達下調(diào)，提示干擾LncRNA CEBPA-AS1表達可抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖、誘導(dǎo)細胞周期阻滯，誘導(dǎo)細胞凋亡。同時本研究采用雙熒光素酶報告實驗與qRT-PCR實驗證實LncRNA CEBPA-AS1可靶向結(jié)合miR-195-5p，并可負向調(diào)控miR-195-5p的表達。研究表明miR-195-5p在非小細胞肺癌中可能發(fā)揮抑癌基因作用[16]。沉默AGAP2-AS1可能通過上調(diào)miR-195-5p的表達從而抑制子宮內(nèi)膜癌細胞遷移及侵襲[17]。本研究結(jié)果顯示不同濃度的重樓皂苷Ⅰ處理后瘢痕疙瘩成纖維細胞中miR-195-5p的表達水平顯著升高，且隨著藥物劑量的增加而顯著升高，提示重樓皂苷Ⅰ可能通過上調(diào)miR-195-5p的表達從而發(fā)揮作用。為進一步探究重樓皂苷Ⅰ是否可通過調(diào)控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路而發(fā)揮作用，本研究將LncRNA CEBPA-AS1過表達載體與重樓皂苷Ⅰ共同處理瘢痕疙瘩成纖維細胞，結(jié)果顯示細胞存活率顯著升高，G0/G1期細胞比例顯著降低，S期細胞比例顯著升高，細胞凋亡率顯著降低，Bax蛋白水平顯著降低，Bcl-2蛋白水平顯著升高，提示LncRNA CEBPA-AS1過表達可降低重樓皂苷Ⅰ對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及凋亡的作用。

綜上所述，重樓皂苷Ⅰ可抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及促進細胞凋亡，其作用機制可能為通過下調(diào)LncRNA CEBPA-AS1的表達而上調(diào)miR-195-5p的表達從而發(fā)揮作用，可為進一步揭示瘢痕疙瘩發(fā)病機制奠定實驗基礎(chǔ)，還可為闡釋重樓皂苷Ⅰ治療瘢痕疙瘩的分子機制提供參考依據(jù)。

[參考文獻]

[1]鄒崎葩，凌鏡，劉朝東.地西他濱抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的實驗研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2015，35（2）：210-215.

[2]呂經(jīng)緯，王佳婧，胡剛.谷甾醇-3-O-葡萄糖苷對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖、凋亡及膠原合成的影響[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2017，27（12）：49-53.

[3]付昱，張良，陳娜，等.黃芪總苷液對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖凋亡的影響[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017，46（6）：746-748.

[4]鄧碧凡，廖敏，邱榮敏，等.重樓皂苷Ⅰ對低氧喉癌Hep-2細胞增殖和HIF-1α、VEGF表達的影響[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，51（11）：1613-1617.

[5]Wu C，Tang ZY，Chen HY，et al.High-expression of lncRNA CEBPA-AS1 promotes liver cancer progression[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci，2019，23（19）：8295-8302.

[6]Long Z，Wang Y.miR-195-5p suppresses lung cancer cell proliferation， migration， and invasion via FOXK1[J].Technol Cancer Res Treat，2020，19（1）：1-13.

[7]康春福，陳斌，秦澤蓮，等.丹參酮ⅡA 磺酸鈉在低氧下對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖和促纖維化因子表達的影響[J].中國微創(chuàng)外科雜志，2015，15（7）：649-654.

[8]龍劍文，羅晶，尹緒文.重樓皂苷Ⅰ通過抑制PI3K/Akt/mTOR通路誘導(dǎo)人黑素瘤A375細胞凋亡與自噬[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2019，33（8）：863-868.

[9]徐志山，王洪一，鐘黎明，等.苦參堿對瘢痕疙瘩成纖維細胞生長的抑制作用實驗研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2018，27（10）：141-143.

[10]林苗苗，王文波，康文，等.辣椒素抑制體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的實驗研究[J].組織工程與重建外科雜志，2017，13（1）：5-12.

[11]羅吉，羅燕，李勇敏，等.重樓皂苷Ⅰ對結(jié)腸癌HCT116細胞凋亡及Bax，Bcl-2，Caspase-3蛋白表達的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2018，24（6）：172-176.

[12]胡煒彥，李菊，賀智勇，等.重樓皂苷Ⅰ對人乳腺癌細胞MCF-7體內(nèi)外生長的抑制作用[J].中成藥，2015，37（7）：1582-1585.

[13]陳舒怡，沈自尹，黃建華，等.重樓皂苷Ⅰ通過線粒體碎裂誘導(dǎo)人肺癌NCI-H661細胞凋亡[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（2）：538-541.

[14]Li Y，Liu H，Liang Y，et al.DKK3 regulates cell proliferation， apoptosis and collagen synthesis in keloid fibroblasts via TGF-β1/Smad signaling pathway[J].Biomed Pharmacother，2017，91（1）：174-180.

[15]Guo Y， Ma Y， Hu X， et al. Long non-coding RNA CEBPA-AS1 correlates with poor prognosis and promotes tumorigenesis via CEBPA/Bcl2 in oral squamous cell carcinoma[J].Cancer Biol Ther，2018，19（3）：205-213.

[16]Du W，Liu T，Zhang Y，et al.MiR-195-5p is a potential factor responsible for CPNE1 differential expression between subtypes of non-small cell lung cancer[J].J Cancer，2020，11（9）：2610-2620.

[17]Shen S，Li K，Liu Y，et al.Silencing lncRNA AGAP2-AS1 upregulates miR-195-5p to repress migration and invasion of EC Cells via the decrease of FOSL1 expression[J].Mol Ther Nucleic Acids，2020，20（1）：331-344.

[收稿日期]2020-08-13

本文引用格式：張翠，王珺，王凱波，等.重樓皂苷Ⅰ通過調(diào)控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及促進細胞凋亡的初步研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2021，30（9）：12-16.